新生儿血培养出凝固酶阴性葡萄球菌的分析

李天娇,钟海英,郭红荔,黄 涛

(海南省人民医院检验科,海南海口 570311)

新生儿血培养出凝固酶阴性葡萄球菌的分析

李天娇,钟海英,郭红荔,黄 涛

(海南省人民医院检验科,海南海口 570311)

新生儿血培养中分离出凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)一直都占居新生儿血培养分离菌的第一位,但由于CNS是人皮肤正常菌群,在临床新生儿采血过程中由于操作时间延长或是消毒不充分以及采用使用各种侵入性医疗器械时都会造成污染,因此导致血培养中分离出的CNS常见是污染菌,但又由于CNS可以产生毒力因子而具有严重的致病性,并且随着CNS耐药性的不断增加,对于抵抗力弱的新生儿群体,它的致病性更显突出。因此,在临床工作中新生儿血培养中分离出CNS是污染菌还是病原菌一直困扰着很多临床医生和实验室工作者;根据菌血症病原菌的实验室标准包括血培养在入院后48小时内阳性和多次血培养为同一细菌判断为病原菌,3天以上阳性的CNS,或培养出多种皮肤寄居菌,或血培养虽多次呈阳性,但属不同种的CNS或其他细菌等提示为污染[1,2]。我们综合文献推荐的标准,制定出一套实验室评估标准,并对血培养分离出CNS以评估为病原菌或是污染菌;

1 对象与方法

1.1 对象 选择我2007年1月到2009年12月我实验室新生儿科血培养样品1 789份,并对分离出113株CNS作为研究对象。

1.2 采血方法 在患儿住院抗感染药物使用前或非感染性疾病患儿在住院过程中怀疑感染时进行血培养,对患儿进行局部消毒后在无菌操作下经桡动脉或股静脉取血2-5 ml加入Bact/Alert-120仪器配套的需氧血瓶中半小时内送检实验室。

1.3 仪器 Bact/Alert-120全自动光电比色微生物检测仪。其特点为检测微生物浓度所致的酸碱度变化,该变化反映在瓶底的感光板上,进而被瓶外的光束捕获,通过电脑的连续监测,分析判定,随时报警。

1.4 鉴定 实验采用法国梅里埃(VETIK-32)进行鉴定。对阳性培养瓶及时取样作革兰染色涂片及分离培养。分离培养后对镜检呈葡萄状排列的革兰阳性球菌的菌落进行血浆凝固酶阴性初步鉴定,继之采用法国梅里埃VETIK-32系统作进一步鉴定。

1.5 质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923,购自“卫生部临床检验中心”。

1.6 血培养分离出CNS如何区分病原菌或是污染菌

1.6.1 血培养分离出CNS实验室评估标准(图1)

1.6.2 菌血症临床评判标准[1,2]

菌血症临床标准应当符合以下至少一项条件:初次血培养阳性标本采集的当日体温≥38℃,脓毒性休,白细胞升高或核左移,具有弥散性血管内凝血病变;具有由皮肤菌群引起感染的危险因素如长期静脉插管或异体移植物;抗生素(包括万古霉素或菌株敏感的抗生素)治疗有效,或拔除导管或异物,感染得到控制。实验室标准也应符合以下至少一项条件:从其他感染部位或导管尖端分离到相同的病原菌,且耐药谱也相同;多次血培养为同一种细菌。

污染菌的临床标准应符合以下至少一项条件:无明显发热及危险因素(如免疫功能低下或侵袭性操作);虽有上述危险因素但随后多次血培养证明为其他病原菌;使用敏感抗生素治疗无效;发热可由其他原因解释,且无明显的感染征象。同时还应当结合实验室的标准,如长时间培养后阳性;连续多次多日培养,仅1次为CNS;1次血培养分离出2种以上的皮肤菌群;收集CNS阳性标本的72 h内又分离出另1种细菌或真菌,却没有再分离到CNS。

1.6.3 结合临床症状和实验室数据,最终评估出分离出的CNS是病原菌还是污染菌。

1.7 统计处理 使用Bact/Alert分析软件对每例的血培养次数、阳性次数、检出时间等进行统计。

2 结果

2.1 一般资料 2007年1月到2009年12月共收到新生儿科血培养1 789份血标本,分离出143例菌株,其中G-杆菌14例占9.8%;G+葡萄球菌120例占83.9%,其中CNS 113例占79.0%(污染菌 89占78.8%,病原菌24占21.2%),金黄色葡萄球菌7例占4.9%;真菌5例占3.5%;其它细菌 4例占2.8%。

