我国部分地区蛋鸡ALV-J分离株gp85基因遗传进化分析

潘 伟，高玉龙，刘超男，秦立廷，王永强，祁小乐，高宏雷，王笑梅

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001)

J亚群禽白血病病毒(Subgroup J of avian leukosis virus，ALV-J)最初由Payne从肉用型鸡中分离鉴定[1]，该病毒的前病毒基因组具有典型C型反转录病毒基因结构特点，即 5'LTR、gag、pol、env、3'LTR。其中，不同病毒株间gag和pol基因非常保守，而env基因则发生了较大的变异[2-4]。env基因的变异主要出现gp85的编码区。gp85蛋白的变异主要发生在第40 aa～70 aa、115 aa～120 aa、180 aa～220 aa等处。研究表明有些位点的改变可能导致疏水性显著变化，从而引起抗原性发生显著变化[5]。

2009年至2010年，我国部分地区蛋鸡群中爆发J亚群禽白血病[6]，给我国蛋鸡业造成了很大的经济损失。为了解这些地区蛋鸡ALV-J流行株的来源及进化关系，本研究对2009年以来从国内6个省区蛋鸡场中分离到的19个ALV-J分离株的gp85基因进行了克隆测序，并与其他来源的11株ALV-J作了比较分析。

1 材料和方法

1.1 病毒分离株 19个蛋鸡ALV-J分离株均为本实验室于2009年～2010年间分离自我国部分地区(表1)。用于比对分析的其他病毒株序列来自Gen-Bank，分别为国际参考株4817(AF247385)、ADOL-7501(AY027920)、ADOL-Hc1(AF097731)、HPRS-103(Z46390)、国内分离自海兰灰蛋鸡的参考病毒株SD07LK1(EU264064)、麻黄肉种鸡株 SCAU-0901(FJ619190)与白羽肉鸡的参考病毒株NX0101(AY897227)、HN0001(AY897219)、YZ9901(AY897222)、SD0002(AY897224)和 SD0101(AY897220)。

表1 蛋鸡ALV-J分离株的地理分布及分离年代Table 1 The area distribution and isolated year of relative ALV-J isolates

1.2 主要试剂 ExTaqDNA聚合酶、dNTPs、DL2000 DNA Marker和pMD18-T均购自TaKaRa公司；Plasmid Miniprep Kit和 DNA Gel Extraction Kit为AxyGen产品。

1.3 前病毒DNA的提取 将这19个ALV-J分离株分别感染后检测为阳性的DF-1细胞，反复冻融3次后，分别取100 μL细胞上清，按照常规方法提取DNA：取病料研磨液100 μL，加入裂解液裂解后，静止5 min～10 min；酚/氯仿/异戊醇抽提，RNA酶消化后，-20℃保存备用。……