某县204例乙型肝炎病毒基因型及其临床相关性分析

某县204例乙型肝炎病毒基因型及其临床相关性分析

目的了解重庆垫江县地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布及其与临床的相关性。方法选取垫江县HBVDNA阳性的HBV感染者204例，应用聚合酶链反应（PCR）和直接测序法检测HBV基因型并分析其与临床的相关性。结果204例 HBV－DNA阳性血清标本中，测序成功为146例。其中B型98例（67.12%），C型47例（32.19%），D型1例（0.69%），C基因型丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）指标高于B基因型（P＜0.05）；C基因型患肝硬化和肝细胞癌的比例高于B基因型（P＜0.05）。结论B型为本地区的优势基因型，并且C型HBV感染者易引起肝脏的严重损伤。

肝炎病毒，乙型；基因型；临床相关性

HBV感染呈全球性分布，各地区不同程度的流行性与生活习惯、经济条件、人种等因素有关外，与病毒本身的生物学特点更加密切相关［1］。从1988年开始，根据HBV全基因序列异质性大于等于8%的界限，对HBV核苷酸进行序列分析，HBV被分为8个基因型：即 A、B、C、D、E、F、G和 H［2］。HBV基因型呈地域分布，不同基因型在致病性、对药物的敏感性及基因变异等方面均有差异［3］。现将垫江县204例乙型肝炎病毒基因型及其临床相关性分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取重庆市垫江县人民医院门诊及住院的HBV－DNA阳性的HBV感染者204例，其中，慢性乙型肝炎183例，肝硬化15例，肝细胞癌6例；疾病的诊断依据参照2000年全国肝炎会议拟订方案。所有标本经乙型肝炎5项检测，其中115例表面抗原、e抗原、核心抗体为阳性，85例表面抗原、e抗体、核心抗体为阳性，3例表面抗原、e抗原为阳性，仅1例表面抗原阳性。标本（血清）保存于－80℃冰箱。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 微量样品基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）、2×Pfu PCR Master Mix、1 000bp DNALadder购自德国Qiagen公司；HBV血清学标志物检测试剂盒、HBVDNA荧光定量PCR试剂盒购自广州达安有限公司，琼脂糖购自美国Gibco公司，引物由TaKaRa有限公司合成。PCR扩增仪为北京生物有限公司产品，HC－3018R型高速冷冻离心机为科大创新公司产品，凝胶图像分析系统DocGel2000为美国BioRad公司产品，荧光定量PCR仪为美国ABI公司产品。

1.2.2 HBV S基因扩增和测序 按照Qiagen微量样品基因组DNA提取试剂盒说明书处理标本，获得模板DNA。PCR扩增 HBV S基因：正义链：5′－GCG GGG TTT TTC TTG TT GA－3′反义链：5′－GGG ACT CAA GAT GTT GTA CAG－3′，引物由TaKaRa有限公司合成。PCR反应体系（总量25μL）：2×Taq PCR Master Mix 13μL；模板DNA 3μL；正义链引物（10μmol／L）1μL；反义链引物（10μmol／L）1μL；双蒸水7μL。PCR反应条件：95℃10min；95℃30s；52℃45s；72℃90 s；72℃10min；35个循环。将204份PCR扩增产物（25μL）送北京华大基因公司测序。将测得基因序列与Gen Bank进行同源性比较，以确定HBV基因型。

1.2.3 HBV－DNA、肝 功 能 及 乙 型 肝 炎 标 志 检 测 运 用ABI7300荧光定量PCR仪检测HBV－DNA；采用AU2700全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）；应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测 HBsAg、抗－HBs、HbeAg、抗－Hbe、抗－HBc等乙型肝炎标志物，按产品说明书操作。

1.3 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，计数资料采用χ2检验和t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

测序成功146例，其中，慢性乙型肝炎125例，肝硬化15例，肝细胞癌6例；B型98例（67.12%），C型47例（32.19%），D型1例（0.69%）；B型男66例，女32例，年龄（33±16.5）岁；C型男32例，女15例，年龄（35±13.6）岁；D型男0例，女1例，年龄22岁。HBV基因型与患者血清学标志物及HBVDNA载量的关系、患者临床表现及预后的关系及不同HBV基因型与病情比较见表1～3。

