亳菊总黄酮对大鼠急性心肌缺血的保护作用

沈炳香，王桐生，魏庆红，李 莉，吴金爽，余贵媛，吴德玲，5

（1.安徽医科大学附属六安医院，安徽六安 237005；2.安徽中医药大学中西医结合临床学院，安徽合肥 230038；3.现代中药安徽省重点实验室，安徽合肥 230031；4.安徽协和成药业饮片有限公司，安徽亳州 236821；5.安徽中医药大学科技处，安徽合肥 230038）

亳菊总黄酮对大鼠急性心肌缺血的保护作用

沈炳香1，王桐生2，3，魏庆红4，李 莉2，吴金爽3，余贵媛2，吴德玲3，5

（1.安徽医科大学附属六安医院，安徽六安 237005；2.安徽中医药大学中西医结合临床学院，安徽合肥 230038；3.现代中药安徽省重点实验室，安徽合肥 230031；4.安徽协和成药业饮片有限公司，安徽亳州 236821；5.安徽中医药大学科技处，安徽合肥 230038）

目的 研究亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心脏的保护作用，为其进一步开发提供实验依据。方法 将SD大鼠随机分成假手术组，模型组，复方丹参滴丸组（140mg／kg），亳菊总黄酮小、中、大剂量组（分别为75、150、300mg／kg）。采用冠状动脉结扎法复制大鼠急性心肌缺血模型。分别于手术前，手术后0、0.5、1.0、2.0h测定各组大鼠心电图ST段变化；冠状动脉结扎后24h测定血清天冬氨酸转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）含量；观察各组大鼠心肌梗死率及心肌组织形态学变化。结果 亳菊总黄酮可降低急性心肌缺血大鼠各时点心电图ST段抬高值，降低血清AST、LDH、CK含量，降低心肌梗死率，改善心肌组织形态学变化，呈现出一定的剂量效应。结论 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心脏有一定的保护作用。

急性心肌缺血；亳菊花；总黄酮；天冬氨酸转移酶；乳酸脱氢酶酶；肌酸激酶

亳菊花为安徽道地药材，具有疏风散热、解暑明目的功效，为医家首选菊花品种之一，黄酮类、挥发油等为其主要活性成分［1］。现代研究发现，黄酮类化合物对心肌缺血及缺血再灌注有明显的保护作用，对心、脑、血管疾病有一定的预防作用［2－4］。本实验采用大孔树脂纯化技术，分离提取亳菊总黄酮，观察其对急性心肌缺血模型大鼠心脏的保护作用，为其进一步开发提供实验依据。

1 材料

1.1 主要药物及试剂 亳菊总黄酮：采用乙醇回流提取2次，再用AB－8型大孔树脂富集纯化，以芦丁为对照品，采用比色法测定，总黄酮含量为76.3％，由安徽中医药大学天然药物化学教研室提供，批号20121205。复方丹参滴丸：天津天士力制药股份有限公司生产，批号110361。红四氮唑（red tetrazoline，TTC）：BIOSHARP公司生产，批号0765。天冬氨酸转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）检测试剂盒：均购自德国德赛诊断系统（上海）有限公司，批号26025／9620191。

1.2 实验动物 SD大鼠，雄性，体质量200～250g，由安徽省实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（皖）2011－002号。

1.3 实验仪器 AU2700型贝克曼生化分析仪：日本。

2 方法

2.1 动物分组及模型复制［5－6］取体质量为200～250g雄性大鼠，随机分成假手术组，模型组，复方丹参滴丸组（140mg／kg），亳菊总黄酮小、中、大剂量组（分别为75、150、300mg／kg，用0.5％的羧甲纤维素钠混悬），每组14只。各给药组大鼠按相应剂量灌胃给药，假手术组、模型组给予等容积羧甲纤维素钠溶液，10ml／kg，每天1次，连续7d。末次给药后30min，各组大鼠用乙醚麻醉，于左第4肋间开胸，暴露心脏，以5－0号线距左冠状动脉根部2～3 mm处结扎冠状动脉，闭胸，造成急性心肌梗死模型，以心电图显示ST段弓背形抬高或T波抬高为急性心肌梗死模型成功标志（成功率约80％），假手术组作相应处理但不结扎冠状动脉。

2.2 检测指标

2.2.1 对急性心肌缺血模型大鼠心电图ST段的影响：乙醚麻醉动物，分别测定各组大鼠（n＝10）手术前和手术后0、0.5、1.0、2.0h的心电图（采用Ⅱ导联心电图，走纸速度50mm／s）。与手术前比较，计算术后各时间点ST抬高值。

2.2.2 对急性心肌缺血模型大鼠血清相关酶的影响：结扎后24h，各组动物用10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，分离血清，检测心肌AST、LDH、CK水平。

