淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后对肾阳虚小鼠温肾助阳作用比较研究

熊 瑞，胡昌江，赵 玲，耿媛媛，潘 新

(成都中医药大学 药学院，四川 成都 611137)



淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后对肾阳虚小鼠温肾助阳作用比较研究

熊 瑞，胡昌江*，赵 玲，耿媛媛，潘 新

(成都中医药大学 药学院，四川 成都 611137)

目的：比较淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后对肾阳虚小鼠脏器指数、自主活动变化和血清睾酮的影响，探讨生、炙淫羊藿温肾助阳作用的差异。方法：采用氢化可的松所致的肾阳虚小鼠模型，比较淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后对小鼠脏器指数(睾丸、精囊腺、包皮腺、胸腺)、自主活动变化及血清睾酮变化的影响，分析油炙前后淫羊藿温肾助阳功效的差异。结果：与模型组相比，淫羊藿生品、炙品及二仙汤生品、炙品均具有极显著升高血清睾酮的作用(P<0.01)，且炙品升高效果显著强于生品(P<0.05)；除模型组外，各组小鼠脏器指数(睾丸、胸腺、包皮腺和精囊腺)和自主活动性均有显著改善(P<0.05～0.01)。结论：淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后对氢化可的松所致肾阳虚小鼠脏器指数、血清睾酮和自主活动变化均具有较明显改善作用，且淫羊藿油炙后温肾助阳作用强于生品。

淫羊藿；油炙；肾阳虚；脏器指数；血清睾酮

淫羊藿的本草文献初见于《神农本草经》，关于淫羊藿的炮制方法最早见于《雷公炮炙论》：“凡使(时呼仙灵脾)，需用夹刀去叶、四畔花(枝)尽后，细锉，用羊脂相对拌炒过，待羊脂四两为度也[1]”。此法在历代资料中均有记载，且1977-2010版《中华人民共和国药典》(后简称《中国药典》)均只记载此法。淫羊藿生品性辛、甘、温，归肝、肾经，因羊脂油甘温，能温散寒邪、补肾助阳，故油炙后能增强其温肾助阳的作用。中医临床常将其与仙茅、当归、巴戟天、黄柏和知母组成二仙汤，具有温肾阳、补肾精、泻肾火和调理冲任的功效。本实验通过比较淫羊藿油炙前后对氢化可的松所致肾阳虚小鼠模型温肾壮阳作用的差异，拟从脏器指数、自主活动性、自主站立性和血清睾酮含量改变等方面进行比较研究，初步探讨油炙对淫羊藿温肾助阳作用的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种小鼠，雄性，体重18～22g，普通级，由成都达硕实验动物有限公司提供(实验动物生产合格证号：SCXK(川)2008-24)。小鼠于成都中医药大学中药药理三级科研实验室中饲养(许可证号：川实动管第015号)，国家中医药管理局三级实验室中观察(NO.TCM-2009-324)。

1.2 药物与试剂

淫羊藿、黄柏、知母、仙茅、巴戟、当归均购自荷花池中药材市场，经成都中医药大学生药教研室卢先明教授鉴定为真品，均为2010版《中国药典》收载品种。实验室前期分别对已购得的淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim和箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim进行入药标准的考察，结果表明淫羊藿在总黄酮含量、淫羊藿苷含量、醇浸出物等指标方面均高于箭叶淫羊藿，且已有文献报道[4]淫羊藿化学成分较稳定，箭叶淫羊藿种内质量差异较大，故本实验选择淫羊藿作为实验药物。

油炙淫羊藿采用课题组前期研究的最佳工艺：温度160℃，时间为7min(每100kg淫羊藿消耗羊脂油炼油20kg)[3]。药液制备：取淫羊藿生品和炙品并分别组成二仙汤，加12倍水浸泡0.5h，煎煮1h，过滤，滤渣再加12倍量水，煎煮2次，每次1h，过滤，合并药液，减压浓缩至相应浓度。

氢化可的松(规格5mg·mL-1)：太极西南药业股份有限公司，批号121103；氯化钠注射液(0.9%)：四川科伦药业股份有限公司，批号M12120821；金匮肾气丸：北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号1030582；小鼠睾酮(T)酶联免疫(ELISA)试剂盒(96T)：上海尚乐生物科技有限公司，批号201306。

1.3 仪器

ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)；LT502型电子天平(常熟市天量仪器有限责任公司)；AR862A型红外测温仪(希玛SMART SENSOR)；离心机(上海安婷科学仪器厂)；酶标仪(芬兰 Labsystems Multiskan MS，型号：352型)；洗板机(芬兰Thermo Labsystems，型号：AC8型)；离心机(国产微量高速离心机，型号：TG16W 型)；培养箱(国产隔水式恒温培养箱，型号：GNP-9080型)。

