葛根素微丸制备及含量测定方法

常乃丹，于 辉，彭海生，张 宁

哈尔滨医科大学大庆校区药学系，黑龙江大庆 163319

葛根素微丸制备及含量测定方法

常乃丹，于 辉，彭海生，张 宁

哈尔滨医科大学大庆校区药学系，黑龙江大庆 163319

目的：制备葛根素微丸，建立葛根素微丸中葛根素含量测定的方法。方法：离心造粒法制备葛根素微丸。HPLC法测定葛根素的含量，色谱条件为C18柱，以甲醇-水（30∶70）为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为250 nm。结果：所制备的微丸产率达80%以上，葛根素含量在0.025～0.500 μg之间线性关系良好，平均回收率为98.44%，RSD为1.14%。结论：本法简便、准确、重复性好，可用于葛根素微丸的制备和质量控制。

葛根素；微丸；离心造粒；高效液相色谱法

葛根素是从中药葛根中提取的有效成分之一，具有调节血管活性物质、改善微循环、减轻钙超载等作用，已广泛应用于各型心血管疾病的治疗[1]。现有剂型有片剂、注射剂等，本文将葛根素制成微丸，具有外形美观、流动性好、载药量大、释药稳定、生物利用度高、局部刺激小等优点[2-3]。本实验采用离心制丸的方法，使用多功能滚圆机对葛根素微丸的制备进行了研究，结果显示所制备的葛根素微丸成型性好、易于控制、生产设备较为简单，并建立了测定葛根素含量的HPLC方法，分析快速、简便、可靠性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CGC-350多功能滚圆机 （重庆英格造粒包衣技术有限公司）、高效液相色谱仪（SPD-20，日本岛津）、KH3200DE 型数控超声波清洗器 （昆山禾创超声仪器有限公司）、101-4-BS电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）、电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）。

1.2 试药

葛根素提取物（西安润堡生物科技有限公司，产品规格：葛根素99%，批号：20101113）、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、超纯水、50%甲醇（色谱纯）。

2 方法与结果

2.1 葛根素微丸的制备[4-5]

2.1.1 丸芯的制备

定量称取微晶纤维素干燥粉末200 g投入滚圆机的容器转盘上，喷入纯净水作为粘合剂，将机器参数设置为：转盘转速250 r/min、鼓风频率10 Hz、进风温度10℃、蠕动泵转速20 r/min，随着转盘不断旋转并鼓风，逐渐形成较大粒子获得球形母核，少量多次加入微晶纤维素，控制转盘内粒子的湿度、粒径及圆整度，不断包敷使母核逐渐增大，至圆整度较好时从出料口取出，置于烘箱中经5～6 h烘干，过筛即得丸芯。

2.1.2 微丸的制备

称取所制备葛根素丸芯适量置滚圆机的转盘上，喷入3%的羟丙甲基纤维素溶液作为粘合剂，将机器参数设置为：转盘转速140 r/min，鼓风频率28 Hz，进风温度10℃，蠕动泵转速10 r/min，待转盘匀速运转并使丸芯得到足够润湿后少量多次加入葛根素提取物，使葛根素均匀地包敷于丸芯上，控制其圆整度和湿度，待葛根素微丸逐渐长大，圆整度良好时，可减慢转速，打开出料阀，将微丸置于烘箱中5～6 h，过筛即得葛根素微丸。

2.1.3 收率

采用筛析法，取50 g微丸，手工筛分，计算24～18目微丸的百分重量比，结果为81.6%。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件[6]

色谱柱采用伊力特Hypersil OSD C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测器：日本岛津 SPD-20A；流动相：甲醇-水=30∶70，等浓度洗脱；流速：1.0 ml/min；检测波长：250 nm；柱温：室温；进样量：10 μl；理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4 000，分离度应大于1.5。

2.2.2 溶液的配制[7-8]

2.2.2.1 对照品溶液制备 精密称取葛根素对照品0.005 0 g，置50ml容量瓶中，加50%的甲醇至刻度，摇匀，超声处理30min，作为贮备液（100 μg/ml）。

2.2.2.2 供试品溶液制备 取所制备的葛根素微丸约1 g，置研钵中研细，取约0.5 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加入50%的甲醇置刻度，密塞，称定重量，摇匀，超声（功率250 W，频率30 kHz，温度20℃）处理30 min，放冷后再称定重量，用50%的甲醇补足缺失重量，摇匀，经微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液即得。

2.2.2.3 阴性对照溶液制备 取不含葛根素的阴性试剂（葛根素微丸丸芯），按供试品溶液的制备方法制备即得。

2.2.3 专属性试验

按含量测定的方法测定HPLC色谱图，并进行专属性考察，结果提示阴性溶液无干扰。见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2.4 线性关系考察

精密量取对照品贮备溶液（100 μg/ml），分别制成浓度为 50.0、25.0、10.0、5.0、2.5、1.0 μg/ml的 6 个样品， 分别吸取10 μl，按上述色谱条件进样，测得峰面积。以峰面积A为纵坐标，以葛根素的进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线，并求得回归方程为：A=8.656×104X+5.203×103，r=0.999 7。 结果表明，葛根素的进样量在0.025～0.500 μg范围内具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液（25 μg/ml）10 μl，按上述色谱条件，连续进6次，测定峰面积，6次测定的峰面积平均值为2 109 529，RSD=2.32%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液（5 μg/ml），在 0、2、4、6、8、10、12、24 h 内，分别进样 10 μl，按上述色谱条件测定，RSD=1.25%，表明供试品溶液在24 h内化学性质稳定。

