毛酸浆果提取物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

王健，王萍

（东北林业大学林学院，黑龙江省森林食品资源利用重点实验室，黑龙江哈尔滨 150000）

巨噬细胞是机体最重要的免疫细胞类型之一[1]。在胞外微环境、内分泌、异源物质和衰老等条件刺激下，巨噬细胞具有免疫防御、监视、调节等免疫功能，它通过吞噬作用[2]和分泌多种细胞因子，如炎性介质一氧化氮（NO）、前列腺素E2（PEG2）、肿瘤因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）等[3]调控机体的免疫应答，适度调控巨噬细胞的活化对于提高机体的免疫力也有重要意义[4]。巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分，免疫细胞功能或活性增强，则机体免疫力相应有所提高[5]。RAW264.7细胞生长速度快，繁殖效果好，已有较多研究通过体外培养RAW264.7细胞，研究植物提取物对RAW264.7细胞的免疫调节作用[6]。

毛酸浆（Physalis pubescensL.）是茄科酸浆属的一年生草本植物，又名洋菇娘，其成熟果实呈金黄色[7]。酸浆作为一种北方地区特有的浆果，具有很高的食用和药用价值[8]，含有人体必需的18种氨基酸、21种微量元素、大量的矿物质、维生素及不饱和脂肪酸等营养物质[9-11]，毛酸浆中的黄酮类、甾体类、苯丙素类、生物碱类、脂肪酸类等多种化学成分具有抗肿瘤[12]、抗菌[13]、抗氧化[14]、降血糖[15]、免疫调节[16]等多种药理活性。张英蕾[17]研究毛酸浆果浆对小鼠非特异性免疫有显著影响，且醇提物的淋巴细胞增殖免疫活性大于水提物。Wang等[18]研究毛酸浆果中的醉茄内酯具有很好的抗炎潜力。由此可知，毛酸浆果具有良好的免疫潜力。因此，本文以毛酸浆果提取物（Physalis pubescensL.Fruit Extract，PPFE）为原料，建立巨噬细胞RAW264.7免疫模型，测定一氧化氮、细胞因子、吞噬功能及活性氧等指标，进一步测定其对RAW264.7细胞周期以及凋亡的影响，最后测定TNF-α、IFN-γ、IL-6的mRNA表达，以分析毛酸浆果提取物对RAW264.7细胞的影响，拟为毛酸浆在营养和保健食品、生物化学和医药领域中的应用提供一定理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

RAW264.7细胞，上海吉满生物科技有限公司；DMEM高糖培养基、PBS磷酸盐缓冲溶液、胰蛋白酶-EDTA消化液、脂多糖、MTT、活性氧检测试剂盒、DNA含量检测测试剂盒（细胞周期），北京索莱宝科技有限公司；胎牛血清，浙江天航生物科技有限公司；TNF-α、IL-6、IFN-γ等ELISA试剂盒，泉州科诺迪生物技术有限公司；RNAeasyTMPlus动物RNA抽提试剂盒、BeyoFastTMProbe One-Step qRT-PCR试剂盒、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒，碧云天生物技术有限公司；无水对氨基苯磺酸，天津市大茂化学试剂厂；N-1-萘乙二胺盐酸盐，天津市光复精细化工研究所；磷酸，天津市富宇精细化工有限公司；中性红染色液，上海源叶生物科技有限公司。

1.2 主要仪器设备

旋转蒸发器，上海佑科仪器仪表有限公司；CO2培养箱，美国Thermo Fisher公司；全波长酶标仪，深圳雷杜生命科学有限公司；荧光分光光度计，日本HITACHI公司；CytoFLEX型流式细胞仪，贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司；激光共聚焦显微镜，日本NiKon公司。

1.3 试验方法

1.3.1 毛酸浆果提取物的制备

称取毛酸浆果100 g，以体积分数50%乙醇为提取溶剂，料液比1:10（m/V，g/mL）在室温下浸提4 h后过滤，收集滤液经真空旋转蒸发浓缩，低温烘干脱去水分，再经真空冷冻干燥后得提取物，提取物储存在-20 ℃以备进一步分析使用[17]。