2.2 实验室数据 Bact/Alert分析软件分析血培养分离出CNS 113例;24小时内仪器报警为22例(占19.5%)25-48小时报警24例(占21.2%),49-168小时报警分离出67例(占59.3%),经分析24 h内报警有8例(36.3%)为污染菌,25-48 h报警有14例(58.3%)为污染菌,48 h以后全为污染菌。见图2;

图1 血培养分离出CNS实验室评估标准

图2 血培养中病原菌及污染菌的检出时间比较

2.3 根据CNS实验室评估113例CNS中24株为病原菌占分离 CNS的 21.2%,血样本污染 89例78.8%,与文献[3,4,5]70-90%之间报导相符,除去被污染分离出的CNS,新生儿科致病性CNS占总菌血症病原菌44.4%(24/54)为感染病原菌的首位。

3 讨论

近年来随着抗生素的广泛应用,新生儿病原菌种类也发生了变迁,国内外资料显示新生儿CNS感染呈增多趋势,2003年西班牙学者进行一项对新生儿病房感染的前瞻性研究发现,革兰阳性菌占首位(76.4%),CNS占其中的72.5%,居新生儿细菌感染的第一位[6];汪复等人研究的新生儿CNS感染也居新生儿细菌感染的首位[7],本组数据新生儿科血培养除去分离出的污染菌,CNS引起的败血症为24例,占总的血培养分离出的病原菌的44.4%(24/54)位于新生儿菌血症的第1位,与文献相符。

新生儿败血症是威胁新生儿生命的危重疾病、尤其在低体重儿,早产儿较易感染,是新生儿死亡的重要疾病,而血培养分离出病原菌是新生儿败血症诊断和治疗的主要依据。但在血培养中却经常因各种原因造成血样本的污染,因此在血培养中如果分离出CNS,那么如何辨别是病原菌还是污染菌尤其重要,需结合临床症状和实验室信息来综合分析,如果仅依靠实验室的数据来判定,就出现误报的现象。例如,实验室确定菌血症的标准为阳性报警时间在48 h以内和多个血培养瓶阳性,而本研究结果显示虽然病原菌阳性报警时间短于污染菌,但48 h以内血培养CNS仍有36.3-58.3%为污染菌,因此CNS菌血症应当依据临床症状、实验室数据和微生物学三方面的资料来判定。

总之,CNS在新生儿菌血症中感染率高,而在血培养时血样本污染率也高,因此应减少操作时造成血培养瓶污染,实验室应提高判断血培养中分离出的CNS是病原菌还是污染菌的能力,这对于给临床提供准确有意义的血培养报告单有着至关重要的意义。

[1]Chandasekar PH,Brown WJ.Clinical issues of blood cultures[J].Arch Interm Med,1994,154(4):841.

[2]Khatib R,Riederer KM,Clark JC,et al.Coagulase-negative staphylococci in multiple blood cultures:strain relatedness and determinants of samestrain bacteremia[J].J Clin Microbiol,1995,33(4):816.

[3]Herwaldt LA,Geiss M,Kao C,et al.The positive predictive value of isolating coagulase-negative staphylococci from blood cultures[J].Clin Infect Dis,1996.22(1):14.

[4]Ringberg H,Thoren A,Bredberg A.Evaluation of coagulase-negative staphylococci in blood cultures:a Prospective clinical and microbiological study[J].Scand J Infect Dis,1991,23(3):315.

[5]Souvenir D,Anderson DE Jr,Palpant S,et al.Blood cultures positive for coagulase-negative staphylococci:antisepsis,pseudobactermia,and therapy of patients[J].J Clin Microbiol,1998,36(7):1923.

[6]Urrea M,Inondo M,Thio M,et al.A prospective incidence study of nosocomial infections in neonatal care unit[J].Am J Infact Control,2003,31(8):505.

[7]汪 复.小儿细菌耐药性及防治对策[J].中国实用儿科杂志,2002,17(3):129.

1007-4287(2010)09-1451-03

book=1453,ebook=523

2010-02-14)