2.2.3 急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死率测定及病理改变观察：每组取6只大鼠，迅速取出心脏，剔除心房组织，将剩余心室组织切成3～4mm厚的薄片，置于1％TTC的磷酸盐缓冲液（pH值＝7.4，36.5～37.5℃）染色15min，称取整个心肌及梗死区心肌（染色呈灰白色）质量，计算梗死率。取部分结扎以下至心尖部位的心脏（n＝4），10％中性甲醛溶液固定，常规苏木精－伊红（hematoxylin－eosin，HE）染色，光镜下观察组织形态学变化。

2.3 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计学处理。连续型变量采用“均数±标准差（±s）”进行统计学描述，多组均数比较采用单因素方差分析，两组均数比较采用SNK法（方差齐）或Tamhane法（方差不齐）进行检验。

3 结果

3.1 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心电图ST段的影响 与假手术组比较，模型组大鼠各时点心电图ST段抬高值显著增加（P＜0.05）；与模型组比较，复方丹参滴丸组和亳菊总黄酮不同剂量组大鼠心电图ST段抬高值均有不同程度下降，随着亳菊总黄酮剂量增加和作用时间延长，心电图ST段抬高值下降越明显，其中亳菊总黄酮中、大剂量组在术后1.0、2.0h心电图ST段抬高值显著低于模型组（P＜0.05）。见表1。

表1 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心电图ST段抬高值的影响（±s）

表1 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心电图ST段抬高值的影响（±s）

注：与假手术组比较，＊P＜0.05；与模型组比较，＃P＜0.05。

组 别n ST段抬高值／2.0h假手术mV术后0h术后0.5h术后1.0h术后10 0.17±0.19 0.10±0.11 0.10±0.10 0.09±0.11模 型10 0.45±0.17＊0.39±0.15＊0.37±0.12＊0.32±0.13＊复方丹参滴丸10 0.23±0.11＃0.19±0.11＃0.25±0.14 0.20±0.15亳菊总黄酮（小）10 0.40±0.09 0.30±0.19 0.33±0.15 0.27±0.16亳菊总黄酮（中）10 0.31±0.27 0.26±0.19 0.20±0.11＃0.19±0.11＃亳菊总黄酮（大）10 0.29±0.18 0.21±0.12＃0.19±0.13＃0.18±0.12＃

3.2 亳菊总黄酮对急性心肌梗死大鼠心肌梗死率的影响 各组全心质量和心室肌质量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较，复方丹参滴丸组及亳菊总黄酮中、大剂量组大鼠梗死心肌质量及心肌梗死率显著降低（P＜0.05）。见表2。

3.3 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠血清AST、LDH、CK水平的影响 与假手术组比较，模型组大鼠血清AST、LDH、CK水平显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，复方丹参滴丸组大鼠血清AST、CK水平，亳菊总黄酮小剂量组大鼠血清AST、LDH水平，以及亳菊总黄酮中、大剂量组大鼠血清AST、LDH和CK水平均显著降低（P＜0.05）；亳菊总黄酮在降低AST、LDH和CK方面呈现一定的剂量相关性，其中亳菊总黄酮大剂量组大鼠血清CK水平显著低于亳菊总黄酮小剂量组（P＜0.05）。见表3。

表2 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死率的影响（±s）

表2 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死率的影响（±s）

注：与模型组比较，＃P＜0.05。

组 别n全心质量／mg心室肌质量／mg梗死心肌质量／mg心肌梗死率／％假手术6 847.2±114.3 661.0±69.5模 型6 914.4±81.0 611.3±43.5 150.9±31.6 24.68±5.89复方丹参滴丸6 843.1±108.3 592.4±86.1 75.1±14.8＃12.67±1.30＃亳菊总黄酮（小）6 889.6±84.1 593.5±78.7 131.6±28.7 22.17±4.21亳菊总黄酮（中）6 895.8±84.1 612.5±91.3 91.2±52.0＃14.89±6.18＃亳菊总黄酮（大）6 841.4±62.1 595.6±53.3 80.4±26.3＃13.49±3.09＃

表3 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠血清AST、LDH、CK水平的影响（±s）

表3 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠血清AST、LDH、CK水平的影响（±s）

注：与假手术组比较，＊P＜0.05；与模型组比较，＃P＜0.05；与亳菊总黄酮小剂量组比较，△P＜0.05。

组 别n AST／（U／L）LDH／（U／L）CK／（U／ml）假手术10 180.50±70.13 349.00±106.97 270.99±74.53模 型10 589.50±204.26＊791.20±155.19＊494.20±100.79＊复方丹参滴丸10 303.10±115.57＃629.00±298.96 376.80±89.09＃亳菊总黄酮（小）10 406.67±151.67＃551.50±183.86＃462.02±68.63亳菊总黄酮（中）10 364.14±128.53＃415.29±108.16＃365.09±59.30＃亳菊总黄酮（大）10 327.40±123.60＃423.07±139.21＃316.80±86.17＃△

