新城疫病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

杜景娇，薛 强，邹明强*，滕文锋，郭 浩,3，但晓雅,4

(1.中国检验检疫科学研究院，北京100123；2.大连医科大学，辽宁大连116044；3.内蒙古医学院，内蒙古呼和浩特010059；4.江苏大学，江苏镇江212013)

新城疫(Newcastle disease，ND)是由 ND病毒(NDV)引起的主要侵害鸡和火鸡等禽类的一种急性、高度接触性传染病，是危害我国养禽业最严重的传染病之一[1]。NDV F蛋白是其主要结构蛋白和抗原蛋白，与病毒的吸附侵入、毒力强弱等密切相关。

鸡胚病毒分离鉴定是NDV检测的金标准，同时电镜技术、血清学检测技术等在检测NDV抗原或抗体方面均有广泛应用[2-5]。在分子生物学检测技术中核酸探针技术、RT-PCR技术等也用于NDV检测，其中RT-PCR技术灵敏性高、特异性好，可以在较短时间内检测到病毒，应用广泛，但是RT-PCR必须有快速的热循环过程，对仪器的要求比较高，同时也存在扩增后检测时污染环境的问题。环介导恒温扩增(LAMP)方法是2000年由Notomi等[6]报道的一种核酸扩增技术，具有简便、快速、敏感性高和特异性强等优点，扩增结果通过肉眼或浊度仪进行判定。而且该方法不用开盖就可以进行结果判读，从源头上控制气溶胶污染。

本研究建立了针对NDV F基因的RT-LAMP方法，并以3种不同的方式对其结果进行判定，能够快速、直观、准确地检测到NDV，可以作为一种新的NDV检测方法使用。

1 材料和方法

1.1 病毒株 NDV尿囊液(血凝价为2-8，半数鸡胚感染量为10-4.56)、H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)分离株、禽传染性支气管炎病毒(IBV)及禽传染性喉气管炎病毒(ILTV)等为中国检验检疫科学研究院检测新技术与装备研究所实验室保存。……