大肠癌组织中TMS1基因甲基化状态及其意义

周炳喜，韩双印，张延瑞，杨玉秀

(河南省人民医院，郑州450003)

正确维持甲基化状态是生长发育过程中所必需的，肿瘤的发生与甲基化状态发生异常相关，表现为全基因组广泛低甲基化和某些抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化［1］。TMS1基因为抑癌基因，其甲基化使TMS1基因表达沉默。本研究采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术检测38例大肠癌组织TMS1基因启动子甲基化状态并与正常结肠组织相对比，以探讨TMS1甲基化与大肠癌发生的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 选择我院2008年11月～2009年4月手术切除的38例大肠癌及其距肿瘤边缘3cm的正常结肠组织的石蜡冰冻标本。38例中男23例、女15例，年龄28～88岁、平均53岁。大肠癌组中直肠癌21例、结肠癌17例;病理结果:管状腺癌8例、乳头状腺癌2例、管状乳头状腺癌6例、黏液腺癌4例、管状黏液腺癌3例、乳头状黏液腺癌1例、印戒细胞癌1例、低分化腺癌6例、中分化腺癌6例、高分化腺癌1例。根据UICC标准TNM分期，Ⅰ期6例、Ⅱ期18例、Ⅲ期14例。正常结肠组织病理未发现肿瘤细胞，所有患者均未接受过放化疗。所有标本在DNA提取前置于-80℃低温冰箱保存。

1.2 实验方法

1.2.1 DNA提取 以传统的酚—氯仿法从组织中提取DNA。

1.2.2 DNA的亚硫酸氢钠修饰 取含1 μg DNA溶液 50 μl，加 2 mol/L NaOH 5.5 μl，37 ℃ 水浴 15min使DNA变性，加新鲜配制10 mmol/L氢醌30 μl及3 mol/L的亚硫酸氢钠520 μl(pH 5.0)，混匀后加少许石蜡油避光50℃水浴16 h。

1.2.3 DNA纯化 Wizard DNA纯化试剂盒(Promega公司)纯化，回收后的DNA溶于50 μl双蒸水中，离心1min，加入终浓度为3 mol/L的NaOH 5.5 μl，室温放置 5min 终止反应，加入 1 μl糖原、17 μl 17.5 mol/L醋酸铵、3倍体积的无水乙醇，-80℃放置2 h，离心去上清，70%乙醇500 μl洗涤，离心后去上清，加20 μl双蒸水溶解。……