3.4 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心肌病理改变的影响 假手术组大鼠心肌细胞排列整齐，核呈圆或椭圆形，染色质均匀分布。模型组大鼠心肌细胞多灶性、片状凝固性坏死，核溶解、碎裂，部分区域细胞核消失，细胞质染色加深，间质血管扩张、充血明显，组织疏松水肿，伴大量中性粒细胞浸润。复方丹参滴丸组大鼠心肌细胞灶性凝固性坏死，范围较模型组小，核溶解、碎裂，局部区域细胞核消失，细胞质染色加深，间质血管扩张充血。亳菊总黄酮组大鼠心肌细胞呈点状、小灶状凝固性坏死，范围较小，其中中剂量组和大剂量组的病变明显减轻，部分心脏以心肌变性为主，梗死不明显。见图1。

4 讨论

采用左冠状动脉前降支结扎法复制大鼠急性心肌缺血模型，是目前评价抗心肌缺血药物疗效最常用的方法。结扎冠状动脉后，大鼠血流动力学和心肌代谢的改变与冠心病患者严重心肌缺血有某些相似之处，因此该模型适合药效学研究，用于判断用药前后缺血范围的变化［7］。LDH和CK是目前临床上诊断急性心肌梗死的较好指标，LDH是机体能量代谢的一种重要的酶，当心肌损伤时，细胞内酶被释放出来并扩散入血浆，测定该酶活性可在一定程度上反映缺血心肌的病变。CK也广泛存在于心肌中，当心肌细胞损伤时，血清中CK活性增加，可迅速反映心肌损伤情况。LDH、CK是评估心肌缺血程度和判断心肌细胞从可逆到不可逆损伤的重要指标［8］。

图1 亳菊总黄酮对急性心肌缺血模型大鼠心肌组织形态学变化的影响（HE染色，10×20倍）

亳菊为安徽道地药材，其味甘、苦、微寒。归肺、肝经，具有散风清热、平肝明目、清热解毒的功效［9］。对亳菊化学成分的研究及其总黄酮的提取分离的研究较为深入［10－11］，但对其功效研究报道甚少。本研究采用冠状动脉结扎法复制急性心肌缺血模型，结果发现亳菊总黄酮能显著降低模型动物心电图ST段抬高值，降低心肌酶活性，减少心肌梗死面积并对心肌病理改变有一定的改善作用，与相关文献报道［12］一致。

综上所述，亳菊总黄酮对急性心肌缺血有明显的保护作用，该研究对其开发利用提供了实验依据，其保护作用机制有待进一步研究。

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Cardioprotective Effect of Total Flavonoids in Chrysanthemum morifoliumRamat.from Bozhou in Rats with Acute Myocardial Ischemia

SHEN Bing－xiang1，WANG Tong－sheng2，3，WEI Qing－hong4，LI Li2，WU Jin－shuang3，YU Gui－yuan2，WU De－ling3，5
（1.Lu'an Hospital Affiliated to Anhui Medical University，Anhui Lu'an 237005，China；2.Clinical School of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Anhui University of Chinese Medicine，Anhui Hefei 230038，China；3.Anhui Key Laboratory for Modern Chinese Materia Medica，Anhui Hefei 230031，China；4.Anhui Xiehecheng Co.，Ltd.，Anhui Bozhou 236821，China；5.Department of Science and Technology，Anhui University of Chinese Medicine，Anhui Hefei 230038，China）

Objective To study the cardioprotective effect of total flavonoids in Chrysanthemum morifoliumRamat.from Bozhou in rats with acute myocardial ischemia and to provide an experimental basis for the development of related drugs.Methods Male Sprague－Dawley rats were randomly divided into sham operation group，model group，compound Danshen dripping pill group（140mg／kg），and low－，middle－，and high－dose total flavonoids groups（75，150，and 300mg／kg）.A rat model of acute myocardial ischemia was induced by coronary artery ligation.Electrocardiography was performed before and at 0，0.5，1.0，and 2.0hafter operation to evaluate ST segment changes.Serum levels of aspartate aminotransferase（AST），lactate dehydrogenase（LDH），and creatine kinase（CK）were measured at 24hafter coronary artery ligation.The rate of myocardial infarction and myocardial tissue were determined and observed.Results For rats with acute myocardial ischemia，total flavonoids in Chrysanthemum morifoliumRamat.from Bozhou reduced ST segment elevation at each time point，decreased serum levels of AST，LDH，and CK，reduced the rate of myocardial infarction，and improved myocardial tissue，with a certain dose－effect relationship.Conclusion Total flavonoids in Chrysanthemum morifoliumRamat.from Bozhou have a cardioprotective effect in the rat model of acute myocardial ischemia.

acute myocardial ischemia；Chrysanthemum morifolium Ramat.from Bozhou；total flavonoids；aspartate aminotransferase；lactate dehydrogenase；creatine kinase

R285.5

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.01.021

2013－10－12）

国家科技支撑计划项目（2011BA104B04）；国家自然科学基金项目（81303229）；安徽省年度科研项目（1301043016）

沈炳香（1972－），女，副主任药师

吴德玲，dlwu7375＠sina.com