大熊猫IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

张焕容，海 泉，王海瑞，侯 蓉*

(1.西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041；2.成都大熊猫繁育研究基地，四川 成都 610081)

大熊猫是我国特有的濒危保护动物，野外现存数量为1600只左右，圈养个体数量为161只。为了保护和拯救大熊猫，我国政府采取了一系列措施，包括建立自然保护区，以及通过人工繁育增加大熊猫种群数量等。同时，对疫病的预防和早期诊断已成为圈养大熊猫保护工作的重要内容之一。免疫球蛋白G(IgG)是人和动物血液、组织液和淋巴液中含量最高的免疫球蛋白，占免疫球蛋白总量的70%～80%，在机体防御系统中发挥着重要作用。监测大熊猫体内免疫球蛋白含量的变化，对某些疾病的诊断和临床治疗有指导意义。因此，建立一种特异、敏感监测大熊猫血清中免疫球蛋白IgG变化的方法是十分必要的，特别是通过该方法测定大熊猫幼畜血清中IgG的含量，评价幼畜的体液免疫状况，为大熊猫幼畜制定科学合理的哺育程序，提高幼龄大熊猫免疫力和成活率，具有重要的意义。双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)已应用于不同动物免疫球蛋白的定量检测[1-2]，不同病毒抗原以及生物活性物质的定量检测[3-6]。本研究的目的在于建立定量检测大熊猫IgG的DAS-ELISA方法，为临床快速、准确地定量检测大熊猫IgG提供可靠的方法。

1 材料和方法

1.1 主要试验材料 大熊猫血清由成都大熊猫繁育研究基地提供；Protein A琼脂糖亲和基质购于北京道格拉斯生物技术有限公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗豚鼠IgG酶标免疫球蛋白购于美国Biotech公司；……