川芎嗪对LPS致心肌细胞损伤的影响及机制研究

刘 丹，尹 东，曾 姝，何 明

(1.南昌大学医学院药理学教研室，2.江西省分子医学重点实验室，江西 南昌 330006)

四甲基吡嗪(TMPZ)又名川芎嗪，是从川芎的生物碱中分离得到的有效单体。川芎嗪有良好的心肌保护作用，主要与其具备抗钙与抗自由基双重作用有关［1－2］。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)为革兰阴性细菌胞壁的重要成分，是引起炎症反应和休克的关键介质之一，常引起全身炎症反应并可导致多器官功能衰竭，累及心脏。有研究报道［3］，LPS可增加心肌细胞NADH氧化酶的表达及过氧化物增殖而导致心肌损伤。鉴于川芎嗪的抗氧自由基作用，我们假设川芎嗪可以保护LPS损伤的心肌细胞，目前尚未见报道。因此，本研究利用LPS诱导心肌细胞损伤，观察川芎嗪对LPS诱导的心肌细胞损伤的影响，并检测活性氧(reactive oxygen species，ROS)生成、细胞的氧化应激状态及NF-κB p65的核移位情况，探讨川芎嗪对抗LPS损伤的可能机制。

1 材料与方法

1.1 受试药品与主要试剂 TMPZ:中国药品生物制品检定所，NF-κB p65、β-actin抗体及相应二抗:Santa Cruz;DCHF-DA:Molecular probes;胎牛血清:杭州四季青生物工程材料有限公司;MDA、SOD、GSH-Px检测试剂盒:南京建成生物工程研究所;胞核-胞质蛋白制备试剂盒:北京普利莱基因技术有限公司;MEM培养基:Gibco BRL;LPS(伤寒菌内毒素脂多糖)、胰酶、HEPES、MTT、增强化学发光印迹试剂、硝酸纤维素膜(Amersham，UK)、丙烯酰胺、PMSF、亮肽素、SDS、亚甲基双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED、EDTA和DTT:Sigma公司;其它试剂均为分析纯。

1.2 心肌细胞的分离培养 参照以前的实验方法［4］，以出生1～3 d的SD乳鼠心室肌组织为实验对象，0.1%胰酶消化分离，MEM培养基(含15%胎牛血清)混悬后放……