生长抑素及其功能性受体表达与胰腺腺泡细胞外分泌的关系

蔡 佳,黄文祥

(重庆医科大学附属第一医院感染科 400016)

生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)有5种不同的分子亚型SSTR1～5,广泛分布于脑、胰腺、甲状腺及胃肠等组织,各亚型受体在组织中的分布也有差异[1-2]。目前,生长抑素已广泛应用于消化系统疾病(如急性胰腺炎、肝硬化门静脉高压、上消化道出血等)及肿瘤(如神经内分泌肿瘤和胃肠道类癌瘤等)等的治疗[3-4]。胰腺腺泡细胞上的各SSTR类型分布目前还存在争议。有研究证实,生长抑素可与胰腺腺泡细胞上的SSTR结合,直接抑制胰腺分泌和淀粉酶分泌。但是胰腺腺泡细胞上与生长抑素结合发挥抑制胰腺外分泌作用的受体是哪一种受体或亚型还不清楚。本研究初步探讨SD大鼠胰腺腺泡细胞上SSTR各亚型的分布及生长抑素的功能性受体亚型。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试剂及配制 Trizol(Invitrogen公司)、SSTR1～5引物(Invitrogen公司合成),DNA maker 100 bp ladder(SABC公司),莫落尼鼠类白血病毒(murine moloney leukemia virus,MMLV)逆转录酶、Taq-DNA聚合酶、PCR反应缓冲液、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、Rnasin(Promega公司),焦磷酸乙二脂(diethy lpyrocar bonate,DEPC,Sigma公司)。4-羟乙基哌嗪乙磺酸(2-[4-(2-hydroxyerhyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid,HEPES)缓冲液的配制(氯化钠135 mmol/L,氯化钾 5.0 mmol/L,氯化钙2.0 mmol/L,氯化镁1.2 mmol/L,葡萄糖10.0 mmol/L和、HEPES 10 mmol/L,用 Tris-HCl调至pH 为 7.4)。Ring′s液的配制由氯化钠3.79 g、磷酸二氢钾27.2 mg、磷酸氢二钾182.4 mg,硫酸镁 123.2 mg、碳酸氢钠1.05 g、醋酸钠 680 mg、D-glucose 495 mg、α酮戊二酸 73.05 mg、甘氨酸75.07 mg、氯化钙72.14 mg加入500 mL三蒸水中,磁力搅拌混匀后,用 Tris-HCl调 pH为7.35,高压灭菌后 4℃保存待用。消化液采用胰蛋白酶抑制剂和Ⅳ型胶原酶配制,加入Ring′s液使其充分溶解,终浓度分别为0.5 mg/mL和0.8 mg/mL。-20℃保存备用。

1.2 胰腺腺泡细胞的分离、制备及分组 首先脱颈处死雄性SD大鼠(体质量250 g左右),立即取出胰腺。在培养皿中用生理盐水清洗数次,洗净血液并除去系膜和脂肪组织。……