1.4 实验方法

1.4.1 造模方法 取健康雄性KM小鼠若干，正常组小鼠(13只)每天按0.1mL/20g剂量注射等体积NaCl注射液，其余造模动物每天于皮下注射氢化可的松注射液(25mg·kg-1)，连续注射7天，停药6天。动物在造模期间出现死亡，且造模动物出现活动减少、反应迟钝、弓背蜷缩、体毛稀疏、无光泽、饮食饮水量减少等现象，说明造模成功[5]。

1.4.2 分组 取符合上述表现的造模小鼠若干，随机分为14组：模型组、金匮肾气丸组(5g·kg-1)，生品低、中、高剂量组(6g·kg-1，12g·kg-1，24g·kg-1)，炙品低、中、高剂量组(6g·kg-1，12g·kg-1，24g·kg-1)，二仙汤生品低剂量组(8g·kg-1，16g·kg-1，32g·kg-1)，二仙汤炙品低剂量组(8g·kg-1，16g·kg-1，32g·kg-1)，每组13只。

1.4.3 给药方法 第14天开始，正常对照组和模型对照组小鼠每日按0.2mL/10g剂量灌胃纯净水，其余各组小鼠每日均等体积灌胃给药，连续给药14天。

1.4.4 血清睾酮及脏器指数测定方法 于第28天末次给药1h后，用眼眶取血法采集各组小鼠血液，分离血清(3 000rpm，10min)，-20℃保存待测，采用酶联免疫法(ELISA)测定血清睾酮含量。小鼠取血后处死，精确剥取小鼠睾丸、精囊、包皮腺和胸腺，精确称湿重。

1.4.5 自主活动性和自主站立性测定方法 从造模开始，每30天称1次体重，称重后，于造模前、造模后与给药后分别采用自主活动仪测定10min内小鼠自发自主活动次数和自主站立次数。将小鼠放入自主活动仪内，前3min为适应期，后10min由计数仪统计小鼠自主活动次数。观察指标为其自主活动性和自主站立性的变化情况。

自主活动数变化=(药后活动数-药前活动数)/药前活动数；

自主站立数变化=(药后站立数-药前站立数)/药前站立数；

脏器指数=脏器重量绝对值(g)/小鼠重量(g)。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 对血清睾酮的影响

与模型组相比，淫羊藿生、炙品组及二仙汤生、炙品各剂量组小鼠血清睾酮含量均极显著性升高(P<0.01)；与等剂量淫羊藿生品组相比，中、高剂量淫羊藿炙品组小鼠血清睾酮含量显著升高(P<0.05)；与等剂量二仙汤生品组相比，中、高剂量二仙汤炙品组小鼠血清睾酮含量显著升高(P<0.05)，差异均具有统计学意义。结果表明，淫羊藿生、炙品无论是单味使用还是纳入二仙汤，均对肾阳虚造成的血清睾酮下降有显著改善作用，且炙品的作用明显强于生品，结果见表1。

2.2 对脏器指数的影响

与正常对照组比较，其余各组小鼠睾丸、胸腺及包皮腺指数显著降低(P<0.05)。睾丸指数：与模型组相比，淫羊藿炙品高剂量组、二仙汤生品生品高剂量及二仙汤炙品高剂量组小鼠睾丸指数显著升高(P<0.05～0.01)；精囊腺指数：与模型组相比，二仙汤生品及炙品高剂量组小鼠精囊腺指数显著升高(P<0.05)；胸腺指数：与模型组相比，二仙汤炙品高剂量组小鼠胸腺指数显著升高(P<0.05)；包皮腺指数：与模型组相比，淫羊藿生品高剂量、淫羊藿炙品高剂量及二仙汤炙品高剂量小鼠包皮腺指数显著升高(P<0.05)。结果提示，用氢化可的松复制肾阳虚模型，可致小鼠睾丸、胸腺及包皮腺指数明显降低，且淫羊藿油炙前后及组成二仙汤后在到达一定剂量时可明显改善小鼠脏器指数，生品与炙品淫羊藿的温肾助阳功效差异无统计学意义，但部分指数可见淫羊藿炙品改善效果更显著，可认为炙淫羊藿有优于生品的趋势，结果见表2。

2.3 对自主活动性和自主站立性的影响

自主活动性：与模型组相比，炙品低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠自主活动性显著提高(P<0.05～0.01)，生品中剂量组、高剂量组小鼠极显著提高(P<0.01)；炙品与生品在改善小鼠自主活动性和自主站立性方面无统计学差异，但炙品起效剂量降低，在低剂量时已开始表现出差异，说明炙品作用有强于生品的趋势；与模型组相比，二仙汤生品组、炙品组各剂量组小鼠自主活动性和自主站立性均有极显著提高(P<0.01)，但二仙汤生品组和炙品组无统计学差异。

表1 生、炙淫羊藿及纳入二仙汤对血清睾酮含量影响 (±s)

