RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

袁凯 王勇 童继春 袁卫东 陈栋

（南京医科大学附属常州第二人民医院胸心外科，江苏 常州 213003）

缺氧微环境在肺癌发生发展中起着重要作用，缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factors，HIFs）是缺氧微环境中的关键分子[1]。研究认为，HIFs的功能主要是由α亚基决定的[2]。HIF-1α和 HIF-2α是其中两种亚型，两者虽然结构相似但功能存在差异。我们先前的研究显示，HIF-1α和 HIF-2α在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）组织中广泛表达，其中 HIF-2α表达与肿瘤大小、TNM分期以及患者预后关系密切，相反HIF-1α则无明显相关[3－4]。在另 一项研 究中，我 们对人肺 腺癌A549细胞株成功进行了缺氧培养，并在多个缺氧时点进行了 HIF－α的检测。结果显示，HIF-1α对于急性缺氧环境极为敏感，其表达在4 h即至高峰，而HIF-2α在慢性缺氧环境有持续较强表达[5]。通过该项研究我们认识到，HIF-1α和 HIF-2α在缺氧过程调节中可能各有侧重，即HIF-1α是急性缺氧期的主要反应因子，而HIF-2α则主导慢性缺氧调节。NSCLC等实体肿瘤所在的慢性缺氧环境中，HIF-2α可能发挥更大的作用。本研究利用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）技术抑制人肺腺癌细胞株A549中HIF-2α基因的表达，观察A549侵袭转移能力的变化，进一步探讨 HIF-2α在NSCLC中的生物作用机制。

1 资料与方法

1.1 材料 A549细胞株购自中科院上海细胞生物学研究所，pGPU6／GFP／Neo质粒购于上海GeneP-harma制药技术有限公司，实验所需各种酶购自Takara公司，鼠抗人HIF-2α单克隆抗体购自Abcam公司，Lipofectamin 2000购自Invitrogen公司，Transwells小室购自美国Corning公司，Matrigel基质胶购自美国BD Biosciences公司。

1.2 主要仪器 CY-12C便携式氧浓度监测仪（建德市梅城电化分析仪器厂）；CO2培养箱（美国Thermo公司）；Esco垂直流／水平流超净工作台（新加坡Esco公司）；5415D小型高速离心机、5702R台式冷冻离心机（德国Eppendorf公司）；……