子痫前期患者胎盘、血浆uPA含量变化及意义

周仲元 王晓娟 许雅娟

子痫前期患者胎盘、血浆uPA含量变化及意义

周仲元 王晓娟 许雅娟

目的探讨胎盘及血浆uPA 的含量与子痫前期发病的关系。方法采用酶联免疫吸附法测定67例子痫前期患者(轻度29例，重度38例)和30例正常晚孕妇女(对照组)胎盘及血浆uPA 含量。结果①对照组胎盘uPA含量为(32.62±2.85)ng/g，子痫前期组为(12.42±4.63)ng/g，两组比较差异有统计学意义(P<0.001)；重度组明显低于轻度组，差异有极显著性(P<0.001)。②对照组血浆uPA含量为(645.47±41.32)pg/ml，子痫前期组为(461.61±37.68)pg/ml，两组比较差异有显著性(P<0.01)；轻、重度组之间比较差异无显著性(P>0.05)。结论子痫前期患者胎盘及血浆uPA含量异常下降与其发病及严重程度有关。

子痫前期；uPA；胎盘；血浆

滋养细胞浸润能力下降在子痫前期发病中的重要作用已得到公认。尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase type plasminogen activator，uPA)在细胞的浸润、迁移活动中发挥重要作用[1]。但在子痫前期发病机制中的作用尚不清楚。本研究通过检测正常和子痫前期患者血浆和胎盘组织中uPA的含量，探讨其与子痫前期发病的关系。

1 资料与方法

1.1研究对象 随机选取郑州大学第三附属医院2010年2月至2011年10月产科住院行剖宫产术终止妊娠的孕妇97例，其中子痫前期患者67例(轻度29例，重度38例)，平均年龄(29.0±4.0)岁，平均孕龄(251.6±14.3) d；选同期住院行选择性剖宫产术的正常孕妇30例作为对照，平均年龄(27.4±2.3)岁，平均孕龄(275.8±7.0) d。两组孕妇年龄、孕龄间无显著性差异。子痫前期的诊断标准以全国统编教材《妇产科学》第6版为准。

1.2方法

1.2.1血液标本收集孕妇入院未经任何治疗即空腹抽取肘静脉血2 ml，置入经10%枸盐酸钠抗凝的中，1 h内，4℃，离心(5000rpm，20 min)，血浆进行分装并保存于-80℃冰箱中待测。

1.2.2胎盘组织取材及制备组织提取液胎盘娩出后立即取胎盘母体面正中2 cm×2 cm×2 cm组织块，生理盐水漂洗干净，干燥，置于密闭塑料袋中保存于-80℃冰箱中待用。

用于检测uPA的组织提取液制备方法:取冰冻胎盘组织约700 mg，机械性粉碎至粉末，加入3 mlTBS溶液(0.02 m Tris-HCl，0.125 m NaCL，pH8.5)及0.1 ml 10% TritonX-100悬浮，置于4℃冰箱内孵育12～18 h。离心(13000rpm，20 min，4℃)，上清液待测。

1.2.3检测方法 血浆及胎盘组织提取液中uPA的含量均采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定。人uPA ELISA试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。实验操作步骤严格按说明书进行。用Multiskan MS 352型酶标仪(Ferland)进行样本吸光度的测定。

1.3统计学方法 所有数据采用统计学软件包SPSS 13.0进行处理。实验结果用表示，数据统计用t检验，单因素方差分析和直线相关分析。

2 结果

2.1各组孕妇血浆uPA浓度的变化 子痫前期组uPA含量(461.61±37.68)pg/ml，明显低于对照组(645.47±41.32)pg/ml，两组间有显著性差异(t=2.376，P<0.01。与对照组相比，轻、重度子痫前期组uPA含量均明显降低，差异有统计学意义(t轻=3.216，P<0.01；t重=3.701，P<0.01。轻、重度子痫前期组之间比较差异无统计学意义(t=1.281，P>0.05)。

2.2各组孕妇胎盘组织中uPA含量变化 子痫前期组uPA含量(12.42±4.63)ng/g,明显低于对照组(32.62±2.85)ng/g，两组间差异有极显著性(t=8.615，P<0.001)。与对照组相比，轻、重度子痫前期组uPA含量均明显降低，差异有统计学意义(t轻=6.223，P<0.001；t重=8.093，P<0.001)。重度子痫前期组uPA含量明显低于轻度组，差异有统计学意义(t=7.165，P<0.001)。

