GC法测定托伐普坦起始物料中3种有机溶剂残留

周旭，兰公剑，廖娟

GC法测定托伐普坦起始物料中3种有机溶剂残留

周旭，兰公剑，廖娟

（南京正大天晴制药有限公司，江苏 南京 210046）

建立了以毛细管气相色谱法测定托伐普坦起始物料中残留溶剂的方法。采用Agilent DB-WAX（60 m×0.32 mm，0.5 μm）毛细管柱，载气为氮气，采用氢火焰离子化检测器（FID）。结果表明：3种溶剂分离效果良好；在限度浓度10%～200%范围内线性关系良好，≥0.999；回收率均值分别为105.3%、106.0%、105.2%，均小于10.0%（=9）。该方法准确可靠，可用于托伐普坦起始物料残留溶剂的测定。

托伐普坦起始物料；毛细管气相色谱法；质量控制；残留溶剂

托伐普坦片，商品名为苏麦卡，是由日本大冢制药株式会社研发的血管升压素V2受体拮抗剂药物[1-2]。托伐普坦片在临床上用于治疗正常容量或高容量低钠血症，特别适用于心衰合并低钠血症水肿的患者[3-5]。由于其为全球首个血管加压素受体拮抗剂药物，且为口服，不良反应轻，应用前景广阔[6-8]。

在托伐普坦合成过程中，苯并七元环的构建是一个难点[9-11]，参考人用药品注册技术国际协调会议（ICH）Q7与Q11的相关要求，选择7-氯-1,2,3, 4-四氢苯并[b]氮杂卓-5-酮作为托伐普坦的起始物料之一。其合成过程使用了吡啶、,-二甲基甲酰胺（DMF）和醋酸，可能残留至托伐普坦原料药中。因此在起始物料中对上述残留溶剂进行控制，有助于提高原料药的质量和药品安全。根据中国药典通则要求，建立了该起始物料残留溶剂的分析方法。

1 实验部分

1.1 仪器

GC-2010型气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID），LabSolution工作站，日本岛津公司；Agilent 7890A型气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID），Ezchrom工作站，美国安捷伦公司；梅特勒托利多XP205DR型十万分之一电子天平；赛多利斯MSU225P型十万分之一电子天平。

1.2 试药

甲醇、DMF，色谱级，美国TEDIA试剂公司；吡啶，ACS级，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；醋酸，色谱级，美国ROE试剂公司；起始物料（某公司），批号：TF05K1707002、TF05K180401、TF05-180604t、TF05-1807002。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：以聚乙二醇为固定液（DB-WAX，60 m×0.32 mm，0.5 μm）的毛细管柱为色谱柱。

起始柱温为40 ℃，维持4 min，以每分钟20 ℃升温至140 ℃，维持6 min，再以每分钟20 ℃升温至210 ℃，维持5 min。

进样口温度为200 ℃，检测器温度为250 ℃，进样量为1 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液的制备

分别取吡啶、DMF、醋酸各适量，精密称定，用甲醇定量稀释制成每1 mL中约含吡啶0.1 mg、DMF 0.44 mg、醋酸2.5 mg的混合溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密量取对照品贮备液适量，用甲醇定量稀释制成每1 mL中约含吡啶10 μg、DMF 44 μg、醋酸250 μg的混合溶液。

2.2.3 定位溶液的制备

分别取吡啶、DMF、醋酸各适量，用甲醇稀释制成每1 mL中约含吡啶10 μg、DMF 44 μg、醋酸250 μg的溶液。

2.2.4 供试品溶液的制备

取本品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1 mL中约含25 mg的溶液。

2.2.5 加标供试品溶液的制备

取供试品约500 mg，精密称定，置20 mL量瓶，加适量甲醇使溶解，精密量取并加入对照品贮备液1 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 专属性

精密量取空白溶剂、定位溶液、对照品溶液、供试品溶液与加标供试品溶液各1 μL，分别进样分析，记录色谱图。结果表明，甲醇对检测无干扰，供试品溶液中无未知杂质干扰检测；吡啶、DMF与醋酸间分离度均符合要求，该方法专属性良好。

2.4 线性与范围

精密量取对照品贮备液适量，用甲醇稀释制成相当于限度质量浓度20%～200%的线性系列溶液。精密量取各线性溶液1 μL，进样分析，记录色谱图，以质量浓度为横坐标，被测峰面积为纵坐标，对待测组分进行线性回归处理。试验结果见表1。结果表明，各溶剂峰面积与质量浓度之间成良好的线性关系。

表1 线性范围及回归方程

2.5 定量限与检测限

分别取吡啶、DMF、醋酸各适量，精密称定，用甲醇逐级稀释至/＞10时，作为定量限溶液；稀释至/＞3时，作为检测限溶液。分别精密量取待测溶液各1 μL，进样分析，记录色谱图。结果表明，吡啶、DMF、醋酸定量限质量浓度分别为0.454、1.157、3.994 μg·mL-1；峰面积值（=6）分别为9.2%、8.3%、19.4%，均小于20.0%；保留时间值（=6）均为0.1%，均小于1.0%；/值均在10.5～21.1范围内；检测限质量浓度分别为0.136、0.347、1.198 μg·mL-1；/值均在3.4～5.1。该方法灵敏度良好。

2.6 准确度

对照品与供试品溶液：照“2.2溶液的制备”项下配制。

回收率溶液：分别称取起始物料样品约 500 mg，精密称定，置20 mL量瓶，加适量甲醇溶解，分别精密量取并加入“2.2溶液的制备”项下对照品贮备液1、2、3 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各质量浓度平行配制3份。

