miR-146a及MUC5AC在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及临床意义

王忠巧　高妍　司峰志

【摘要】 目的：探討微小RNA-146a（miR-146a）及黏蛋白5AC（MUC5AC）在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及其临床意义。方法：选取2022年1月—2023年1月新疆医科大学第二附属医院耳鼻喉科所收治的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者40例（观察组）及同期因鼻外伤、鼻中隔偏曲、单纯鼻窦囊肿接受手术治疗患者40例（对照组）。检测对照组鼻黏膜组织和观察组鼻息肉组织的miR-146a水平及MUC5AC水平，并分析两组的VAS评分、鼻内镜评分，以及鼻息肉组织的miR-146a、MUC5AC表达水平与VAS评分、鼻内镜评分、炎症细胞百分比的相关性。结果：观察组miR-146a水平低于对照组，MUC5AC水平高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；鼻息肉组织中的miR-146a水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈负相关（r=-0.637、-0.339，P<0.05），而MUC5AC水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈正相关（r=0.525、0.471，P<0.05）；miR-146a的表达水平与嗜酸性粒细胞的百分比呈负相关（r=-0.701，P<0.05），MUC5AC的表达水平与嗜酸性粒细胞百分比呈正相关（r=0.587，P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表达水平与中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均无相关性（P>0.05）。结论：在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉疾病诊断中，鼻息肉组织的miR-146a水平低表达及MUC5AC水平高表达均提示病情加重，均与组织炎性程度有关。

【关键词】 miR-146a水平 MUC5AC水平 慢性鼻-鼻窦炎 鼻息肉 相关性

The Expression and Clinical Significance of miR-146a and MUC5AC in Chronic Sinusitis with Nasal Polyps/WANG Zhongqiao， GAO Yan， SI Fengzhi. //Medical Innovation of China， 2024， 21（05）： -138

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of microRNA-146a （miR-146a） and mucin 5AC （MUC5AC） in chronic sinusitis with nasal polyps. Method： From January 2022 to January 2023， 40 patients with chronic rhinosinusitis with nasal polyps admitted to the Department of Otolaryngology， the Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University （the observation group） and 40 patients with nasal trauma， deflection of the nasal septum， and simple sinus cyst received surgery at the same time （the control group） were selected. The miR-146a and MUC5AC levels in the control group nasal mucosal tissue and the observation group nasal polyp tissue were detected. The VAS score， nasal endoscopy score， as well as the correlation between miR-146a and MUC5AC expression levels in nasal polyp tissue and VAS score， nasal endoscopy score， and percentage of inflammatory cells in both groups were analyzed. Result： The level of miR-146a in the observation group was lower than that in the control group， and the level of MUC5AC was higher than that in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The level of miR-146a in nasal polyps was negatively correlated with VAS score and nasal endoscopic score （r=-0.637， -0.339， P<0.05）， while the level of MUC5AC was positively correlated with VAS score and nasal endoscopic score （r=0.525， 0.471， P<0.05）. The expression level of miR-146a was negatively correlated with the percentage of eosinophils （r=-0.701， P<0.05）， and the expression level of MUC5AC was positively correlated with the percentage of eosinophils （r=0.587， P<0.05）. The expression levels of miR-146a and MUC5AC were not correlated with the percentage of neutrophils and lymphocytes （P>0.05）. Conclusion： In the diagnosis of chronic sinusitis with nasal polyp tissue diseases， the low expression of miR-146a and the high expression of MUC5AC levels indicate an aggravation of the condition and inflammatory degree.

[Key words] miR-146a level MUC5AC level Chronic rhinosinusitis Nasal polyp Correlation

慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉是临床上较为常见的一类疾病，多因急性鼻窦炎未及时治疗或反复发作引发呼吸道感染经久不愈所致，会使得患者出现一定程度的头昏头痛、精神萎靡、记忆力退化等症状；部分患者会出现鼻塞，且常伴有脓涕、嗅觉减退；病情严重者易出现疲乏、食欲下降、注意力不集中、失眠等症状，且该病病程一般较长，可长达数十年，并且该病较难治愈，通常会反复发作[1-3]。黏蛋白5AC（MUC5AC）是呼吸道黏液中主要的黏蛋白，在感染、炎症反应等多种因素的影响下，可通过转录、遗传等多种方式实现表达调控，其为鼻腔及鼻腔黏膜的主要成分，若该物质大量生成则很有可能会导致鼻腔及鼻窦内黏液出现引流障碍，进而使得慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织症状加重[4-7]。微小RNA-146a（miR-146a）水平于自身免疫性疾病中的变化或miR-146a基因敲除，均会影响通路相关蛋白的表达，继而影响疾病的进展[8-11]。于此，本研究将对新疆医科大学第二附属医院耳鼻喉科2022年1月—2023年1月所收治的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者40例及同期因鼻外伤、鼻中隔偏曲、单纯鼻窦囊肿接受手术治疗患者40例展开研究，旨在为临床治疗提供借鉴，现研究结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为2022年1月—2023年1月本科所收治的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者40例（观察组）及同期因鼻外伤、鼻中隔偏曲、单纯鼻窦囊肿接受手术治疗患者40例（对照组）。纳入标准：（1）病症均符合临床诊断要求[12]；（2）临床诊断及病例资料均完善；（3）均于研究开展前留有鼻黏膜或鼻息肉组织待测。排除标准：（1）在纳入研究前1个月使用过糖皮质激素；（2）在患有该疾病的同时合并有较为严重的脏器类疾病；（3）有鼻炎、哮喘等可能影响研究结果的疾病；（4）精神功能异常或认知功能障碍，不能有效配合本次研究的开展。本研究经医院医学伦理委员会审批。患者知情同意本研究。

1.2 方法

miR-146a水平表达检测：取对照组鼻黏膜组织及观察组鼻息肉组织展开检测，试剂盒为miR提取分离试剂盒，测定样本组织中的miR。使用miR cDNA第一链合成试剂盒进行反转录反应及合成miR所对应的cDNA，本次所选用的试剂盒均来自北京天根公司。使用miR荧光定量检测试剂盒进行PCR检测，根据说明书配置反应20 μL的体系，分别使用miR-146a、U6的特异性引物，于PCR仪上进行40个循环的扩增反应，最后根据循环所得曲线计算miR-146a水平表达结果。在操作过程中应当注意要经常更换新手套，避免皮肤表面的细菌造成待测组织的感染；为防止造成交叉感染，可使用无核苷酸酶的塑料制品及枪头；RNA于裂解液中不会被RNase降解，但提取后继续处理时应使用不含RNase的塑料及玻璃器皿。玻璃器皿可于150 ℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，再以清水清洗，灭菌，便能消除RNase。

MUC5AC水平表达检测：取对照组鼻黏膜组织及观察组鼻息肉组织展开检测，在两组待测组织样本中添加RIPA裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-IP）和ELISA等。采用BCA试剂盒检测蛋白含量，将含有20 μg蛋白的样本用于测定MUC5AC表达，将待测样本添加SDS-聚丙烯酰胺凝胶，电泳、电转PVDF膜，5%脱脂牛奶室温孵育60 min，并依照1∶1 000的比例稀释稀释患者的MUC5AC，1∶2 000的比例稀释二抗，室温孵育60 min，于凝胶成像系统的显影中获得所需的MUC5AC及β-actin的蛋白条带，其表达水平便可依据蛋白条带上的灰度值计算。为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用，实验期间全程佩戴一次性手套。

1.3 观察指标及评价标准

（1）miR-146a水平及MUC5AC水平。（2）VAS評分：采用VAS评分量表从鼻塞、瘤体、头痛或头晕、面部胀痛、嗅觉减退5个项目评价患者的症状情况，量表总分为10分，每个项目2分，得分越高即表示患者症状越严重[13]。（3）鼻内镜评分：依照Lund-Kennedy评分标准对鼻内镜展开评分，评价项目包括息肉、水肿、鼻漏、瘢痕、结痂5个方面，每个方面得分0～2分，且两侧均展开评价，该量表总分为20分，得分越高即表示患者病情越严重[14]。（4）炎症细胞检测：嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞。

1.4 统计学处理

所得数据运用SPSS 22.0处理，计量资料采用（x±s）进行表述，采用t检验，计数资料采用率（%）表述，采用字²检验，采用直线相关性分析鼻息肉组织的miR-146a、MUC5AC表达水平与VAS评分、鼻内镜评分、炎症细胞百分比的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料对比