3 讨论

3.1正常孕妇和子痫前期患者的uPA含量的变化特点 uPA是一种特异性的丝氨酸蛋白水解酶，活化的uPA除了直接降解细胞外基质外，还可激活纤溶酶原形成活性纤溶酶，后者可催化一系列的蛋白质水解，其中包括各种基底膜成分和细胞外基质(ECM)。另外，活化的纤溶酶尚能激活胶原酶、生长因子以及MMPs的成熟，并参与血管生成。以上都是滋养细胞浸润所必需的。Shimada等[2]发现子宫血管中uPA的含量高于外周血，而胎盘娩出后其浓度下降，说明滋养细胞是uPA的主要来源。刘以训等[3]对uPA在人妊娠晚期胎盘中的定位及分布研究结果也显示uPA集中在绒毛滋养层和绒毛外滋养细胞中。Koh等[4]对正常妊娠的研究发现，血浆中uPA浓度在妊娠晚期增高，可能与胎盘的成熟有关。

3.2子痫前期患者的uPA测定的意义 近年许多研究表明，滋养细胞功能异常在子痫前期发病中起重要作用。绒毛外滋养细胞(EVT)通过蛋白水解酶而获得侵袭能力，可侵入底蜕膜及蜕膜-肌层交界处，并可逆行侵入蜕膜段及蜕膜-肌段螺旋动脉管壁内，导致胎盘床部位的血管生理性改变。若具有侵蚀性的EVT对子宫肌层和子宫螺旋动脉的浸润不能达到足够的深度，母体血管不能发生正常的生理性变化，不能转变成低阻力血管，则胎盘缺氧，灌注量不足导致子痫前期的发生[6]。本研究显示，子痫前期患者胎盘及血浆中uPA含量均显著低于正常妊娠妇女，表明子痫前期时滋养细胞浸润能力下降，造成胎盘床血管重塑障碍，导致子痫前期发生。重度子痫前期患者胎盘中uPA含量显著低于轻度者，表明重度患者滋养细胞浸润能力更差。由此推测，滋养细胞分泌uPA及其活性的降低与子痫前期发病密切相关。而子痫前期胎盘缺氧通过反馈作用削弱滋养细胞的浸润能力,进一步促进子痫前期的发生[7]。

本研究显示,子痫前期患者胎盘及血浆uPA水平较正常妊娠者明显下降，ECM的降解减少，滋养细胞的浸润能力显著下降。重度子痫前期患者uPA水平下降更为突出，表明uPA的水平与疾病的严重程度相关。uPA在滋养细胞浸润过程中发挥重要作用，若有效调控uPA的表达可能成为防止和治疗子痫前期的新途径。

[1] Chakraborty C, Gleeson LM, McKinnon T, et al. Regulation of human trophoblast migration and invasiveness. Can J Physiol Pharmacol,2002，80(2):116-124.

[2] Shimada H, Takashima E, SOMA M, et al. Source of increased plasminogen activators during pregnancy and puerperium. Thromb Res 1989，15:91-8.

[3] 刘以训，胡召远，冯强，邹如金，C.D.Ockleford. tPA,uPA,PAI-1和PAI-2在人和恒河猴胎盘中的原位杂交和荧光免疫定位. Dev.& Reprod.Biol，2000,9(1):1-9.

[4] Koh CL， Viegas OA, Yuen R， Chua SE. Plasminogen activators and inhibitors in normal late pregnancy, postpartum and in the postnatal period. Int J Gynaecol Obstet 1992,38(1):9-18.

[5] Li u J, Chakraborty C, Graham CH, Barbin YP, Dixon SJ, Lala PK. Noncatalytic domain of uPA stimulates human extravillous trophoblast migration by using phospholipase C, phosphatidylinositol 3-kinase and mitogen-activated protein kinase. Exp Cell Res, 2003 May 15；286(1):138-51.

[6] Pierre-Yves R. Interest in preeclampsia for researchers in reproduction. J Reprod Immunol，2002，53(1-2):279-287.

[7] Liu KH, Zhou Y, Janatpour M, et al. Human cytotrophoblast differentiation/invasion is abnormal in preeclampsia. Am J Pathol,1997,151(6):1809-1818.

450052 郑州大学第三附属医院产科