1.3.2 活性成分的测定

1.3.2.1 总多酚含量测定

参考张洋婷等[19]的方法，并略作修改。移取样品液0.5 mL于25 mL容量瓶中，加入5 mL蒸馏水，混匀后加入1 mL福林酚试剂，静置1 min后加入8 mL质量分数10% Na2CO3溶液，加蒸馏水定容至刻度，25 ℃恒温水浴中避光反应30 min后，在765 nm处测定吸光度，以没食子酸溶液质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线为：y=0.098 8x-0.092 6（R2=0.999 3）。根据标准曲线可得其总酚含量，毛酸浆果提取物中总酚含量以毛酸浆果（干重）中总酚的毫克数表示，表示为mg/g。

1.3.2.2 总黄酮含量测定

参考王晶晶[20]的方法，并略作修改。移取样品液2 mL于10 mL具塞比色管中，补充体积分数30%乙醇至5 mL，随后加入质量分数5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，静置5 min，再加入质量分数为10%的硝酸铝溶液0.6 mL摇匀，静置6 min，再加入1 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，定容至10 mL，在510 nm处检测吸光度，以芦丁溶液质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线为：y=0.015x+0.002 3（R2=0.999 5）。根据标准曲线可得其总酚含量，毛酸浆果提取物中总酚含量以毛酸浆果（干重）中总酚的毫克数表示，表示为mg/g。

1.3.2.3 多糖含量测定

多糖采用苯酚-硫酸法测得[21]。

1.3.2.4 活性成分分析

活性成分采用UPLC-Q-TOF-MS分析。色谱条件：色谱柱：BEH C18（100×2.1 mm，1.7 μm）；流动相为0.1% FA-H2O(A)-MeOH(B)，洗脱梯度为：体积分数2% B（0～1 min），2%～98% B（1～12 min），98%～2% B（12～15 min），流量：0.35 mL/min，柱温：40 ℃，自动进样：1 μL。质谱条件：ESI离子源（正负离子），喷雾电压3800/3000 V（+/-），气体温度350 ℃，毛细管温度230 ℃，扫描范围m/z70～100 0。

1.3.3 细胞培养

由质量分数10%胎牛血清与DMEM配制细胞培养液，将细胞接种至含完全培养液T25细胞瓶中，置于37 ℃、体积分数5% CO2细胞培养箱中培养。当细胞密度长至80%时进行传代，用3 mL PBS洗涤两次后，加入500 μL胰酶消化细胞。加入3 mL培养液终止消化，转移至10 mL离心管中，离心（1 000 r/min，5 min），弃去上清液，将细胞沉淀重悬于完全培养液中吹打均匀后，移入培养瓶中[22]。

1.3.4 增殖活性测定

参考Wang等[23]的方法略作修改。取对数生长期细胞，制成每毫升2×105个细胞的细胞悬液，然后以每孔100 μL接种于96孔板中，在细胞培养箱中培养24 h后，每孔加入100 μL不同浓度的样品，每组样品均做六个平行，以加入100 μL不含样品的培养基为空白对照组。继续培养24 h后，加入10 μL MTT溶液（终浓度为5 mg/mL），继续培养4 h后弃上清，每孔加入150 μL DMSO，置于摇床上低速震荡10 min后，在490 nm波长下测定吸光值。细胞增殖率按公式（1）计算：

式中：

Z——细胞增值率，%；

OD实——实验组（毛酸浆果提取物处理组）OD值；

OD空——空白组OD值。

1.3.5 一氧化氮（NO）含量测定

参考Fujiwara等[24]的方法略作修改。细胞在96孔板上按1.3.3分组培养后，同时以加入100 μL LPS（终浓度为0.5 μg/mL）为阳性对照组，按组收集细胞上清液（每组六个平行）。每孔取100 μL的上清液，在室温下分别加入Griess Reagent Ⅰ、Griess ReagentⅡ（每孔50 μL）轻轻混匀后，于37 ℃反应10 min后，在540 nm波长下测定吸光值。