2.2.7 重复性试验

精密称取葛根素提取物，按供试品溶液的制备方法制备，用HPLC按含量测定方法测定，进样6次。测定结果显示，葛根素的平均含量为0.11 g/g，RSD为5.3%。

2.2.8 加样回收率试验

取已知含量的样品5份，每份约0.25 g，分别精密加入葛根素对照品溶液，按含量测定的方法测定，计算回收率，结果表明葛根素的回收率良好，见表1。

表1 加样回收率试验

2.2.9 样品含量测定

精密称取适量的葛根素微丸，按供试品溶液的配制方法制备，在上述色谱条件下对3批葛根素微丸溶液进行HPLC分析，结果第1批葛根素含量为0.11 g/g、第2批葛根素含量为0.09 g/g、第3批葛根素含量为0.11 g/g，平均值为0.10 g/g。

3 讨论

本实验制丸所用材料均为常用辅料，价格低廉；喷液、撒粉、干燥同时进行，周期较短；但是由于多功能滚圆机蠕动泵与物料距离较近，使润湿剂雾粒到达物料表面的距离明显缩短，附着力较强，在操作过程中要注意控制转速的稳定和添加辅料的频率，避免粘粒；制粒过程中由经过窄缝的热空气进行干燥，风量较小，干燥强度较低，不致使物粒过早干燥；用粉末制丸时初始阶段有粉末飞扬，可采取适量增加润湿剂的方法用以消除；在制备丸芯的过程中，由于所用的润湿剂为水，粘合强度较成丸过程中所用的羟丙甲基纤维素溶液小，因此在制备微丸的过程中转盘转速应稍大于制备丸芯时的转速，避免物料粘在制丸机容器壁。

通过用50%甲醇、75%甲醇以及30%的乙醇对同一条件下的相同样品进行溶解显示，在实验所采取的色谱条件下，50%的甲醇测定相同样品含量准确，峰形好，分离度高，故本实验采用50%的甲醇作为溶剂。

先后用甲醇-水-冰醋酸（25∶75∶0.2）、乙腈-水（10∶90）、甲醇-水（25∶75）、甲醇-水（30∶70）为流动相，结果在甲醇-水（30∶70）的条件下，供试溶液中的葛根素与相邻组分分离度好，阴性样品无干扰。故结合本实验所采取的实验条件，选用甲醇-水（30∶70）为流动相，测定结果显示具有良好的线性关系。

[1]蔡志春,王松青,方云祥.葛根素对溶血磷脂酰胆碱诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响[J].中国医药导报,2010,7(11):15-17.

[2]袁亮,张建琴,林婷婷,等.离心造粒法制备复方丹参微丸[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(5):10-14.

[3]王锦玉,仝燕,王智民,等.牛黄上清微丸的制备工艺[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(17):10-14.

[4]李晓明,陶秀梅,王晓丽,等.应用离心造粒法制备盐酸二甲双胍微丸的研究[J].西安交通大学学报:医学版,2008,29(5):590-594.

[5]许小红,赵东虎,王道均.离心造粒法制备贯叶连翘提取物微丸[J].中国药师,2010,13(9):1283-1285.

[6]李东辉.HPLC测定参苏感冒片葛根素的含量[J].中国药事,2008,22(2):135-136.

[7]顾方,李钦,陈晓文,等.HPLC法测定复方冬红合剂中葛根素含量[J].现代中西医结合杂志,2010,19(7):908-909.

[8]程杰,刘姣,杨旭杰,等.HPLC法测定愈风宁心软胶囊中葛根素的含量[J].河北中医药学报,2010,25(1):35-36.

Preparation and the content determination of Puerain Pellets

CHANG Naidan,YU Hui,PENG Haisheng,ZHANG Ning
Department of Pharmacy,Daqing Campus of Harbin Medical University in Heilongjiang Province,Daqing 163319,China

Objective:To prepare Puerain Pellets and establish a method for determining the content of Puerain in Puerain Pellets.Methods:The Puerain Pellets were prepared by using a centrifugal granulator.The HPLC method was established for determination of Puerarin in Puerarin Pellets.A ODS C18column was adopted.The mobile phase was methanol-water solution (30∶70)with the flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was 250 nm.Results:The productivity was more than 80%,the linearity range was 0.025-0.500 μg,The average recovery of Puerarin was 98.44%,RSD was 1.14%.Conclusion:The method is simple,precise and reliable,which is suitable for preparing and determining Puerain Pellets.

Puerain;Pellets;Centrifugal granulation;HPLC

R927.2

A

1673-7210（2011）10（c）-060-03

常乃丹（1983-），女，本科学历，主要从事药物制剂研究。

于辉（1968-）女，本科学历，副教授，主要从事药物制剂研究。

2011-07-01）