对照组男24例，女16例，年龄22～70岁，平均（40.68±9.57）岁，病程6～21周，平均（16.17±1.04）周。观察组男25例，女15例，年龄22～70岁，平均（41.13±9.32）岁，病程5～22 周，平均（17.13±2.12）周。两组性别、年龄对比，差异均无统计学意义（P>0.05）。

2.2 两组miR-146a水平及MUC5AC水平对比

观察组miR-146a水平低于对照组，MUC5AC水平高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 两组VAS评分及鼻内镜评分对比

观察组VAS评分及鼻内镜评分均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 鼻息肉组织中miR-146a、MUC5AC水平与VAS评分及鼻内镜评分相关性分析

经直线相关性分析显示，鼻息肉组织中miR-146a水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈负相关（r=-0.637、-0.339，P<0.05），而MUC5AC水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈正相关（r=0.525、0.471，P<0.05）。

2.5 鼻息肉组织中miR-146a、MUC5AC表达水平与炎症细胞百分比相关性

鼻息肉组织中的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞的百分比分别为（7.87±1.48）%、（7.56±1.29）%、（5.52±0.89）%，直线相关性分析显示，在鼻息肉组织中，miR-146a的表达水平与嗜酸性粒细胞的百分比呈负相关（r=-0.701，P<0.05），MUC5AC的表达水平与嗜酸性粒细胞百分比呈正相关（r=0.587，P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表达水平与中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均无相关性（r=0.043、0.031、0.014、0.005，P>0.05）。

3 讨论

合并鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎是慢性鼻窦炎的一个亚型，鼻息肉在一般情况下会继发于慢性鼻窦炎，并且还有一部分息肉可能是因为变态反应水肿、不明原因等因素所导致的[14]。患得该疾病会导致患者出现头晕头痛、萎靡不振、记忆力变差、疲倦、注意力变差等症状。对患者行鼻腔检查时，常提示中鼻甲呈肥大、水肿或息肉样变化。鼻窦炎若治疗不及时或不当，会累及至邻近组织器官，也会顺管道延伸，继而影响呼吸系统、消化道[15-17]。黏液过度分泌是慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织的主要特征，黏液中的黏蛋白数量增加将会使得黏液黏性增加且弹性提高，进而使得慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织在发病的过程中病情的进一步加重。黏液高黏弹性主要是因为MUC的存在，呼吸道中MUC主要分为3类：第一类分泌但不聚合的粘蛋白（MUC7）；第二类分泌并聚合形成凝胶的粘蛋白（MUC5AC、MUC5B）；最后跨膜结构域且与细胞表面相关的粘蛋白（MUC1、MUC4、MUC16、MUC20）。其中MUC5AC和MUC5B这两种分泌性MUC被认为与呼吸道炎性疾病有密切关系，前者主要表达于气道上皮的杯状细胞上，后者主要表达于黏膜下腺体内，其中MUC5AC是气道主要的黏蛋白类型[18-20]。

在本次研究中，观察组miR-146a水平低于对照组，MUC5AC水平高于对照组；鼻息肉组织中miR-146a水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈负相关，而MUC5AC水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈正相关。miR-146a的表达水平与嗜酸性粒细胞的百分比呈负相关（P<0.05），MUC5AC的表达水平与嗜酸性粒细胞百分比呈正相关（P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表达和中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均无相关性（P>0.05）。因为嗜酸性粒细胞的浸润或可影响MUC5AC、miR-146a的进一步表达，使得鼻黏膜受到刺激，进而加重患者病情，使得患者VAS评分及鼻内镜评分提高。临床相关研究分析ROC曲线后可得，miR-146a及MUC5AC可以作为慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织病情诊断的标志物，对于该疾病的临床诊断也可以提供借鉴，且miR-146a作为一种非编码RNA，能在转录后对于多种基因的水平进行调节，且其生物学作用广泛，具有抗炎意义，可靶向抑制EGFR的表达及减少MUC5AC的水平[21]，与本研究结果相似。

上述研究结果表明，慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织病情的引发及加重与miR-146a水平及MUC5AC水平密不可分，且其还参与调控嗜酸性粒细胞的浸润，是临床用来研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织疾病的一个新靶点。但本次研究仅仅只分析了MUC5AC水平与miR-146a水平在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中可起到一定的调控作用，但仍未明确其直接调控作用及调控机制，可进一步通过细胞实验或动物实验展开進一步的探讨。

参考文献

[1]陈国明.慢性鼻炎鼻窦炎伴鼻息肉手术中鼻甲的处理研究进展[J].中国老年保健医学，2021，19（1）：116-117，120.

