经门静脉自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化18例疗效观察*

王 方 张 静 周新人 云升浩 王可敬 寇俊峰 蔡国芳 孙厚坦

近年来，有关干细胞的研究为多种疾病的治疗提供了崭新的思路。研究证实自体骨髓干细胞移植可用于修复患者受损的肝脏[1～6]。本研究采用经门静脉进行自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化，以评价其疗效和安全性。

资料与方法

一、病例选择 2010年1月至2010年10月在我科住院的失代偿期肝硬化患者38例，男21例，女17例，年龄31～73岁，平均年龄48岁。诊断均符合《病毒性肝炎防治方案》。其中乙型肝炎肝硬化29例，丙型肝炎肝硬化3例，酒精性肝硬化6例。肝功能分级属于Child-Pugh B～C级。其中并发肝性脑病9例，无感染和原发性肝癌等并发症。将患者随机分为观察组18例和对照组20例。

二、治疗方法 对照组患者给予肝水解肽（湖南五洲通制药厂）100mg加入5%葡萄糖注射液250mL中静脉滴注，1次/日。还原性谷胱甘肽（古拉定，意大利斯德大药厂）1.2g加入5%葡萄糖注射液100mL中静脉滴注，1次/日。门冬氨酸钾镁注射液30mL、维生素C 3.0g加入10%葡萄糖注射液250mL中静脉滴注，1次/日。同时限钠限水，未给予输注白蛋白；观察组在前述基础治疗的同时，给予经门静脉自体骨髓干细胞移植治疗。

三、干细胞移植 术前予以流质饮食，填写知情同意书。选择两侧髂后上棘为穿刺点，常规消毒、麻醉，用18号骨髓穿刺针穿刺，抽取骨髓100～160mL，肝素抗凝。应用细胞分离试剂盒（宁夏中联达生物有限公司）将骨髓液转移至A液瓶内。加入B液，充分混匀，室内静置约20～30分钟，观察A液瓶内有明显的红细胞沉降后，将上清液移至50mL离心管内，2500rpm（湖南凯达科学仪器有限公司，RCF 1200g）离心5分钟，弃上清液后每管加注生理盐水，最后收集在一个50mL离心管中。取50mL离心管2支，各加入C液25mL，将收集到的细胞悬液加至离心管中，1800rpm（RCF 850g）离心30分钟。小心吸取中间云雾状的细胞层。加生理盐水至50mL，2500rpm（RCF 1200g）离心5分钟，弃上清液，加入生理盐水，混匀后1800rpm离心5分钟，共3次，洗涤完毕后将离心管底部的细胞，适量稀释，保存于5mL试管中，进行细胞计数。在超声引导下经门静脉注入骨髓干细胞悬液，细胞数为109左右。穿刺点加压包扎，术后静卧6小时，3天内避免剧烈运动。预防性应用头孢唑林2g/12h，静脉滴注，连用 3d。

四、检测指标 常规速率法检测凝血酶原活动度（PTA，上海标佳公司）；采用全自动生化仪检测肝功能指标（雅培公司）。

结果

一、症状和体征改善情况 在细胞治疗后第3天，治疗组15例（83.3%）患者乏力、纳差症状有明显改善，而对照组症状明显改善的仅2例（10.0%，P<0.05）；治疗后 8周，治疗组腹水消退 10例（55，5%），腹胀减轻16例（88.9%），对照组分别为2例（10.0%）和6例（30.0%，P<0.05）。

二、肝功能指标改善情况 治疗后8周，两组肝功能改变情况见表1。

表1 两组患者肝功能指标变化情况（）

表1 两组患者肝功能指标变化情况（）

与治疗前比，①P<0.05

例数 ALB(g/L) PTA（%） ALT（IU/L）TBIL(μmol/L)治疗组 治疗前 18 25.8±6.4 38.4±13.8 54.3±14.5 40.6±13.5治疗后 34.4±8.7① 45.6±10.3① 52.4±14.6 39.1±14.1对照组 治疗前 20 25.2±7.2 37.1±14.2 57.6±15.1 39.6±14.7治疗后 26.3±7.537.4±9.3 55.1±13.7 36.6±13.9

