尾加压素Ⅱ对心肌成纤维细胞表型转换的影响

邵志凌，何学心，向谨逸

(1.武汉铁路局社会保险管理处，武汉 430071;2.华中科技大学同济医学院药学院，武汉 430030;3.华中科技大学同济医学院分子生物学系，武汉 430030)

心肌纤维化指心肌间质胶原纤维过量积聚或成分发生改变［1］，是导致心功能不全、心律失常及慢性心力衰竭难以逆转的最主要病理损伤之一［2］。心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)是心肌间质主要构成细胞，其增殖、表型转换为肌成纤维细胞并合成分泌大量胶原纤维蛋白。尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ，UⅡ)最早是1985年自硬骨鱼的脊髓尾部神经分泌系统分离出来的一种生长抑素样环肽，属于神经肽范围［3］。目前研究已证实，UⅡ能促进CFs增殖［4］，但笔者尚未见UⅡ对其表型转换作用的报道。笔者在本研究以培养的新生乳鼠心肌成纤维细胞为实验模型，观察不同浓度UⅡ对I型胶原蛋白分泌及其表型转换的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)表达的影响，并研究其对细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)磷酸化的作用，旨在进一步探讨UⅡ诱导心肌纤维化的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 1 d龄新生SD乳鼠，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，动物许可证号:Scxk(鄂)2004-0007。UⅡ、抑肽酶(aprotinin)和亮肽酶素(leupeptin)均为Sigma公司产品、达尔伯克必需基本培养基(Dulbecco＇s minimum essential medium，DMEM)培养基、胰蛋白酶和胎牛血清(Gibco公司)，小鼠抗大鼠p-ERK1/2单克隆抗体(Santa Cruz公司)。I型胶原(Col I)ELISA试剂盒(上海森雄)。其余试剂为国产分析纯。垂直电泳仪及转膜系统(Biorad公司)，细胞显像系统(德国LEICA DC200)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养和试验分组 取1d龄的SD乳鼠，在无菌条件下开胸剪取心室肌，剪碎心肌，0.1%胰蛋白酶消化后，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液，调整细胞密度为105个·mL-1，采用差速贴壁1 h，获得成纤维细胞。……