1.3.6 细胞因子测定

按照Elisa试剂盒操作说明，测定TNF-α、IL-6、IFN-γ等细胞因子含量。

1.3.7 TNF-α、IL-6、IFN-γ细胞因子qRT-PCR检测

收集按1.3.3分组培养后的细胞，按照RNA抽提试剂盒操作说明，提取总RNA，再应用一步法qRT-PCR试剂盒，使用qPCR引物在同一反应管内连续进行反转录和荧光定量PCR，采用20 μL反应体系，扩增反应条件为：37 ℃、15 min；95 ℃、2 min；95 ℃、15 s；60 ℃、15 min，总共40个循环。各引物序列如表1，通过通过2-∆∆Ct法计算待测基因的相对表达量。

1.3.8 吞噬功能测定

参考苗月等[25]的方法略作修改。细胞在96孔板上按1.3.4分组培养后，每孔加入100 μL质量分数0.1%中性红溶液，静置20 min后，弃去中性红溶液并用PBS清洗2遍，每孔加入100 μL细胞裂解液，室温下放置2 h，待细胞裂解后，在540 nm波长下测定吸光值。细胞吞噬率按公式（2）计算：

式中：

T——细胞吞噬率，%；

OD实2——实验组（毛酸浆果提取物处理组和脂多糖处理组）OD值；

OD空——空白组OD值。

表1 引物序列表Table 1 Primer sequences used for qRT-PCR

1.3.9 活性氧水平测定

参考Zhang等[26]和Liu等[27]的方法略作修改。取对数生长期细胞，制成每毫升2×105个细胞的细胞悬液，然后以每孔3 mL接种于6孔板中，放入细胞培养箱24 h后，每孔加入3 mL不同浓度的样品，继续培养24 h。去除培养液，每孔加入1 mL适当体积稀释好的DCFH-DA。37 ℃细胞培养箱内孵育20 min。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。随后使用激光共聚焦显微镜（LSCM）直接观察成像情况，收集细胞后用荧光分光光度计检测，并根据公式（3）计算相对ROS水平：

式中：

S——相对ROS水平；

R实——实验组（毛酸浆果提取物处理组和脂多糖处理组）ROS水平；

R对——对照组ROS水平。

1.3.10 细胞周期测定

参考Fu等[28]的方法略作修改。取对数生长期细胞，制成每毫升5×105个细胞的细胞悬液，然后以每孔3 mL接种于6孔板中，放入细胞培养箱24 h后，每孔加入3 mL不同浓度的样品，继续培养24 h。按照细胞周期检测试剂盒说明书进行操作，随后使用流式细胞仪检测细胞周期，得出细胞周期百分比。

1.3.11 细胞凋亡测定

参考Xu等[29]的方法略作修改。取对数生长期细胞，制成每毫升5×105个细胞的细胞悬液，然后以每孔3 mL接种于6孔板中，放入细胞培养箱24 h后，每孔加入3 mL不同浓度的样品，继续培养24 h。按照细胞凋亡检测试剂盒说明书进行操作，用流式细胞仪检测细胞凋亡。

1.4 数据处理

数据结果以平均值±标准差表示，采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，用Origin 2021软件进行图形绘制，以ANOVA进行显著分析。

2 结果与分析

2.1 毛酸浆果提取物中活性成分分析

毛酸浆果提取物中总多酚、黄酮、多糖的含量见表2。由表2可知，毛酸浆果提取物中总多酚含量为7.02 mg/g，黄酮含量为2.81 mg/g，多糖含量为9.57 mg/g。Hossam等[30]对酸浆中活性成分含量进行测定，结果表明总多酚含量最高为125.4 mg/g，黄酮含量为6.39 mg/g，说明酸浆果富含活性物质，具有很高的营养价值，同时也具有潜在的药用特性，如抗氧化、免疫调节、抗菌等。这为进一步研究毛酸浆果提取物对巨噬细胞免疫增强作用提供依据。

表2 毛酸浆果提取物中总酚、黄酮、多糖含量(mg/g)Table 2 The content of total phenols, flavones and polysaccharides in extract of Physalis pubescens L. fruits

表3 PPFE组分UHPLC-Q-TOF-MS分析结果Table 3 Analysis results of PPFE component by UHPLC-Q-TOF-MS

根据质谱数据库对毛酸浆果提取物组成进行定性分析，UPLC-Q-TOF-MS总离子流色谱图见图1。得到相关化合物信息，结果见表3，表中化合物均为黄酮类物质。

图1 PPFE分离组分超高液相色谱与质谱联用分析总离子流色谱图Fig.1 Total ions chromatogram of PPFE component analyzed by UHPLC-Q-TOF-MS

