丙泊酚后处理对心肌缺血再灌注中TNF－α，IL－6的影响

张彦清，聂丽霞，周建斌，白国良，刘保江

心肌缺血－再灌注损伤（IRI）是临床麻醉工作中一种常见的病理过程，尤其在体外循环下的心脏手术、心肌梗死患者的溶栓治疗和实施非心脏手术的冠心病患者中往往更为多见。在1960年Jennings等［1］第一次提出心肌缺血－再灌注损伤的概念，其发病机制通常认为与氧自由基、钙超载、中性粒细胞释放、微血管损伤和高能磷酸化合物生成障碍等有关［2，3］。心肌缺血后处理（IPO）是近年来提出的一种新的心肌保护方法，动物实验和临床试验已证实其确有心肌保护作用，但由于IPO 要求短暂反复缺血－再灌注，存在潜在的风险及医学伦理道德的原因而限制了其在临床上的广泛应用，因此药物后处理将成为一种趋势［4，5］。丙泊酚被用于临床已有几十年的历史，丙泊酚具有明确的扩冠作用，至今仍被广泛应用于临床麻醉。随着循证医学的兴起，医疗工作者们组织了大规模的临床试验试图对一些常规药物进行全面的评价，其中一些实验就是针对丙泊酚［4，5］。一些试验表明使用丙泊酚可能加重再灌注心肌损伤［3，4］。我们考虑除了已知的保护作用外，丙泊酚对缺血心肌可能还存在某种“潜在”的威胁，这两种作用同时存在，在一般情况下，其保护作用强于损伤作用。因此，本实验将通过丙泊酚后处理对大鼠心肌缺血再灌注中肿瘤细胞因子α（TNF－α）、白细胞介素6（IL－6）的含量来为临床提供参考。

1 材料与方法

1.1 动物选择 健康成年Wistar雄性大鼠40只，清洁级，体重250g～300g，由山西医科大学生理教研室提供。

1.2 建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型 用乌拉坦以5mL／kg的剂量对大鼠腹腔注射，麻醉后固定，并将针形电极插入大鼠四肢皮下，进行心电监护，并记录正常Ⅱ导联心电图。将大鼠气管切开，连接动物呼吸机，呼吸频率60次／分，潮气量18ml／kg，行机械通气。开胸：将大鼠左侧胸壁第3～4肋间纵向切口，并剪开心包，暴露心脏，然后在肺动脉圆锥和左心耳连线中点下方约2mm 处进针，穿行7－0缝线，并在末端通过一塑料管，向下推动其管身来阻断冠脉血流，放松则造成再灌注，同时记录并观察Ⅱ导联心电图，观察ST 段抬高及恢复，以及心律失常来作为判断冠状动脉断流及再灌注成功与否的指标。

1.3 试剂 ELISA 试剂盒，Rat IL－6（北京四正柏生物科技有限公司）；ELISA 试剂盒，Rat TNF－α（北京四正柏生物科技有限公司）；HX－300动物呼吸机（泰盟科技有限公司）；SC－04低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）

1.4 实验分组及标本采集 实验随机分为4组（n＝10），假手术组（A 组）：只穿线不结扎，并分别于穿线之前，30 min后及2 h后取血；灌注组（B组）：穿线之前取血，结扎LAD 缺血30min后取血，再灌注2h后取血；缺血后处理组（C 组）：穿线之前取血，结扎LAD 缺血30min末行缺血30s，再灌注30s，重复3次，然后取血，再灌注2h后取血；丙泊酚后处理组（D 组）：穿线之前取血结扎LAD 缺血30min再灌注前5min静脉滴注丙泊酚（25μmol／L）后取血，再灌注2h后取血。取血之后立即离心血清并冰冻。

1.5 标本测定 用ELISA 法测定血清中TNF－α，IL－6的含量。

1.6 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差表示，各组间差异性检验采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

