β-磷酸三钙表面吸附P-15多肽对细胞相容性的影响*

赵 军 沈文文 樊 洪

外伤、炎症及肿瘤等常会造成口腔颌面部的骨质缺损，严重影响患者的生存质量，因此骨缺损修复的研究很有意义。β-磷酸三钙（β-tricalcium phosphate，β-TCP）等人工合成的骨替代材料表面常常缺乏细胞与细胞之间、细胞与基质之间信息交流的机制而影响了细胞的黏附，并进一步影响细胞的增殖与分化。P-15多肽是Ⅰ型胶原中含有细胞结合位点的15个氨基酸序列的人工合成肽，参与成骨性细胞的黏附、增殖与分化等生物学行为。本研究旨在观察β-TCP吸附P-15多肽后对细胞生长的影响，为进一步体内研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 β-TCP购自武汉华威生物材料工程有限公司，气孔率为40%~70%，气孔孔径为10~1000μm，平均380μm，抗压强度大于1.5×103kPa；P-15多肽冻干粉（GTPGPQGIAGQRGVV）由南京金思特科技有限公司合成，纯度大于90%。

1.2 主要试剂与仪器 DMEM培养液、胎牛血清（美国Gibco公司），Cell Counting Kit-8试剂盒（日本同仁化学研究所），碱性磷酸酶试剂盒（南京建成生物工程有限公司），BCATMpro⁃tein assay kit（Thermo Scientific），RIPA裂解液（上海碧云天生物技术有限公司），TJJ-1300超净台（北京半导体设备一厂），NAPCO细胞培养箱（美国Fisher公司），48孔培养板（Gibco），酶标仪（Thermo Labsysytems）。

1.3 方法

1.3.1 β-TCP/P-15复合材料的制备 将β-TCP修整成 5.0 mm×5.0mm×1.5mm大小，蒸馏水加压反复冲洗，高压蒸汽消毒备用。将P-15多肽溶解于PBS中，质量浓度为100 mg/L[1]，过滤除菌。然后将β-TCP放到P-15溶液中，轻微震荡以确保P-15充分吸附到β-TCP中，室温条件下放置24 h，再用PBS冲洗去除未吸附的P-15，干燥后室温条件下储存在防潮的容器中。

1.3.2 成肌细胞的培养与刺激诱导 复苏由南开大学医学院分子遗传实验室提供并冻存的鼠成肌细胞……