分别精密量取上述待测溶液1 μL，进样分析，记录色谱图。结果表明，吡啶、DMF、醋酸回收率均值分别为105.3%、106.0%、105.2%；各溶剂回收率均在80.0%～120.0%范围内；回收率值（=9）分别为2.1%、2.1%、3.6%，均小于10.0%。该方法准确度良好。

2.7 精密度

2.7.1 仪器精密度

取“2.4线性与范围”项下L-100%溶液作为检测溶液，按“2.1色谱条件”项下方法进行分析，记录色谱图。结果表明，吡啶、DMF、醋酸峰面积值（=6）分别为1.4%、1.4%、1.6%，均小于5.0%；保留时间值（=6）均为0.1%，均小于1.0%。仪器进样精密度良好。

2.7.2 重复性

对照品与加标供试品溶液按照“2.2溶液的制备”项下配制。按“2.1色谱条件”项下方法进行分析，记录色谱图。结果表明，吡啶、DMF、醋酸残留量均值分别为0.02%、0.091%、0.5%；值（=6）分别为1.0%、1.3%、1.2%，均小于10.0%。该方法重复性良好。

2.7.3 中间精密度

不同日期不同分析人员，重新配制6份加标供试品溶液，使用不同仪器进行重复性试验。按“2.1色谱条件”项下方法进行分析，并记录色谱图。 12份样品检测结果表明，吡啶、DMF、醋酸残留量均值分别为0.02%、0.093%、0.5%；值（=12）分别为7.2%、2.5%、2.9%，均小于15.0%。该方法中间精密度良好。

2.8 溶液稳定性

对照品与供试品溶液氨氮照“2.2溶液的配制”项下配制。室温条件下，分别在放置0、2、4、8、12、16、24 h后测定，考察供试品溶液中各溶剂含量和对照品溶液中各溶剂峰面积的变化情况。按“2.1色谱条件”项下方法进行分析，记录色谱图。结果表明，对照品溶液：吡啶、DMF、醋酸峰面积与0 h比值范围分别为96.0%～101.3%、95.3%～100.3%、93.9%～99.9%，均在90.0%～110.0%以内，说明对照品溶液在室温条件下放置24 h内稳定；供试品溶液：不同时间点吡啶、DMF、醋酸均未检出，说明供试品溶液在室温条件下放置24 h内稳定。

2.9 耐用性

适当调整色谱条件（流速±0.3 mL·min-1、进样口温度±10 ℃、检测器温度±10 ℃、起始柱温±5 ℃、分流比±2），取“2.2溶液的配制”项下配制的对照品与加标供试品溶液各1 μL，进样分析，记录色谱图。结果表明，对照品溶液中各溶剂之间的分离度均符合要求，加标供试品溶液中各溶剂的检测结果无显著差别。该方法耐用性良好。

2.10 样品的测定

取不同批次供试品，照“2.2溶液的配制”项下配制对照品与供试品溶液，分别取1 μL，进样分析，记录色谱图。结果表明，各批次吡啶、DMF、醋酸均未检测，符合中国药典2020年版四部通则中对残留溶剂的限度要求。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

根据供试品与待测溶剂的理化性质，分别考察供试品在水、二甲基亚砜和甲醇中的溶解性。结果表明，供试品在二甲基亚砜和甲醇溶解性良好。分别以上述两种溶剂配制样品并检测，发现二甲基亚砜中存在未知峰干扰DMF的检测，故选用甲醇作为溶剂。

3.2 色谱柱的选择

由于醋酸在气相色谱柱中通常峰形差、保留弱，因此对不同极性色谱柱进行筛选，分别考察DB-1、DB-624和DB-WAX等色谱柱。结果表明，醋酸在极性色谱柱（DB-WAX）中峰形较好，保留适宜，各溶剂均能完全分离，故选用DB-WAX色谱柱。

3.3 进样方式的选择

由于吡啶的限度浓度较低，为了保证检测的灵敏度，分别考察直接进样与顶空进样。结果表明，两种进样方式的灵敏度均符合要求，样品检测结果一致，因直接进样检测效率更高，故选择直接进样。

4 结 论

本文建立的方法具有专属性好、准确度高与耐用性好等优点，能够快速准确的完成检测要求，适用于托伐普坦起始物料的残留溶剂检测，为其提供了有效的质控方法。

[1] 杨妙. 托伐普坦的合成研究[D]. 天津：天津医科大学，2010.

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[11] 胡国宜，胡锦平，高永清，等.高纯度托伐普坦的制备方法：CN107663171A[P]. 2018-02-06．

Determination of Residual Organic Solvents in Tolvaptan Starting Material by GC

,,

（Nanjing Chia-Tai Tianqing Pharmaceutical Company, Nanjing Jiangsu 210046, China）

A capillary GC method for the determination of residual organic solvents including pyridine,,- dimethylformamide (DMF) and acetic acid in tolvaptan starting material was established. The column was DB-WAX column(60m×0.32mm,0.5μm), using N2as carrier gas. FID was used as detector. The 3 residual organic solvents were completely separated, and the linear relationship was good (≥0.999). The average recoveries (=9) of these 3 solvents were 105.3%,106.0%,105.2%, respectively (≤10.0%,=9). This method has good precision and high accuracy, which can be used for the determination of the residual organic solvents in tolvaptan starting material.

Tolvaptan starting material; GC; Quality control; Residual organic solvents

O657.7

A

1004-0935（2023）09-1396-03

2022-08-30

周 旭（1991-），男，江苏省南京市人，工程师，硕士，2017年毕业于中国药科大学生药学专业，研究方向：药物分析。

兰公剑（1981-），男，工程师，硕士，研究方向：药物分析。