HPLC法测定维库溴铵含量及有关物质

杜 宁

(江苏省食品药品检验所，江苏 南京 210008)

维库溴铵是80年代开始应用，为单季铵类固醇类中效去极化肌松药，在ICU重症病人使用呼吸机时，用于防止人机对抗现象，因该药代谢快，无肌颤现象，所以较其他肌松药的使用更为广泛［1］。心血管稳定性是其突出的优点，常用于危重病人的全身麻醉［2］，文献报道［3］用高效毛细管电泳法测定其含量，但对仪器要求较高，而且需要内标，步骤繁琐。我们建立了高效液相色谱法测定含量和分离有关物质，为其质量研究、稳定性考察和有效期预测提供了有效的分析手段。

1 仪器和试药

HP 1100系列高效液相色谱仪，DAD检测器。维库溴铵对照品(USP提供，批号为1711155);维库溴铵(某厂提供，批号分别为091204，091205，091206);甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 AKZO NOBEL Kromasil ODS柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温 30 ℃。以 0.3 M 甲酸铵溶液 － 甲醇(40∶60)为流动相，检测波长为210 nm。

2.2 分离专属性 称取本品 0.1 g，加 0.01 mol·L－1的盐酸溶液溶解并稀释至50mL。取5mL溶液，分别加1 mol·L－1盐酸溶液，1 mol·L－1氢氧化钠溶液，30%过氧化氢溶液2mL和100℃水浴加热1 h，中和后加流动相至10mL，进样，考察降解物的分离性能，分离良好，见图1。

图1 酸破坏(A)、碱破坏(B)、氧化破坏(C)和高温破坏(D)色谱图 1.维库溴铵;2.溴离子

Br离子峰定位:称溴化钾 0.124 g，加 0.01 mol·L－1盐酸溶液溶解至10mL，进样，见图2。

图2 溴化钾色谱图 2.溴离子

2.3 标准曲线 称取五氧化二磷减压干燥至恒重的对照品200.02mg，加 0.01 mol·L－1的盐酸溶液溶解稀释至 100mL。分别精密量取 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，25.0mL置50mL量瓶中，加0.01 mol·L－1的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。分别量取20μL注入色谱仪，记录色谱图。以浓度(C，μg·mL－1)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归，回归方程为:A=15038C+752840，r=0.9995(n=7)。

结果表明，在 20.0 ～1000.1 μg·mL－1范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。

2.4 重复性试验 按照含量测定方法，另一试验者称取样品，进样，分别测定，含量的RSD均小于2.0%。

2.5 精密度试验 取标准曲线高、中、低3个浓度样品，分别进样5 次，RSD 分别为1.0%、0.8%、0.9%。

2.6 稳定性试验 取含量测定项下的供试品溶液，分别于0，2，4，8，12 h，取 20μL 注入色谱仪，记录峰面积，RSD 为0.9%，表明本品在12 h内稳定。

2.7 检出限和定量限 取浓度为2mg·mL－1的对照溶液，用0.01 mol·L－1的盐酸溶液稀释成一系列由高到低梯度浓度的溶液，维库溴铵的检出限(S/N=3)为0.4 μg，定量限(S/N=10)为 1.3 μg 。

3 样品的测定

3.1 有关物质的检查 取本品，加0.01 mol·L－1盐酸溶液分别制成每1mL含5.0mg的供试品溶液和每1mL中含0.1mg的对照溶液。取对照溶液20μL注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10% ～25%，吸取上述两种溶液20μL分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，除溶剂和溴离子峰外，其他峰为杂质，见图3。

3.2 含量测定 称取本品 0.1 g，加 0.01 mol L－1的盐酸溶液制成每1mL含2mg的溶液，进样，另称取五氧化二磷减压干燥至恒重的维库溴铵对照品，同法制备测定，按外标法以峰面积计算。

非水滴定法测定含量 称取本品0.25 g，加冰醋酸15mL与醋酐5mL溶解，加醋酸汞试液5mL与萘酚苯甲醇指示液2滴，用高氯酸滴定液(0.1 mol·L－1)滴定至显黄绿色，滴定结果用空白试验校正。每1mL的高氯酸滴定液(0.1 mol·L－1)相当于31.89mg的C34H57BrN2O4，见表1。将实验结果进行比对，结果证明，HPLC法测定含量具有可行性。

图3 维库溴铵样品有关物质色谱图

表1 样品测定结果比较(%，n=3)

4 讨论

4.1 改变方法的原因 滴定法测定含量要用到冰醋酸和醋酐，污染重，对人损伤大，并且黄绿色终点不灵敏，故改为HPLC法测定。

4.2 流动相的选择 试验中曾采用乙腈作为有机相，但峰形拖尾严重。甲酸铵溶液的浓度为0.3 M，太大会损伤色谱柱。

4.3 柱温的影响 本试验考察了不同的柱温(25，30，40℃)，发现组分的保留时间随柱温升高而缩短，在30℃时可以有效分离，考虑到温度过高可能引起样品分解，故采用30℃。

4.4 试验结果表明，在本法色谱条件下，主峰和有关物质分离较好，无干扰，可用于含量测定和杂质检查。

［1］李爱萍，周琳，姚亚春，等。注射用维库溴铵在静脉泵注时的护理探讨［J］.当代护士(学术版)，2004，10(10):93－94.

［2］陆志俊，张芝芳，于布为.国产维库溴铵神经肌肉阻滞效应及对心血管的影响［J］.上海医药，2000，21(9):35－36.

［3］韩加怡，黄宗玉，陈钰.高效毛细管电泳法测定注射用维库溴铵的含量［J］.中国药科大学学报，1998，29(6):443－445.