与A 组 比 较，B 组 血 清 含 量 中TNF－α，IL－6 均 升 高（P＜0.0 5），与B组比较，C组血清中TNF－α，IL－6含量均降低（P＜0.05），与C组比较，D 组血清含量中TNF－α，IL－6含量均降低（P＜0.05）。详见表1、表2。

表1 各组大鼠血清中TNF－α含量比较

表1 各组大鼠血清中TNF－α含量比较

与A 组比较，1）P＜0.05；与B 组比较，2）P＜0.05；与C 组比较，3）P＜0.05

组别 n TNF－α（mg／mL） F 值P假手术组（A 组） 10 0.134±0.018药后物处后理处组（理C组组（）D 组） 1100 00..119607±±00..00188032））20.873 0.000再灌注组（B组） 10 0.186±0.0131）

表2 各组大鼠血清中IL－6含量的比较

表2 各组大鼠血清中IL－6含量的比较

与A 组比较，1）P＜0.05；与B 组比较，2）P＜0.05；与C 组比较，3）P＜0.05

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3 讨 论

TNF－α是一种具有多种生物活性的细胞因子，主要来源于单核细胞和巨噬细胞，T 淋巴细胞、中性粒细胞、肥大粒细胞，内皮细胞在一定条件下也能产生。实验证明，TNF－α是重要的炎症促进因子并参与多种组织再灌注损伤。TNF－α能刺激血管内皮细胞和中性粒细胞表达表面黏附分子，促进中性粒细胞聚集，有助于中性粒细胞释放活性氧和蛋白水解酶等物质，加重缺血再灌注损伤程度［6］。此外，TNF－α能刺激i－NOS合成释放大量的NO，后者又与超氧阴离子迅速反应进一步产生氧化能力更强的轻自由基，可使细胞膜产生脂质过氧化致使组织损伤加重［7］。而临床证实，IL－6在心肌缺血再灌注损伤引起的心功能障碍发展中起重要作用［8］。

本实验通过丙泊酚后处理心肌缺血再灌注中TNF－α，IL－6的含量来说明丙泊酚对心肌的一种保护作用，其结果如下：与假手术组比较，缺血再灌注组中TNF－α，IL－6的含量升高，说明心肌缺血再灌注加重了心肌的损伤；与缺血再灌注组比较，心肌缺血后处理组中TNF－α，IL－6的含量降低，说明心肌缺血后处理能有效的保护心肌细胞；与心肌缺血后处理组相比，丙泊酚后处理组中TNF－α，IL－6的含量降低，说明丙泊酚后处理能对心肌起到保护作用。因此，本实验表明，丙泊酚后处理心肌缺血再灌注，能对心肌细胞起到保护作用。

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［3］ Piper HM，Meuter K，Schafer C，et al.Cellular mechanisms of isehemia reperfusion injury［J］.Ann Thorac Surg，2003，75（2）：644－648.

［4］ Prakanrattana U，Suksompong S.Comparision of propofol and fentanyl for surgical repair of congenital cardiac defects［J］.Med Assoc Thai，2009，85（3）：807－814.

［5］ Thomson IR，Harding G，Hudson RJ，et al.A comparison of fentanyl and propofol in patients undergoing coronary artery bypass Graft surgery［J］.Cardiothorac Vasc Anesth，2011，14（6）：652－656.

［6］ 胡刚，刘先义，夏中元，等.参附注射液对缺血再灌注大鼠肠粘膜NF－κB、CAM－l、TNF－α、i－NOS表达的影响［J］.同济大学学报（医学版），2003，24（5）：381－383.

［7］ Suzuki Y，Deitxh EA，Mishima S，et al.Iniducible nitricoxide synthase gene knockout mice have increased resistance to gut injury and bacterial translocation after an intestinal isehemia－reperfusion injury［J］.Crit CareMed，2000，28（11）：3692－3696.

［8］ Gwechenberge M，Mendoxa LH，Youker KA，et al.Cardiac myocytes produce interleukin－6in culture and in viable border zone of reperfused infarctions［J］.Circulation，1999，99（14）：546－551.