猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7间接ELISA检测方法的建立

刘 鹤，刘永刚，王淑杰，石文达，武嘉男，董建国，荣福龙,2，韩梓峰,2，何玉利，孙 刚，蔡雪辉*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心，黑龙江哈尔滨150001；2.东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030；3.黑龙江省动物卫生监督所，黑龙江哈尔滨150090)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病，主要特征为母猪严重繁殖障碍和各年龄段猪呼吸系统疾病[1]。其病原体PRRS病毒(PRRSV)属动脉炎病毒科动脉炎病毒属成员，分为欧洲型(Ⅰ型)和北美洲型(Ⅱ型)两种基因型[2]。PRRSV为包含9个开放阅读框(ORF)的单股正链RNA病毒，其中ORF1a和ORF1b编码的多聚蛋白pp1a和pp1ab可以水解为14种非结构蛋白(Nsp)，这些Nsp在PRRSV的复制和转录过程中起重要作用[3]。其中Nsp7能刺激机体产生高水平的抗体，并且长时间维持较高水平[4-5]。PRRSV的Nsp中Nsp7的基因相对保守，在Ⅰ型PRRSV中，Nsp7基因同源率为96.7%～97.4%，在Ⅱ型PRRSV中，Nsp7基因同源率为84.9%～100%，Ⅰ型PRRSV和Ⅱ型PRRSV之间Nsp7基因同源率为45%[6-7]。研究显示Nsp7可以作为一个理想的检测抗原。本研究采用纯化的重组Nsp7作为包被抗原[8]，建立PRRSV抗体间接ELISA检测方法。该检测方法具有较高的敏感性、特异性和重复性，可以作为一个新的检测PRRSV抗体检测方法。

1 材料和方法

1.1 血清、菌株与载体 PRRSV猪阳性血清和阴性血清由本实验室保存；重组菌pET-Nsp7/BL21由本实验室构建并保存；猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清由本所猪病研究室提供。

1.2 主要试剂 辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG购自Sigma公司；……