注射用复方甘草酸苷细菌内毒素检查方法的研究

陈红英

（安徽省肿瘤医院药剂科药房，安徽合肥 230031）

复方甘草酸苷注射液是由苷草酸苷、甘氨酸、盐酸半胱氨酸组成的复方制剂，具有免疫调节、抗感染、抑制病毒增殖以及对病毒灭菌等作用，明显改善肝实质病变，临床常用于治疗慢性肝病。本文依据 《中国药典》2005年版二部ⅪE“细菌内毒素检查法”对其注射液的细菌内毒素检查进行了探讨。

1 仪器与试药

注射用复方甘草酸苷（批号：050412、050415、050418，规格：复方制剂，每瓶含甘草酸苷40 mg、甘氨酸400 mg、盐酸半胱氨酸20 mg，安徽省新星药物开发有限责任公司）。鲎试剂（批号：04102012，规格：0.25 EU/ml、0.1 ml/支，福州新北生化工业有限公司；批号：0406072，规格：0.25 EU/ml，0.1 ml/支，浙江安度斯生物有限公司），以上鲎试剂灵敏度经复核符合规定。细菌内毒素工作标准品（批号：2003-10，规格：100 EU/支，中国药品生物制品检定所）。细菌内毒素检查用水（批号：030619，规格：5 ml/支，湛江安度斯生物有限公司）。

2 方法和结果

2.1 细菌内毒素限值L的确定

根据细菌内毒素的计算公式：L=K/M，其中L为细菌内毒素的限值，即按规定的给药途径人每公斤体重每小时可接受的内毒素剂量；K为人体静脉注射液的致热域，即K=5 EU/kg，M为每公斤体重每小时最大的药物剂量，为200 mg/60 kg/h（按甘草酸苷计算），L=K/M=1.5 EU/mg，据此将本品的细菌内毒素限值确定为1.5 EU/mg（按甘草酸苷计算）。

2.2 供试品干扰试验预试验

根据供试品内毒素限值（L）为1.5 EU/mg，取本品1瓶，加细菌内毒素检查用水2 ml溶解后，分别用细菌内毒素检查用水稀释成 1∶10、1∶60、1∶120、1∶240 系列浓度的溶液，将 1∶10、1∶60、1∶120、1∶240 的系列溶液记为 NPC（供试品阴性对照），同时在 1∶10、1∶60、1∶120、1∶240 的系列溶液中添加等体积细菌内毒素工作标准品制成的溶液记为PPC（供试品阳性对照），每个浓度平行做2支，同时作阳性、阴性对照管，结果见表1。

表1 供试品干扰性试验预试验结果Tab.1 The result of preproved interference test of sample

结果表明，注射用复方甘草酸苷对细菌内毒素检查有干扰，需稀释240（即试验中的1∶120）倍以上，方能消除干扰作用。

2.3 供试品干扰性试验

用供试品溶液（1∶240）及细菌内毒素检查用水分别将细菌毒素工作标准品稀释成 0.500 λ、0.250 λ、0.125 λ、0.060 λ不同浓度的细菌内毒素溶液，每一浓度平行做4支，另取细菌内毒素检查用水和供试品稀释液各做2支阴性对照管。取两个不同厂家生产的鲎试剂，依法进行供试品干扰试验（《中国药典》2005版二部附录ⅪE）。结果见表2-a，2-b。

表2-a 干扰实验结果Tab.2-a The result of interference test

表2-b 干扰实验结果Tab.2-b The result of interference test

经用两个厂家生产的鲎试剂进行的干扰性试验，结果Es为 0.5～2.0 λ，Et在 0.5～2.0 Es， 本品按 1∶240 稀释后对细菌内毒素检查无干扰作用。

2.4 供试品的细菌内毒素检测

取本品，依法检查（中国药典2005版二部附录ⅪE），按甘草酸苷计算，每毫克甘草酸苷中含内毒素量应＜1.5 EU，结果见表3。

结果表明，三批样品的细菌内毒素检查符合规定。

表3 细菌内毒素检查结果Tab.3 The result of bacterial endotoxins test

3 讨论

经采用两个厂家的鲎试剂，对注射用复方甘草酸苷连续三个批号进行了干扰确证试验，结果表明本品经1∶240稀释后无干扰作用，可进行细菌内毒素检查代替热原检查。根据以上结果，确证注射用复方甘草酸苷的细菌内毒素检查方法如下：取本品，依法检查（《中国药典》2005年版二部附录Ⅺ E），按甘草酸苷计算，每毫克甘草酸苷中含内毒素量应＜1.5 EU。

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