伴微乳头成分的肺腺癌EGFR KRAS基因突变和临床病理学特征相关研究

王 静 孙蕾娜 战忠利

非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）是目前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，肺腺癌作为NSCLC的一种重要亚型，近年来其发病率在大多数国家中处于上升趋势，其临床、放射学、病理学和分子学的异质性被广泛研究。国际肺癌研究协会/美国胸科协会/欧洲呼吸协会对肺腺癌进行新分类，相关文献于2011年2月发表，其中一个大的变动新增加一个组织学类型：肺微小乳头状腺癌［1］。在本文中，我们对这一独特亚型的肺腺癌EGFR，KRAS基因突变情况和临床病理学特征进行讨论。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选择2009年2月至2010年10月天津医科大学附属肿瘤医院经手术治疗有完整临床病理资料的肺部原发肿瘤病例共144例，患者年龄32～75岁，平均年龄58.44岁，肿瘤大小0.5～9.0 cm，平均大小3.591 cm，见表1、2。

表1 EGFR突变与144例肺腺癌临床病理参数的相关性 例（%）Table1 Relationship ofEGFRmutation with the clinicopathological parameters of 144 cases of lung adenocarcinoma n（%）

表2 MPP阳性组和MPP阴性组临床病理特征 例Table2 Clinicopathological features of MPP-positive group and MPP-negative group n（%）

1.2 方法

1.2.1 病理资料 手术标本经4%甲醛固定，记录肿瘤大小，依据肿瘤大小，病变取材3～6个组织块不等，石蜡包埋，切片HE染色。显微镜下全面观察病理形态特征并根据2011年发表的肺腺癌新分型标准：MPP成分＞5%则诊断为伴微乳头成分的肺腺癌，MPP阳性组中又按MPP所占的百分比不同分为三亚组：MPP+（5%～10%）、MPP++（11%～30%）、MPP+++（＞30%），以上所有诊断均由2名病理医师独立完成。

1.2.2 DNA提取 每例病例均取新鲜的肿瘤组织冻存标本25 mg研磨并用蛋白酶K消化，于56℃条件下摇浴过夜，用Roche MagNA Pure LC DNA isolation kitⅢ-Tissue试剂盒在Roche MagNA Pure LC 2.0全自动核酸提取仪上提取DNA，并于-20℃保存。

1.2.3 RT-PCR 采用北京雅康博生物科技有限公司人EGFR、KRAS基因突变定性检测试剂盒（实时荧光PCR法）在Roche LightCycler480Ⅱ检测EGFR基因18、19、20、21外显子KRAS12、13密码子突变情况。

1.3 统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理，组间数据比较采用卡方检验，以P＜0.05作为统计学差异显著性测定界限。

2 结果

144例EGFR突变62例，突变率为43.1%，其中2例18位点突变，37例19位点突变，5例20位点突变，21例21位点突变（3例双突变）。EGFR突变在女性（P=0.018），肿瘤体积较大（P=0.016）的病例中高发；EGFR突变与年龄、吸烟状况、有无侵犯、临床分期（P＞0.05）无明显相关性。

患者的性别、年龄、吸烟状况、肿瘤大小、转移浸润情况、临床分期（P＞0.05）等相关临床病理学特征在MPP阳性组和MPP阴性组间没有统计学差异，见表2。MPP阳性组EGFR基因突变43例（55.8%）KRAS突变1例（1.3%）。MPP阴性组EGFR基因突变19例（24.6%）KRAS基因突变8例（10.4%）。MPP阳性组EGFR突变率高于MPP阴性组（P＜0.001），KRAS突变率低于MPP阴性组（P=0.016）。

MPP阳性组中EGFR突变与肿瘤体积（P=0.002）有关，与性别、年龄、吸烟状况、有无侵犯、临床分期（P＞0.05）无关，见表3。MPP（+、++、+++）三亚组间患者的性别、发病年龄、吸烟状况、肿瘤大小、浸润转移情况、临床分期（P＞0.05）相关临床病理学特征没有统计学差异，见表4。MPP（+、++、+++）三亚组EGFR基因突变分别为9例（42.9%）、21例（60.0%）、12例（57.1%），P=0.932；KRAS突变例数太少差异无统计学意义，见表5。

表3 EGFR突变与MPP阳性组临床病理参数的相关性 例（%）Table3 Relationship ofEGFRmutation with clinicopathological parameters in MPP-positive group n（%）

表4 MPP（+,++,+++）三组间临床病理特征 例Table4 Clinical and pathological features of MPP（+,++,+++）subgroups n（%）