[2]白洁，康朋朋，王志平，等.中老年慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉质子泵抑制剂诊断性实验及其与咽喉反流的相关性[J].中国老年学杂志，2022，42（8）：1891-1894.

[3]白芸芸，佘秀梅，乔彦明.鼻内窥镜联合糠酸莫米松治疗慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉的疗效及其对患者远期预后的影响[J].海南医学，2022，33（7）：875-878.

[4]李姗娜，曹世英，蔡铭瑶，等.中药调节慢性阻塞性肺疾病黏蛋白MUC5AC研究进展[J].山西中医，2021，37（11）：60-62.

[5] SONG D，IVERSON E，KALER L，et al.MUC5B mobilizes and MUC5AC spatially aligns mucociliary transport on human airway epithelium[J].Sci Adv，2022，8（47）：eabq5049.

[6] ZHANG Y，QI J，YAN D，et al.HNE induces the hyperexpression of MUC5AC in chronic rhinosinusitis with nasal polyps by activating the TRAF6/Autophagy regulatory axis[J].Am J Rhinol Allergy，2022，36（6）：816-826.

[7] TU Y，LIU J，LI T，et al.Mucus composition abnormalities in sinonasal mucosa of chronic rhinosinusitis with and without nasal polyps[J].Inflammation，2021，44（5）：1937-1948.

[8]白圆圆，郝玥，李呼伦.微小RNA-146a在自身免疫性疾病中的研究进展[J].国际免疫学杂志，2022，45（1）：40-45.

[9] GONG H，CHEN H，XIAO P，et al.miR-146a impedes the anti-aging effect of AMPK via NAMPT suppression and NAD+/SIRT inactivation[J].Signal Transduct Target Ther，2022，7（1）：66.

[10] MAO S，WU J，YAN J，et al.Dysregulation of miR-146a：a causative factor in epilepsy pathogenesis， diagnosis， and prognosis[J].Front Neurol，2023，14（2）：1094709.

[11] WANI J A，MAJID S，KHAN A，et al.Clinico-pathological importance of miR-146a in lung cancer[J]. Diagnostics （Basel），2021，11（2）：274.

[12]潘泽如，陈红先，詹淑洁.慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻内镜术后鼻息肉复发的影响因素[J].医学综述，2021，27（13）：2695-2699.

[13]张辉，张永红，宋攀攀，等.清窦汤用于老年慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻内镜术后的价值研究[J].中國中西医结合耳鼻咽喉科杂志，2022，30（6）：441-445.

[14]胡竞敏，刘铭，刘大有，等.慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者组织嗜酸性粒细胞与血清特异性IgE的相关性[J].中国耳鼻咽喉颅底外科杂志，2023，29（1）：45-48.

[15]周明朗，冀庆军，柴伟，等.基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号途径研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病过程中炎性因子的表达[J].中国耳鼻咽喉头颈外科，2022，29（10）：649-653.

[16]李卫.鼻内镜手术治疗伴与不伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎的临床观察[J].中国处方药，2015，13（3）：105-106.

[17]陈影影，杨花荣，吴云姣.慢性鼻窦炎伴鼻息肉的临床治疗进展[J].医学理论与实践，2023，36（1）：37-39.

[18]魏永佳，李改平.慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉的微小RNA表达及T淋巴细胞亚群分布情况研究[J].中国医刊，2022，57（2）：156-159.

[19]唐进渝，彭丽娟，钟春燕，等.慢性鼻-鼻窦炎患者HIF-1α、FoxM1的表达及其与黏蛋白MUC5AC、MUC5B的相关性[J].西部医学，2023，35（11）：1610-1614.

[20]史志芳，徐泳，姜微.miR-146a及MUC5AC在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中表达的相关性及临床意义[J].安徽医学，2022，43（1）：71-75.

[21]王健，张建钢，黄鑫，等.慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者术前药物治疗方案及疗程的探讨[J].南通大学学报（医学版），2022，42（2）：150-152.