高效液相色谱法测定抗痨净颗粒中枸橼酸含量

李立冬，鲁金凤，金立弟

抗痨净由乌梅、麦芽、白及、地骨皮、黄精等组成，具有消瘿散结的功效，对骨痨、肺痨有良好疗效，对骨结核疗效更佳。其主要质量标准不包括含量测定，本研究中利用高效液相色谱法建立抗痨净中枸橼酸含量的测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;样品(市售品);枸橼酸对照品(中国药品生物制品检定所;样品(市售品，批号为20090801，20090802，20090803);乙腈为色谱纯，纯化水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Apollo C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈－0.5%磷酸二氢铵溶液(3∶97，用磷酸调节pH至3.0);检测波长:210 nm;进样量:10μL。

2.2 溶液制备

精密称取枸橼酸对照品适量，加水溶解并制成含枸橼酸1.98 g/L的对照品贮备液。取抗痨净颗粒样品10 g，研细，精密称定，精密加水50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量并用水补足减失的质量，摇匀，离心取上清液即得供试品溶液。取不含乌梅的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:分别精密吸取阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图(图1)，在该色谱条件下，阴性对照品对测定无干扰。

线性关系考察:称取对照品适量，加水定量稀释成浓度为1 mL中含枸橼酸 9，45，90，135，180 g的对照品溶液，各取 10 μL 进样测定，以枸橼酸峰面积(A)对进样质量浓度(C)进行线性回归处理，得回归方程 A=148.90C －4.658，r=0.999 9(n=5)。表明枸橼酸质量浓度在9～180g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积积分值。结果的 RSD=0.82%(n=6)，表明仪器密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温放置 0，2，4，6，8，10 h时，再按2.1项下色谱条件测定峰面积积分值。结果 RSD=0.95%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

图1 高效液相色谱图

重现性试验:精密称取同一批号样品6份，按拟订方法制备供试品溶液，依法测定含量。结果供试品中枸橼酸平均含量为9 g/袋，RSD=0.79%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品约10.06 g(含量为9.23 g/g的供试品)，平行取样6份。另精密加入枸橼酸对照品溶液适量，分别精密吸取该对照品溶液适量，加入6份供试品中，按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 枸橼酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别量取对照品溶液和供试品溶液进样测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算得批号分别为20090801，20090802，20090803 的 3 批样品中枸橼酸含量分别为 9.13，9.25，9.04 g/袋。

3 讨论

在抗痨净颗粒枸橼酸含量测定中考察了多种流动相，结果本方法采用的流动相峰形较好，保留时间较适中。本方法灵敏、可靠、专属性强、重现性好，可作为抗痨净颗粒的含量分析方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:73.