马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究

丛 锋，刘长军，张艳萍，李志杰，张 锋，成 云，杨文闯，许娜娜

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001)

马立克氏病病毒(Marek's disease virus，MDV)为鸡和火鸡的一种高致瘤性疱疹病毒，能够在鸡羽髓处形成感染性病毒粒子并释放至环境中。因此，羽髓上皮细胞对于MDV的增殖和传播具有重要意义[1]。研究表明，MDV感染后7 d即可在羽髓中检出病毒，21 d病毒载量达到峰值，之后下降[2]。另外有研究显示，MDV感染后4 d即引起羽髓中CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润，10 d达到峰值；同时，IL-18、IL-6和IFN-γ等细胞因子在mRNA水平的表达量显著升高[3-4]。但是目前这些研究均为DNA或mRNA水平进行的个别基因或蛋白质的检测。蛋白质组学技术可以大规模鉴定蛋白质，更真实地反映蛋白质的表达情况、翻译后的修饰以及蛋白质与蛋白质之间的相互作用。因此，本实验应用蛋白质组学方法对MDV感染的鸡羽髓上皮细胞进行研究，筛选并鉴定差异表达蛋白，为进一步研究羽髓中MDV的复制、基因的表达以及宿主的应答等奠定基础。

1 材料和方法

1.1 病毒株和实验动物 MDV强毒GA株购自美国标准菌种收藏所(ATCC)，由本实验室继代培养至第5代；1日龄SPF白色来航鸡由哈尔滨兽医研究所SPF实验动物中心提供。

1.2 主要试剂和仪器 蛋白定量试剂盒、尿素、硫脲、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰胺、去垢剂CHAPS、IPG干胶条和IPG缓冲液(pH3～pH10)均购自美国安玛西亚公司；等电聚焦系统(Ettan IPGphorⅢ)、胶条槽(Ettan IPGphor Manifold)、标准垂直电泳系统(SE 600 Ruby)和扫描仪(ImageScanner)均为美国安玛西亚公司产品。

1.3 动物实验 将30只1日龄SPF鸡随机分为2组，每组15只。……