鲎试验法与家兔法同步检测葛根素注射液的比较

王明乐,刘俊芳,崔 淇

葛根素注射液能改善微循环、扩张冠状动脉、增加脑部供血量、减缓心率、降低心肌耗氧指数、抗血管痉挛等。根据中国药典2005年版家兔法,操作复杂、耗时长,本文对鲎试验法与家兔法进行了比较试验,结果如下。

1 主要材料

①鲎试剂:湛江安度斯生物有限公司(批号0711112, 0.25 EU/m L), 湛江博康海洋生物有限公司(批号 0708250, 0.25 EU/m L)。 ②细菌内毒素工作标准品:中国药品生物制品检定所(2007 -6, 100 EU/支)。③细菌内毒素检查用水:湛江安度斯生物制品有限公司(批号0708220,内毒素含量<0.003 EU/mL)。 ④家兔:购于中国人民解放军第150医院实验动物中心。 ⑤样品:葛根素注射液 070908(热原阳性), 070101, 070803,规格:2 m L/支。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度试验按《中国药典》规定方法进行试验,鲎试剂灵敏度均在0.5 ～2.0 λ,结果符合规定。

2.2 限值(L)的确定根据《中国药典》2005年版附录细菌内毒素检查法指导原则,按公式L=K/M计算, K=5 EU/kg/h), M=20 m L/60 kg,求得L=15 EU/m L,本品为联合用药,规定20 m L在 4 h内使用,除安全系数2,确定限值为7.5 EU/m L。

2.3 干扰试验在进行干扰试验前,需进行预实验。即将供试品溶液进行一系列倍数的稀释,使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验,每一稀释倍数下做两支供试品管(NPC)和两支供试品阳性对照(PPC)(即含2.0 λ浓度标准内毒素的该浓度的供试品稀释液),另做两支阴性对照(NC)和两支阳性对照(PC)。当阴性对照为阴性,阳性对照为阳性,实验有效。系列浓度中出现供试品溶液两管为阴性,供试品阳性对照两管为阳性时,认为供试品在该浓度下不干扰试验,此稀释度30倍即为最小不干扰稀释倍数,正式干扰试验中,选择该稀释倍数供试品溶液及检验用水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0,1.0, 0.5, 0.25 λ。……