H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定

佘利旋，熊永忠，远立国，袁天梅，贾 坤，李守军*

(1.华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150069；3.海珠区爱宠动物诊疗所，广东 广州 510220)

犬流感(Canine influenza，CI)是由正粘病毒科流感病毒属A型CI病毒(CIV)引起的犬呼吸道传染病。患犬主要临床症状为发烧、咳嗽、流鼻液、食欲减退、精神沉郁等。我国于2006年～2007年从犬体内分离到禽源H3N2亚型CIV[1]；2009年我国报道犬感染H1N1亚型流感病毒，基因序列分析表明该病毒与当时人群中流行的甲型H1N1流感病毒同源性高达99%[2]。国外研究也证实H3N8、H5N1以及H3N2亚型流感病毒可跨越品种障碍而感染犬，H3N8、H3N2亚型CIV还可在犬群中水平传播[3-5]。虽然尚未证实犬在人类流感病毒新亚型演变过程中的作用，但在宠物犬中检测到甲型H1N1流感病毒，足以引起研究人员的重视。

为了解广州地区CI的流行情况，本研究对患有呼吸道症状的犬群进行病原学调查，分离获得CIV，并对其理化特性和生物学特性进行研究，为CI的诊断奠定基础，同时也为广州地区CI疫情监测及科学防制提供依据。

1 材料和方法

1.1 病料样品与血清 2009年2月～12月期间，在广州6家宠物医院临床门诊中，采集107例呼吸道疾病患犬的鼻咽拭子样品和58份恢复期犬血清样品。鼻咽拭子浸于含有青、链霉素的灭菌生理盐水中，用于实验室检测，血清置-20℃保存备用；流感病毒H1、H3和H5标准阳性血清由华南农业大学禽病实验室提供。

1.2 主要试剂 TRIzol®Reagent购自 Invitrogen公司；Reverse Transcriptase XL(AMV)反转录酶、dNTPs、ExTaqDNA聚合酶、DL2000 DNA Marker、pMD-18T载体、T4 DNA连接酶均购自宝生物工程(大连)有限公司；……