核酸杂交基因芯片法检测人乳头状瘤病毒结果分析

白瑞

河南南阳油田总医院检验科，河南南阳 473132

人乳头状瘤病毒（HPV）是诱发女性宫颈癌及生殖器病变的主要病源。临床HPV检测对于发现宫颈癌高危患者，早期防治具有重要意义。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2010年4月～2011年1月的宫颈脱落细胞标本395例。

1.2 采集方法

将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷顺时针旋转5圈后，放入标有患者编号的细胞保存液管中，送检。

1.3 试验方法

1.3.1 HPV-DNA分离提取 取保存有宫颈细胞的细胞保存液0.5 ml，以14 000 rpm离心10 min，弃上清液后，利用凯普生物化学科技公司提供的基因组抽提试剂提取DNA，严格按照说明书操作。

1.3.2 PCR扩增 扩增仪由上海宏石医疗科技有限公司生产的SLAN荧光定量PCR仪，试剂由潮州凯普生物化学有限公司提供。分别设阴性对照和阳性对照各1份。

1.3.3 杂交 试剂由凯普生物化学有限公司提供，HyBriMax医用核酸分子快速杂交仪由凯普生物科技有限公司提供。

2 结果

2.1 患者年龄分布

2010年4月～2011年1月笔者检测了395例HPV感染患者，其中，20～29岁 18例，占 4.8%；30～39 岁 185例，占 46.8%；40～49岁 175例，占 44.3%；50～59岁 16例，占 4.1%；60岁以上1例。以30～49岁为最多。

2.2 HPV-DNA分型情况

395例患者中，检出HPV感染179例，阳性率为45.3%。单一类型感染145例，占总感染的81.0%；二种类型感染27例，占总感染的15.1%；三种类型及以上感染7例，占总感染的3.9%。 见表1、2。

3 讨论

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，全球范围内其发病率在女性恶性肿瘤中排第二位。据世界范围内统计，每年约有49.3万的宫颈癌新发病例，其中，有27.4万妇女死于该病，并且83%的宫颈癌发生在发展中国家[1-2]，而我国宫颈癌患病率和死亡率均占世界的1/3。同时也是我国妇女发病率最高的恶性肿瘤之一，严重威胁着广大妇女的生殖及生命健康，我国的宫颈癌发病率呈总体下降趋势但年轻患者发病率呈增加的趋势。而高危型HPV持续感染是宫颈癌发生、发展的必要条件[3]，HPV感染与宫颈上皮肉瘤样病变（CIN）和宫颈癌（ICC）的发生、发展密切相关，它影响着CIN和ICC的病理分类和临床治疗[4]。HPV含量与宫颈癌病变程度正相关[5]。宫颈癌亦因而成为目前唯一一种原因明确的可以预防和治愈的恶性肿瘤[6-7]。

表1 145例HPV-DNA单一型感染分布

表2 34例HPV-DNA二种类型感染及三种以上类型感染分布

及时正确的宫颈病变诊断和治疗对宫颈病变的转归及预后有重要影响，选择灵敏度高、特异性强的HPV的分型检测方法，是实现早期筛查的保证。本实验采用的实时荧光定量PCR技术，结合了PCR的高灵敏性和探针杂交的高特异性，利用杂交导流的原理，在已经固定好核酸探针的低密度基因芯片膜上可快速准确区分占中国人群HPV感染95%的21种类型，并在数小时内获得结果，是临床诊断和普查的理想方法。在本实验中，HPV16及HPV58感染率最高，分别占31.0%和19.3%，这与曾维英等[8]的报道相近，HPV 16/18型阳性率达28.1%，这可能与地区性分布有关。而在各年龄组中又以30～49岁感染率最高，占感染人群的91.1%，提示该年龄段人群应密切关注HPV的感染情况，并定期筛查。

[1]余雷,杨建勇.宫颈癌的介入治疗进展[J].微创医学,2010,(4):373-375.

[2]赵虎,张庆.局部晚期宫颈癌新辅助化疗48例临床分析[J].中国医药科学,2011,1(5):55-56.

[3]李淑敏,章文华,吴令英.人乳头癌病毒负荷量与子宫颈癌及癌前病变关系的初步研究[J].中华妇产科杂志,2004,34(6):400.

[4]张菊,高艳娥,赵锦荣.HPV检测在宫颈癌预警和筛查中的研究[J].国外医学:妇产科学分册,2003,30(5):319-322.

[5]梁彩虹,杨光.宫颈癌病理组织中HPV基因型别分析[J].江西医学检验,2007,25(4):299-301.

[6]陶萍萍.女性生殖道人乳头瘤病毒基因型研究进展[J].中国实用妇科与产科杂志,2005,21(8):507-509.

[7]梁雯.宫颈病变与人乳头瘤病毒基因型的检测[J].广西医学,2007,29(2):265-266.

[8]曾维英,郑和平,黄进梅.性病门诊192例就诊者宫颈拭子HPV检测结果分析[J].岭南皮肤性病杂志,2005,12(1):29-30.