2.2 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响

将5、10、12.5、25、50、100、250、500、100 0、200 0 μg/mL的PPFE浓度处理巨噬细胞24 h后，巨噬细胞细胞毒性和增殖活性见图2。结果显示，在10～500 μg/mL浓度范围内，PPFE对RAW264.7细胞没有毒性作用且细胞活性显著提高（p＜0.05），在25～250 μg/mL浓度范围内，巨噬细胞增殖率分别为130.53%、122.94%、115.94%、107.33%，差异显著（p＜0.05），所以本实验选用25、50、100、250 μg/mL的PPFE作为样品处理浓度进行后续实验。

图2 PPFE对RAW264.7细胞增殖率的影响Fig.2 Effects of PPFE on cell activity in RAW264.7 cells

2.3 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7一氧化氮（NO）分泌的影响

NO是巨噬细胞产生的主要效应分子，不仅参与许多生理和病理活动，而且是巨噬细胞破坏细菌和肿瘤细胞主要媒介。因此，NO可作为测定巨噬细胞活化的定量指标[31]。研究PPFE对RAW264.7细胞分泌NO的影响由图3可知，四个PPFE浓度均能提高RAW264.7细胞NO分泌量。在25～250 μg/mL浓度范围NO释放量分别为27.79、23.05、19.59 μmol/L以及15.18 μmol/L，以剂量依赖方式显著减少（p＜0.05），NO浓度随着PPFE处理浓度的升高而下降，极显著高于空白组7.06 μmol/L（p＜0.01），显著低于LPS阳性对照组（0.5 μg/mL）的45.62 μmol/L（p＜0.01），表明PPFE可以促进RAW264.7细胞NO分泌。因此，可以推断PPFE可以激活RAW264.7细胞发挥免疫作用，并且进行一系列的免疫调控反应。Chen等[32]研究正红菇多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫增强作用，相较于空白组，显著诱导了NO的产生。因此可知，当巨噬细胞被激活后，生成的NO发挥非特异免疫的主要细胞毒效应。NO是成熟单核细胞极化为巨噬细胞后分泌的主要细胞因子或信号分子，发挥机体免疫调节和抑制肿瘤细胞以及病原体增殖功能[33]。

图3 PPFE对RAW264.7细胞NO生成的影响Fig.3 Effects of PPFE on the NO production in RAW264.7 cells

2.4 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7细胞因子分泌的影响

细胞因子是细胞间信息传递的信使，是反映机体免疫应答的重要指标。当机体正常时，适量释放的细胞因子相互调控，激活免疫系统，进而调节机体的免疫功能[34]。如图4，经不同浓度PPFE处理RAW264.7细胞后，TNF-α、IL-6及IFN-γ的分泌量随浓度上升呈下降趋势，具有剂量依赖性，均极显著高于空白组（p＜0.01），在25 μg/mL时有最大释放量，分别为150.54、15.41、119.36 pg/mL。同时，LPS阳性对照组处理的细胞因子分泌量分别为158.32、17.06、123.13 pg/mL。Mao等[35]研究台湾紫丹水提物对巨噬细胞免疫应答调控的影响，结果表明紫丹水提物激活巨噬细胞增加TNF-α、IL-6细胞因子的释放，来增强巨噬细胞促炎能力，从而增强个体宿主的免疫反应。本实验研究得到了类似的结果，PPFE可以对RAW264.7细胞产生免疫刺激影响，使之分泌较高水平的细胞因子，并专职提呈抗原，参与正向免疫应答，发挥免疫监视的功能[36]。

图4 PPFE对RAW264.7细胞IL-6、TNF-α、IFN-γ生成的影响Fig.4 Effects of PPFE on the IL-6, TNF-α and IFN-γ production in RAW264.7 cells

