乐脉胶囊中芍药苷含量的HPLC测定方法

董月辉,赵金,王承平

(1.山东省济南卫生学校,山东济南 250023;2.山东省分析测试中心,山东济南 250014;3.月旭材料科技(上海)有限公司,上海 201203)

乐脉胶囊是中药类硬胶囊,理血/降脂药,是广泛应用的OTC药品,是由丹参、川芎、赤芍、红花等7味中药制成的复方制剂,具有行气活血、化瘀通脉之功效,用于气滞血瘀所致的头痛、眩晕、胸痛,心悸、冠心病、心绞痛、多发性脑梗死的治疗,赤芍为该制剂的主药之一,其主要有效成分为芍药苷。为了提高该制剂的质量标准,本研究建立了HPLC[1]测定该制剂中芍药苷含量的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(上海伍丰仪器,LC100二元高压系统,紫外检测器),Ultimate·AQ-C18(4.6×150mm,5μm)色谱柱(月旭公司);1/1万电子天平(上海舜宇恒平);超声波清洗机(昆山超声波仪器厂)。

芍药苷对照品：中检所提供;乐脉胶囊：市场购买;乙腈(色谱纯)：HoneyWell;磷酸二氢钠(分析纯)：国药集团;三乙胺(分析纯)：国药集团;氢氧化钠(分析纯)：国药集团;水：重蒸馏水。

1.2 色谱条件

U ltim ate·AQ-C18(4.6×150 mm 5μm)色谱柱;检测波长230 nm;流动相乙腈-0.2%磷酸溶液10∶90;温度25℃;流速1.0 m L/min;进样量10 μL,见图1。

1.3 样品溶液制备

芍药苷标准品溶液储备液：精密称取对照品8.4mg至25m L容量瓶中,用稀乙醇定容至刻度,使其浓度含芍药苷为0.336 m g/m L,超声使其溶解摇匀即得。

芍药苷标准品溶液：精密量取对照储备液1m L至25 m L容量瓶中,用流动相定容至刻度,使其浓度为13.44μg/m L,摇匀即得。

乐脉胶囊样品溶液：取20粒乐脉胶囊,取出内容物混匀,精密称取0.5 g乐脉胶囊内容物,置100 m L的具塞锥形瓶中,精密量取稀乙醇50m L,称定重量,浸泡两小时,超声处理30 min;放冷,称重,用稀乙醇补足损失的重量,摇均,过滤,精密量取5m L置于25 m L的量瓶中加入稀乙醇至刻度,摇匀,用0.45μm滤膜过滤。

阴性样品溶液：取缺赤芍阴性样品粉末,精密称取0.5 g,按样品溶液项方法处理。

2 结果

2.1 色谱图

取芍药苷标准品溶液、乐脉胶囊样品溶液和阴性样品溶液各10μL,按照1.2项条件测试,谱图如图1～3。

图3 缺赤芍阴性样品溶液Fig.3 Negative sample solution(with no paeony)

2.2 精密度实验

取芍药苷对照品溶液10μL,按照1.2项色谱条件,连续进样6针,计算其峰面积的相对标准偏差RSD为0.33%,说明精密度良好。

2.3 重复性试验

取混匀的乐脉胶囊内容物粉末,按照1.3项方法,同时制备6份样品溶液,按照1.2项色谱条件,各取10μL进样测定,同时对对照品溶液进行检测,按照外标法定量,6份样品检测结果计算相对标准偏差RSD为0.83%,说明重复性良好。

2.4 样品溶液稳定性试验

制备乐脉胶囊样品溶液分别于0、1、2、3、5、6、8、10 h检测,其峰面积没有明显的变化,其相对标准偏差RSD为0.39%,说明该样品溶液在10 h内稳定。

2.5 线性试验

取芍药苷对照储备液适量,用稀乙醇作为溶剂,配置成浓度分别为6.72μg/m L、10.08μg/m L、13.44μg/m L、20.16μg/m L、26.88μg/m L、67.2 μg/m L、168μg/m L,按1.3项色谱条件,依次分析各标准溶液,以峰面积(A)对进样量(μg)做图,绘制相应值与浓度的关系曲线。芍药苷的线性回归方程及相关系数分别为：Y=1 374X-912.43,r=0.999 8,线性范围为6.72μg/m L～168μg/m L。

2.6 回收率试验

取市售的乐脉胶囊20粒,取出内容物,混匀,共称取6份,每份为0.25 g,加入芍药苷储备液3m L、3m L、3.7 m L、3.7 m L、4.5m L、4.5 m L,按照1.2样品溶液项方法处理,照1.3项色谱条件检测,其平均回收率为98.09%,RSD 0.71%。

2.7 样品测定

取市场上随机购买5盒乐脉胶囊,按照1.2项样品溶液方法处理,按照1.3项色谱条件进行含量测定(见表1)。

表1 乐脉胶囊中药药苷含量测定结果Tab.1 Determ ination of paeoniflorin in lemai capsule

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取芍药苷对照品溶液进行紫外扫描,在紫外波长230 nm有最大吸收,参考2010版药典乐脉颗粒[2]项下含量测定和相关文献,选择230 nm为检测波长。

3.2 柱温的选择

温度也是影响峰分离度的一个因素,在20℃、25℃、30℃、35℃、40℃对样品的杂质分离进行考察,发现柱温对分离度没有太大的影响,为了使保留时间稳定,不影响柱子的使用寿命,综合考虑选择25℃。

3.3 色谱条件的选择

参考2010版药典乐脉颗粒项下含量测定和相关文献[3-4],考察了甲醇-异丙醇-醋酸-水体系,发现压力较高,而且不同时间配置的流动相检测样品时保留时间差异较大,可能是异丙醇洗脱能力强,微小的变化也会引起流动相洗脱能力的较大变化,乙腈-水-冰醋酸体系,主峰峰形拖尾,且与杂质分离不好,经过选择,最后确定了乙腈-0.2%磷酸溶液10∶90体系,主峰峰形好,并且样品与杂质能很好的分离。

对该方法进行考察验证时,各项试验均满足药品含量测定检测方法的验证要求,故该方法简单可行,专属性强。

[1] 黄逸维,傅超美,胡慧玲,等.清利通胶囊质量标准研究[J].成都医学院学报,2010,5(2)：141-144.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[M].北京：化学工业出版社,2010：660.

[3] 周丽,高家荣,夏伦祝.HPLC测定乐脉软胶囊中芍药苷的含量[J].安徽中医学院学报,2008,27(1)：52-53.

[4] 杜志谦,王广强,薛素娟.芍药苷检测在中药质控中的应用[J].时珍国医国药,2002,13(9)：57-59.