表5 MPP（+,++,+++）三组的EGFR基因突变状况 例Table5 EGFR mutation status of MPP（+,++,+++）subgroups（n）

3 讨论

WHO2004版肺癌组织学分类仅简单描述了伴微乳头成分的肺腺癌（pulmonary adenocarcinoma with a micropapillary pattern，MPPAC），国内外学者对其开展了大量研究并逐渐认识到伴MPP成分的肺腺癌侵袭性强易转移［2］，有独特的分子生物学行为。国际肺癌研究协会/美国胸科协会/欧洲呼吸协会对肺腺癌进行新的分类，增加了“肺微小乳头状腺癌”这一亚型，按照新分类的定义MPP所占比例＞5%时诊断为“伴微乳头成分的肺腺癌”，MPP所占比例＞40%且为主导成分时诊断为“以微乳头成分为主型肺腺癌”［2］。

EGFR基因突变自从作为临床EGFR-TKIs靶向药物的预测因素后，国内外对其开展了大量的研究，多项研究表明EGFR基因在亚裔、女性、非吸烟、腺癌患者中突变率高［3］。我们对144例肺腺癌EGFR突变研究发现其在女性（P=0.018），肿瘤体积较大（P=0.016）的病例中突变率明显增高；EGFR突变百分比在较年轻患者、非吸烟病例中高，但差异无统计学意义。可能的原因是实验病例数少并在选择病例时把形态学上不能肯定辨别为微乳头结构的病例剔除。

国际肺癌研究协会/美国胸科协会/欧洲呼吸协会对肺腺癌进行新的分类后，进一步研究了按照新分类标准分类后的肺腺癌各亚型和EGFR突变的相关性［4］，研究发现EGFR突变同微乳头为主导的亚型和非实性亚型相关，他们的研究发现“伴微乳头成分的肺腺癌”EGFR突变率为73%，“以微乳头成分为主导型的肺腺癌”EGFR突变率为83%。本研究结果发现伴微乳头成分的肺腺癌基因突变率为55.8%，这可能是我们对微乳头形态学上的判别误差，肺腺癌的异质性，取材的局限性，实验仪器误差等原因。MPP阳性组EGFR突变频率高于MPP阴性组，这进一步说明微乳头为主导成分的组织学特点可以作为对EGFR突变的预测指标［5］。

KRAS突变已被证实是厄洛替尼或吉非替尼治疗预后的负相关因素［6］。有研究表明KRAS突变与患者的性别、病理分型、种族有关，而与患者是否吸烟无关［7］。本研究显示KRAS在伴微乳头成分的肺腺癌这一病理学亚型中突变率低，由于KRAS基因突变例数少，其突变情况和患者的性别、年龄、肿瘤大小、吸烟情况等临床病理学特征有无相关性的研究没有意义，有待国内外学者进一步研究。

有文献报道MPPAC肿瘤侵袭性强，易发生淋巴结转移、淋巴管侵犯、肺内转移、胸膜侵犯及远处转移［8-9］，可能由于我们选择的都是临床病理分期早手术治疗的病例，因此研究没有得出和文献报道一致的结论。

MPPAC侵袭性强、预后差［10］EGFR突变频率高于肺腺癌其它亚型，KRAS突变频率低于肺腺癌其它亚型。我们推测临床靶向药物EGRR-TKIs应用于MPPAC临床受益人群疗效更为明显。

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3 Gupta R,Dastane AM,Mckenna R Jr,et al.The predictive value of epidermal growth factor receptor tests in patients with pulmonary adenocarcinoma:review of current"best evidence"with meta-analysis[J].Hum Pathol,2009,40(3):356-365.

4 Shim HS,Lee daH,Park EJ,et al.Histopathologic Characteristics of lung adenocarcinomas with epidermal growth factor receptor mutations in the International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society[J].Arch Pathol Lab Med,2011,135(10):1329-1334.

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8 Russell PA,Wainer Z,Wright GM,et al.Does lung adenocarcinoma subtype predict patient survival?A clinicopathologic study based on the New International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society International Multidisciplinary Lung Adenocarcinoma Classification[J].J of Thorac Oncol,2011,6(2):1496-1506.

9 Kamiya K,Hayashi Y,Dougnchi J,et al.Histopathological features and prognostic significance of the micmpapillary pattern in lung adenocercinoma[J].Mod Pathol,2008,21(8):992—1001.

10 发 文,曾郁伴.伴有浸润微乳头状结构肺腺癌病理诊断与预后[J].蚌埠医学院报,2011,36(4):370-373.