注：模型组与正常对照组比较，**P<0.01；各给药组与模型组比较，##P<0.01。

表2 对脏器指数的影响 (±s,×10-3)

注：模型组与正常对照组比较，*P<0.05；各给药组与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

自主站立性：与模型组相比，生、炙品中、低剂量均能在一定程度上提高小鼠自主站立性(P>0.05)，炙品高剂量组小鼠自主站立性显著提高(P<0.05)，虽然生、炙品在提高自主活动性和自主站立性方面差异无统计学意义，但唯有炙品高剂量组出现显著差异，未在生品中有所体现，因此在一定程度上说明炙品作用有强于生品的趋势；与模型组相比，二仙汤生品、炙品中、低剂量均能在一定程度上提高小鼠自主站立性(P>0.05)，二仙汤生、炙品高剂量组小鼠自主活动性均有显著性提高(P<0.05)，二仙汤生、炙品在提高小鼠自主活动性和自主站立性方面无统计学差异(P>0.05)。结果见表3。

表3 对自主活动性的影响 (±s)

注：各给药组与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

3 讨论

实验结果表明，淫羊藿油炙前后及分别组成二仙汤后均对氢化可的松所致肾阳虚小鼠血清睾酮含量下降有显著的改善作用，且油炙品作用明显强于生品；对氢化可的松致小鼠肾阳虚模型的脏器指数(睾丸、包皮腺、胸腺和精囊腺)均有明显改善，但油炙品作用有强于生品的趋势；对肾阳虚模型小鼠自主活动性和自主站立性亦有明显改善，油炙品的作用有强于生品的趋势。

综上所述，炙淫羊藿的温肾助阳作用优于生品淫羊藿，且生、炙淫羊藿均有温肾助阳的功效，这与《神农本草经》[2]上所述“味辛、寒”有一定的出入，与淫羊藿油炙后增强温肾阳作用的传统认识一致，可为临床合理选用淫羊藿炮制品提供一定的依据。

[1] 雷敩.雷公炮炙论[M].南京:江苏科学技术出版社,1985:97.

[2] 清·顾光重辑.神农本草经[M].北京:人民卫生出版社,1955.

[3] 周一帆,胡昌江,余凌英,等.星点设计-效应面法优选淫羊藿油炙工艺[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(16):16-18.

[4] 郭宝林,肖培根.中药淫羊藿主要种类评述[J].中国中药杂志,2003,28(4):303-307.

[5] 刘俊达.韭菜子盐炙前后温补肾阳的机理研究[D].成都:成都中医药大学,2011.

[6] 李寅超,黄兰岚,赵宜红,等.不同炼制温度和用量的羊脂油制淫羊藿对肾阳虚大鼠的影响[J].中国中药杂志,2011,36(16):2250-2254.

[7] 牛锐.淫羊藿炮制前后对小鼠血浆睾酮及附性器官的影响[J].中国中药杂志,1989,14(9):18.

[8] 刘俊达.韭菜子盐炙前后温补肾阳的机理研究[D].成都:成都中医药大学,2011.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].第1部.北京:中国医药科技出版社,2010.

(责任编辑：尹晨茹)

Comparative Study on the Effect of the Crude and Mutton-Fat-Processed Epimedii Folium in Er’xian Decoction on Nourishing and Warming Kidney-yang

Xiong Rui, Hu Changjiang*, Zhao Ling, Geng Yuanyuan, Pan Xin

(College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)

Objective:To compare the effect of the crude Epimedii folium, mutton-fat-processed Epimedii folium and Er’xian Decoction (EXD) containing the two respectively on organ coefficient, locomotor activity and Serum testosterone, for discussing the difference of the crude and the mutton-fat-processed. Methods:To adopt murine model of kidney-yang asthenia caused by hydrocortisone and analyze the distinction of the crude and the mutton-fat-processed through comparing organ coefficient (testis, seminal vesicle, preputial glands and thymus), locomotor activity and the level of serum testosterone(ST). Results:Compared with normal control group, the level of ST significantly increased in the crude, mutton-fat-processed and EXD containing the two respectively (P<0.01), and the mutton-fat-processed are more effective than the crude. Organ coefficient (testis, seminal vesicle, preputial glands and thymus) and locomotor activity were significant improved(P<0.05～0.01).Conclusion:The crude, mutton-fat-processed Epimedii folium and EXD containing the two respectively can improve organ coefficient, locomotor activity and the level of ST, moreover, the mutton-fat-processed is better.

Epimedii Folium; Mutton-Fat-Processed; Nourishing and Warming Kidney-yang; Organ Coefficient; Serum Testosterone

2014-07-10

中医药行业科研专项(20110700717)

熊瑞(1991-)，女，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药炮制学。

作者简介：胡昌江(1952-)，男，成都中医药大学教授，博士生导师，研究方向为中药炮制学教学及科研。

R285.5

A

1673-2197(2014)22-0005-03