稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立

刘霄卉 ，罗军荣,2，斯日古楞，周建华，马学恩*

(1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.江西农业大学动物科学院，江西 南昌 330045；3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江 哈尔滨 150001)

绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)又名“驱赶病”(Jaagsiekte)，是引发绵羊肺脏肿瘤的一种接触性传染病，偶发生于山羊。其病原为绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte retrovirus，JSRV)，该病毒属于β反转录病毒，基因组为线性单股正链RNA，全长7.4 kb，具相互重叠的 gag、pro、pol、env基因。其中env基因的ORF编码囊膜蛋白Env。该蛋白随后被病毒蛋白酶水解为跨膜蛋白(Transmembrane protein，TM)和表面蛋白(Surface protein，SU)[1]。研究表明，SU位于病毒的囊膜外，包含受体结合位点和主要的抗原决定簇，并通过识别结合相应的特异性受体，介导膜融合过程，进而使病毒粒子侵入宿主细胞内，Caporale等发现，JSRV Env蛋白是致瘤蛋白[3,5-8]。近年来研究发现，缺失Env蛋白中的TM会导致该蛋白失去细胞转化能力，表明TM为Env细胞转化能力的决定因素之一[4]。此外，缺失SU的信号肽到SU与TM的连接区域也使Env丧失转化能力，表明SU蛋白中也可能有多个区域参与细胞转化[10]。SU在JSRV ENV细胞转化中的作用似乎依赖于靶细胞的类型，但如何影响这些细胞的转化尚不明确[2]。SU在JSRV细胞转化中作用是国内外研究的热点。SU可用于检测OPA特异抗原及OPA发病机理的研究[9]。

本研究利用真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建了JSRVsu基因的真核表达质粒pcDNA3.1-SU，并转染人肺癌细胞系A549细胞，建立了稳定表达SU的A549细胞系，为进一步研究SU蛋白在细胞转化中的作用奠定基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料 pcDNA3.1(+)真核表达载体购自Invitrogen公司；E.coliDH5α感受态细胞和A549细胞株由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供；……