正交试验优选舒欣胶囊中丹参酮ⅡA提取工艺

赵 珉，郭 靖，张红岩，韩大庆，周 丹，张楠楠

(1.吉林大学第一医院，吉林长春 130021;2.吉林省中医药科学院，吉林长春 130021)

正交试验优选舒欣胶囊中丹参酮ⅡA提取工艺

赵 珉1，郭 靖1，张红岩2，韩大庆2，周 丹2，张楠楠1

(1.吉林大学第一医院，吉林长春 130021;2.吉林省中医药科学院，吉林长春 130021)

目的:优选舒欣胶囊中丹参酮ⅡA的提取工艺。方法:以丹参酮ⅡA的含量为指标，以醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为考察因素，采用正交试验法，筛选处方中丹参的醇提取最佳工艺。结果:丹参用90%乙醇回流提取2次，每次加醇7倍量，提取1.5 h。结论:该工艺合理、可行，可为舒欣胶囊进一步的工业化生产提供依据。

舒欣胶囊;正交试验;提取工艺;丹参酮ⅡA

舒心胶囊由黄芪、丹参、没药、血竭等药物组成，将益气、养阴与活血、化瘀相结合，是标本兼治，虚实兼理的有效方剂。本实验以舒欣胶囊的提取工艺为研究对象，重点在于确定胶囊的提取工艺路线，利用正交试验方法，以最少的试验次数，找到最佳的提取工艺条件，确定工艺参数，并建立相应的含量测定方法，为该药的开发应用提供了科学依据。

1 仪器与材料

岛津LC-10AT高效液相色谱仪(岛津);岛津SPD-10Avp检测器;N2000色谱工作站;电子分析天平(德国赛多利斯，1/100000);恒温水浴锅(HH-2型，国华);超声波清洗器(DS-7510DTH)。

丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所，批号110766-200518，供含量测定用);甲醇、乙腈为色谱纯;其余试剂均为分析纯。丹参、黄芪、没药、血竭等药材购自(吉林长春宏检药材经销公司)。

2 方法与结果

2.1 因素水平表设计 采用L9(34)正交表进行正交试验，选择影响丹参醇提取工艺中的4个主要因素:A(醇浓度)、B(加醇量)、C(提取时间)、D(提取次数) ，每个因素3个水平进行试验，见表1。

表1 因素水平表

2.2 试验方法 按L9(34)正交实验表设计方案，取丹参药材9分，每分50 g，按正交表所设计方案提取，提取液合并，滤过，减压回收乙醇并转移至500 mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，供含量测定用。

2.3 含量测定 对照品溶液制备:精密称取丹参酮ⅡA对照品10 mg，置于50 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;精密量取2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含丹参酮ⅡA 16μg)。

供试品溶液制备:精密吸取样品溶液2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，加95%的乙醇稀释至刻度，摇匀，供含量测定用。

测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。计算正交表每组实验中所提取的丹参酮ⅡA的含量。

色谱条件:色谱柱:Agilent Z orbax SB-C18(4.6×150 mm);流动相 :甲醇 - 水(75∶25);波长 :270 nm;流速:1 mL/min;柱温:250℃;进样量:对照品溶液5μL，样品溶液5μL。

2.4 正交试验结果 见表2。

2.5 正交试验结果分析

2.5.1 直观分析 结果表明，各因素极差值的高低影响丹参乙醇提取工艺因素大小顺序为A＞D＞C＞B，即乙醇浓度(因素A)为主要影响因素，而提取次数(因素D)、加醇量(因素B)和提取时间(因素C)不是重要因素。从 K值看，醇浓度(因素A)各水平顺序为 I1＞I2＞I3，说明3个水平中，以90%乙醇为最佳;加醇量(因素B)各水平间大小顺序为I2＞I3＞I1，说明3个水平中，以7倍量乙醇提取即可，其极差是4个因素最小的，即影响最小;提取时间(因素C)各水平之间大小顺序为 I2＞I3＞I1，以 I2(1.5 h)为最高;提取次数(因素D)各水平之间大小顺序为I2＞I3＞I1，说明提取次数增加，丹参酮ⅡA含量不变，以提取2次为最佳。

表2 丹参药材乙醇提取工艺正交试验结果

2.5.2 方差分析 见表3。

表3 方差分析

2.5.3 正交试验结论 试验结果得出，丹参乙醇提取工艺最佳条件为A1B2C2D2，即药材用90%乙醇回流提取2次，每次加醇7倍量，提取1.5 h。

2.6 验证性实验 按照筛选出的最佳组合A1B2C2D2做验证性实验，进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性。称取丹参药材3分，50 g/分。按已确定的最佳提取工艺，即90%乙醇7倍量，提取2次，每次1.5 h，操作方法同前，测得丹参酮ⅡA含量分别为:0.110 1、0.112 4、0.114 6 g ，平均为 0.112 4 g。

3 讨论

3.1 丹参[1]性微寒，味苦，具有活血祛瘀、养血安神、调经止痛、凉血消痈的功效，对冠心病、心血管病常服疗效较好，对慢性肝炎、早期肝硬化等疾病具有良好效果。就其提取方法有超声提取、渗漉法和乙醇回流法。实验研究[2]证明乙醇回流提取法能提高丹参有效成分的含量，减少溶媒使用量，缩短时间，节约成本，保护资源。故本实验采用乙醇回流提取法。

3.2 本实验充分考虑了丹参酮ⅡA对热、光敏感易分解变质，由于其不稳定性可能引起的差异，做了相应的防范措施，如避光阴凉处保存，尽快测定，烘干温度一定控制在80℃以下，常温测量等。

3.3 其他处方中药材与丹参药渣采用水煎煮提取方法，以丹酚酸B为含量测定指标，采用正交试验法，优选加水量、提取时间及提取次数等工艺参数，从而得出舒欣胶囊最佳的水煎煮提取工艺。

[1]赵明霞.丹参药用成分及提取工艺研究[J].中国民族民间医药 ，2010 ，19(3):39-40.

[2]陈红霞，陈芳芳，颜新宇.丹参中丹参酮ⅡA 3种提取方法的比较研究[J].中国现代药物应用，2010，4(4):167-168.

R285.1

A

1007-4813(2011)03-0355-02

吉林省科技发展计划项目(编号:20080925)。

赵 珉(1962-)，女，副主任药师，硕士研究生导师。研究方向:临床药理学研究。

2011-03-07)