2.5 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7细胞因子mRNA表达的影响

为明确PPFE免疫分子作用机制，采用qRT-PCR检测细胞因子合成基因的表达。由图5可知，LPS阳性对照组细胞中TNF-α、IFN-γ和IL-6的相对表达量极显著（p＜0.01）高于毛酸浆果提取物处理组。同时，经不同质量浓度PPFE处理后，细胞因子mRNA相对表达量呈剂量依赖性，与空白组相比，25 μg/mL PPFE对TNF-α、IFN-γ、IL-6细胞因子的表达均显著增加（p＜0.01）且与LPS组最为接近，相对表达量为分别为26.17、24.70、11.39。TNF-α、IFN-γ、IL-6是巨噬细胞分泌的主要细胞因子，发挥机体免疫调节和抑制肿瘤细胞以及病原体增殖功能[37]。有文献[38]指出，浆果含丰富的酚类、黄酮类、多糖类、含氮成分等植物化学物质，常与人类健康相关。浆果不仅影响癌变细胞，甚至影响免疫细胞，同时，浆果复合的植物化学物质提供了比高浓度单一成分更有效的免疫刺激，由此可见，PPFE可能通过提高巨噬细胞对细胞因子合成基因的表达，促进巨噬细胞成熟，调节巨噬细胞的免疫能力。

图5 PPFE对RAW264.7细胞TNF-α（a）、IFN-γ（b）、IL-6（c）mRNA表达的影响Fig.5 Effects of PPFE on the expression of TNF-α (a), IFN-γ (b)and IL-6 (c) mRNA in RAW264.7 cells

2.6 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7吞噬能力的影响

巨噬细胞在炎症的发生、维持、宿主防御等方面起着至关重要的作用[39]，其吞噬功能是机体最重要的非特异性免疫反应之一[40]。巨噬细胞对异物的吞噬能力，也一定程度上反应了巨噬细胞的活力。如图6所示，与空白组相比，不同浓度PPFE处理RAW264.7细胞后，细胞的吞噬率增加，并呈一定的剂量-效力关系。在25～250 μg/mL浓度范围内下吞噬率分比为189.88%、151.49%、143.56%、128.85%，且极显著（p＜0.01）高于空白组（110.66%）与LPS阳性对照组（164.44%），表明PPFE能够有效激活RAW264.7细胞，增加巨噬细胞吞噬能力。李芳宇等[41]研究发现人参根提取物，可促进巨噬细胞增殖以及吞噬能力增强。吞噬作用是巨噬细胞等吞噬细胞清除外源性病原微生物和内源性衰老和死亡细胞的重要手段，从而达到免疫调节作用。本文通过中性红吞噬法，检测PPFE对RAW264.7细胞吞噬功能的影响，得出相似结果。活化的巨噬细胞最显著的特征之一是吞噬作用的激增，这是巨噬细胞对病原体和癌细胞反应的第一步和重要的步骤。吞噬作用是消除病原体的主要系统，可提高宿主对微生物感染的先天免疫应答。

图6 PPFE对RAW264.7细胞吞噬能力的影响Fig.6 Effects of PPFE on the pinocytic capability of RAW264.7 cells

2.7 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7活性氧（ROS）生成的影响

为探究PPFE对RAW264.7细胞产生ROS的影响，用荧光探针DCFH-DA标记PPFE处理24 h后的RAW264.7细胞。如图7a所示，与空白组相比，25～250 μg/mL的PPFE处理RAW264.7细胞后，相对ROS水平极显著增加（p＜0.01），并随着浓度上升呈下降趋势。相对ROS水平分别为137.75%、131.77%、126.66%、114.62%，LPS阳性对照组相对ROS水平为136.50%。DCFH被细胞内活性氧氧化为DCF，产生绿色荧光，荧光强度可显示活细胞内活性氧的水平[42]。Waqas等[43]研究绿包藤提取物可以显著增加巨噬细胞ROS的产生，ED50值为24.23 μmol/L。在巨噬细胞中，ROS是分化、激活和功能的关键功能效应因子。本实验得到了相似结果，由7b～7e图可知，LSCM观察显示，与空白组相比，PPFE处理24 h的细胞中的ROS量明显增加。说明，PPFE处理24 h可促进RAW264.7细胞内ROS的产生。活性氧作为细胞复杂的信号传递网络的中心参与者，适量的ROS可以介导细胞信号传递的调节，激活免疫反应信号[44]。因此，推测出PPFE可以刺激巨噬细胞通过释放各种高活性的非特异性细胞毒介质，如NO、活性氧等，从而增强机体非特异性免疫功能。