三、不良反应 所有患者均未观察到明显的不良反应。

讨论

目前，进行骨髓干细胞移植治疗肝病的途径主要有经肝动脉、门静脉和外周静脉等。姚鹏等[1]采用经肝动脉注入自体骨髓干细胞治疗慢性肝衰竭，证实其在改善症状和降低病死率方面效果明显。Pai等[2]将CD34（+）骨髓干细胞经肝动脉输入到酒精性肝硬化患者肝内，患者胆红素水平明显下降，Child-Pugh评分改善。Levicar等[3]分别通过肝动脉和门静脉将骨髓干细胞注入慢性肝病患者肝内，患者6月内胆红素水平下降明显。Terai等[4]将自体骨髓干细胞经外周静脉输入失代偿期肝硬化患者体内，24周时血清白蛋白水平升高，胆红素下降，Child-Pugh评分明显改善。Mohamadnejad等[5]和Khan等[6]的研究结果也与之类似。目前部分学者认为干细胞治疗尚缺乏安全性[7]，这可能与治疗用的细胞类型、数量、移植途径、适应症的选择和患者特点等因素有关[8]。

此前，我们曾在动物试验中经门静脉移植自体骨髓干细胞治疗肝损伤大鼠并取得了较好的疗效[9]，后采用经肝动脉移植自体骨髓干细胞治疗失代偿期肝硬化患者效果也较满意[10]。本研究我们采用经门静脉移植自体骨髓干细胞治疗18例失代偿期肝硬化患者，发现患者症状改善明显，血浆白蛋白水平提升显著，第8周时凝血酶原活动度也明显改善。

[1]姚鹏，胡大荣，王帅，等.自体骨髓干细胞移植治疗慢性肝衰竭研究[J]. 肝脏，2005，10（3）：171-173.

[2]PAI M，ZACHAROULIS D，MILICEVIC MN，et al.Autologous infusion of expanded mobilized adult bone marrow-derived CD34+cells into patients with alcoholic liver cirrhosis[J].Am J Gastroenterol，2008，103（8）:1952-1958.

[3]LEVICAR N，PAI M，HABIB NA，et al.Long-term clinical results of autologous infusion of mobilized adult bone marrow derived CD34+cells in patients with chronic liver disease[J].Cell Prolif，2008，41（1）:115-125.

[4]TERAI S，ISHIKAWA T，OMORI K，et al.Improved liver function in patients with liver cirrhosis after autologous bone marrow cell infusion therapy[J].Stem Cells，2006，24（10）:2292-2298.

[5]MOHAMADNEJAD M，ALIMOGHADDAM K，MOHYEDDIN-BONAB M，et al.Phase 1 trial of autologous bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in patients with decompensated liver cirrhosis[J].Arch Iran Med，2007，10（4）:459-466.

[6]KHAN AA，PARVEEN N，MAHABOOB VS，et al.Safety and efficacy of autologous bone marrow stem cell transplantation through hepatic artery for the treatment of chronic liver failure:a preliminary study[J].Transplant Proc，2008，40（4）:1140-1144.

[7]MOHAMADNEJAD M，NAMIRI M，BAGHERI M，et al.Phase 1 human trial of autologous bone marrowhematopoietic stem cell transplantation in patients with decompensated cirrhosis[J].World J Gastroenterol，2007，13（24）:3359-3363.

[8]KUO TK，HUNG SP，CHUANG CH，et al.Stem cell therapy for liver disease:parameters governing the success of using bone marrow mesenchymal stem cells[J].Gastroenterology，2008，134（7）:2111-2121.

[9]王方，周一鸣，张小岗，等.骨髓干细胞移植对急性肝损伤大鼠治疗的实验研究[J].西北国防医学杂志，2010，31（1）：40-42.

[10]王方，张小岗，张静，等.自体骨髓干细胞治疗失代偿期肝硬化患者50例疗效观察 [J].实用肝脏病杂志，2010，13（4）：272-274.