大黄素体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制初步探讨

欧冰凝，唐海桦，张海英，梁 钢*，韦 艳

(1广西医科大学药学院，南宁530021;2广西医科大学公共卫生学院)

多药耐药 (MDR)是肿瘤化疗失败的重要原因，逆转肿瘤MDR是提高其化疗效果的关键。研究发现大黄素(EM)能逆转人乳腺癌细胞MCF-7/Adr、人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM对阿霉素的抗药性［1～4］，其逆转人口腔鳞癌耐药细胞株的研究还未见有报道。本研究主要探讨EM对人口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的体外MDR逆转作用及作用机制，为进一步开展体内逆转作用研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 人口腔鳞癌细胞 KB及其耐药株KBV200购自南京凯基生物科技发展有限公司，置37℃、5%CO2、饱和湿度条件下，用含10%新生牛血清的RPMI 1640培养基培养，KBV200细胞培养时加入200 ng/ml VCR维持其耐药性，实验前1～2周停药。0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。

1.1.2 主要抗体及药物 P-gp鼠抗人单克隆抗体购自SANTA公司，肺耐药相关蛋白(LRP)鼠抗人单克隆抗体购自NeoMarkers公司，TOPO-Ⅱ鼠抗人单克隆抗体、P53鼠抗人单克隆抗体、Bax兔抗人多克隆抗体、Bcl-2鼠抗人单克隆抗体、GST-π鼠抗人单克隆抗体和即用型非生物素免疫组化ElivisionTM plus检测试剂盒均购自福州迈新，DAB显色剂、辣根酶标记羊抗鼠-HRP购自南京凯基生物科技发展有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 EM对KBV200细胞株的逆转作用 选取EM 3个对KBV200抑制率低于10%的药物浓度为实验浓度。取单细胞悬液1×105/ml种板，每孔200 μl，设培养液空白对照孔，阴性对照组(无药作用耐药细胞)，单用VCR组和联合用药组。其中联合用药组分为以下4组，A组:0.7μg/ml EM+长春新碱(VCR);B 组:1.0 μg/ml EM+VCR;C 组:1.4 μg/ml EM+VCR;D 组:5.0μg/ml维拉帕米(VRP)+VCR。其中联合用药组分别加入 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 μg/ml VCR。……