表1 B、C基因型HBV－DNA水平及HBeAg阳性率比较

表2 B、C型ALT、AST比较

3 讨 论

HBV基因型是长期点突变累积形成的，由于HBV在逆转录过程中的不对称转录和缺乏校对酶的作用，HBV突变率较高。最近有报道在越南发现新的 HBV基因型I［4］，使得HBV基因型增至9个。随着进一步深入研究，发现同一种基因型，病毒的序列特点及临床表现也存在一定的差异，根据全基因组序列异质性大于4%而小于8%的原则，HBV基因型进一步可分为不同的基因亚型，如：A基因型可分为A1（Aa）、A2（Ae）、A3（Ac）亚型；B基因型可分为 B1（Bj）、B2（Ba）、B3、B4亚型；C基因型可分为C1、C2、C3、C4亚型等。近年的研究表明，HBV分型在HBV基因型之间存在一定的流行病学与临床特征差异［5］。Zeng等［6］研究表明，中国 HBV感染者的基因型主要是B和C型，南方地区主要以B型为主，北方地区则以C型较多。本文应用HBV S区基因直接测序法来进行分型，该方法准确度高，结果可靠；检测出垫江县HBV感染者的基因型以B型居多，与文献报道结果一致；但本调查结果也显示，HBV基因型与性别及年龄之间没有相关性。

HBV感染人体后，由于感染者的HBV基因型、年龄、机体免疫力、及HBV－DNA载量等的不同，他们的临床表现及预后也有差异。可表现为：一过性病毒血症、急性肝炎、无症状的病毒携带状态、慢性肝炎、肝衰竭、肝硬化及肝癌。本研究显示，C型感染者血清ALT、AST水平均高于B型，且基因C型感染者较B型感染者更易发生肝硬化以及肝细胞癌；这与钟崇芳等［7］报道，基因C型感染者其肝脏炎症坏死评分高于基因B型感染者，和基因C型HBV感染者较B型感染者更易发展为肝硬化和肝癌［8］的报道一致。提示HBV基因型与疾病的活动性可能存在一定关系。

本调查对垫江县HBV感染者不同基因型的临床特征分析提示，基因B型和基因C型感染者HBeAg阳性率和HBVDNA水平的差异无统计学意义。对于不同基因型HBV－DNA水平及HBeAg阳性率之间关系的报道众说纷纭［9－10］。有研究报道，基因C型较B型的HBV－DNA水平更高；也有报道称，在HBeAg阳性患者中HBV－DNA病毒载量较高的是：基因C型，而HBeAg的阴性患者中基因D型者病毒载量更高［11］。也有报道称，不同基因型间的HBeAg阳性率及HBV－DNA没有关系。因此，不同HBV基因型间 HBeAg阳性率和 HBVDNA含量的关系有待进一步研究。

还有研究表明，HBV基因型与抗病毒治疗有关［12］，但由于目前缺乏大量HBV基因型分型与治疗关系的前瞻性研究，国际上还没将HBV基因型分型作为用药指标和治疗标准，然而对基因型的研究却仍然势在必行，希望通过大家的共同努力能使其成为乙型肝炎病毒个性化治疗的一个重要指标。

通过本研究了解到垫江县HBV基因型的分布情况及其与临床表现及预后的关系，有利于指导临床医生选择合理的治疗方案及个体性指导用药，为有效控制本县乙型肝炎病情提供了实验依据。

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Analysis on 204 cases of hepatitis B virus genotypes in a county and their clinical correlation

MaMingyan1，Liao Liya1，Yu Dengqiong1，Xiong Zhongzheng1，GuoYuanyuan2，Liao Pu2△
（1.Department of Clinical Laboratory，Dianjiang County People′s Hospital，Chongqing408300，China；2.Chongqing Municipal Clinical Laboratory Center，Chongqing400014，China）

ObjectiveTo investigate the distribution of hepatitis B virus（HBV）genotypes in Dianjiang area of Chongqing and their clinical correlation.MethodsSerum samples from 204HBV－DNA positive patients with chronic HBV infection，including 183cases of chronic hepatitis B（CHB），15cases of liver cirrhosis（LC）and 6cases of hepatocellular carcinoma（HCC），were collected and detected for HBV genotypes by PCR and direct sequencing.Their clinical correlation was analyzed.ResultsOf all 204 HBV－DNA positive serum samples，146cases were detected successfully by direct sequencing，including 98cases（67.12%）of genotype B，47cases（32.19% ）of genotype C and only 1cases（0.69%）of genotype D.The value of ALT and AST in genotype C was significantly higher than that in genotype B（P＜0.05）；genotype C was more prevalent in LC and HCC than genotype B（P＜0.05）.ConclusionGenotype B is the superior genotype in this area.Genotype C may induce more serious damage of liver in the patients with chronic HBV infection.

hepatitis B virus；genotype；clinical correlation

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.35.024

A

1671－8348（2012）35－3747－02

△

，Tel：（023）63519127；E－mail：liaopu＠sina.com。

2012－08－13

2012－10－23）

△通讯作者，Tel：13983186966；E－mail：469498331＠qq.com。

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