图7 （a）PPFE对巨噬细胞ROS生成的影响，（b～e）用PPFE和LPS处理24 h后RAW264.7细胞的LSCM图像Fig.7 (a) Effects of PPFE on the pinocytic capability in RAW264.7 cells, (b～e) LSCM images of RAW 264.7 cells treated with PPFE and LPS for 24 h

2.8 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7细胞周期的影响

本文探究PPFE对RAW264.7细胞周期分布的影响，检测结果如图8和表4所示。与空白组相比，经25 μg/mL和250 μg/mL PPFE处理24 h后，RAW264.7细胞于G0/G1期所占百分比下降，分别减少到53.08%和56.30%。同时发现，S期和G2/M期所占百分比上升，由空白组的14.08%、26.68%，分别增加到17.40%、29.52%和15.48%、28.22%。当PPFE质量浓度为25 μg/mL时，各时期的变化趋势与LPS阳性对照组最接近。Sérgio等[45]研究报道，用酸浆乙醇提取物处理诱导淋巴细胞周期停滞在G1期，且在S期的比例增加，加快淋巴细胞凋亡的进程。在细胞周期中，G1期主要合成RNA和核糖体，S期主要是DNA复制、组蛋白和酶的合成；G2期为有丝分裂的准备期。G0期细胞大量存在，则不利于细胞进行有丝分裂[46]。根据结果可知，PPFE可以调节RAW264.7细胞周期分布比例，防止RAW264.7细胞阻滞于G0/G1期，促使巨噬细胞在G1期向G2期和S期转化，促进巨噬细胞生长增殖，使之更好的发挥免疫调节作用。

表4 PPFE对RAW264.7细胞周期的影响（%）Table 4 Effects of PPFE on the cell cycle of RAW264.7 cells

图8 （a）PPFE对RAW264.7细胞周期的影响，（b～e）PPFE和LPS处理24 h后RAW264.7细胞的FCM图像Fig.8 (a) Effects of PPFE on the cell cycle of RAW264.7 cells,(b～e) FCM images of RAW264.7 cells treated with PPFE and LPS for 24 h

2.9 毛酸浆果提取物对巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响

PPFE对RAW264.7细胞凋亡的影响见图9a。25 μg/mL和250 μg/mL PPFE处理组RAW264.7细胞凋亡率分别为16.50%、23.68%，与空白对照组34.94%凋亡率相比，极显著降低（p＜0.01），LPS阳性对照组凋亡率为9.48%。由图9b～9e可知，流式细胞仪观察显示，PPFE处理组正常具有细胞活性且可增殖的细胞比例显著高于空白组（p＜0.01）。表明PPFE可减缓RAW264.7细胞凋亡，凋亡结果与增殖率结果相对应。因此可知，PPFE可缓解巨噬细胞凋亡进程，促进其分化增殖，从而增强个体宿主免疫调控应答。

图9 （a）PPFE对RAW264.7细胞细胞凋亡的影响，（b～e）PPFE和LPS处理24 h后RAW264.7细胞的FCM图像Fig.9 (a) Effects of PPFE on the apoptosis of RAW264.7 cells,(b～e) FCM images of RAW264.7 cells treated with PPFE and LPS for 24 h

3 结论

本研究测定了毛酸浆果提取物中总多酚、黄酮以及多糖的含量，通过UPLC-Q-TOF-MS分析，共鉴定出14种黄酮成分。并基于RAW264.7巨噬细胞免疫模型探究PPFE免疫调节作用，得出PPFE提高RAW264.7巨噬细胞中NO、TNF-α、IFN-γ、IL-6、ROS等免疫信号分子含量以及吞噬功能，PPFE能够减轻RAW264.7细胞凋亡情况，促进其分化增殖，同时PPFE可缓解RAW264.7细胞阻滞于G0/G1期，使细胞正常的进行分化繁殖，PPFE使RAW264.7巨噬细胞在基因表达层次上促进TNF-α、IFN-γ、IL-6，文中探讨了PPFE功能组分和体外免疫增强作用，而PPFE物质分离、结构表征和在通路水平上免疫影响有待后续的研究。