iNOS对兔角膜碱烧伤后新生血管形成的影响

修立恒 刘洪涛 曾小平

角膜的透明性是细胞结构和层次交错排列平衡的直接结果[1]，也是促进和抑制新生血管形成因子之间调节平衡的间接作用结果。已有研究表明血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、一氧化氮(nitric oxide，NO)和缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor，HIF)等均在新生血管形成过程中有着重要作用[2-3]。而病理情况下NO主要是由诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)催化合成，并且还发现氨基胍为一种相对选择性iNOS抑制剂，能够特异性抑制iNOS的表达[4]。本实验通过兔眼碱烧伤建立角膜新生血管模型，采用免疫组织化学法检测iNOS、VEGF在兔角膜碱烧伤后不同时间段的表达，以探讨iNOS对角膜碱烧伤后新生血管形成的影响。

1 材料与方法

1.1材料健康新西兰大白兔30只，雌雄兼备，体质量2.0～2.5 kg，由重庆市腾鑫比尔动物有限公司提供，裂隙灯下检查无眼表疾病。氨基胍(美国Sigma公司)，复方托吡卡胺眼液(参天制药株式会社)，妥布霉素眼液(美国Alcon公司)，小鼠抗兔VEGF单克隆抗体、免疫组织化学兔鼠通用型二抗试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)，小鼠抗兔iNOS单克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。

1.2实验方法

1.2.1角膜碱烧伤新生血管模型的制备30只大白兔均选取右眼为实验眼，用30 g·L-1的戊巴比妥钠按1 mL·kg-1的剂量从兔耳缘静脉缓慢注射，待全身麻醉成功后，再用丙美卡因眼液滴右眼局部麻醉，开睑器开睑，棉签吸干眼表多余的液体后，将直径为8 mm的浸有1 mol·L-1NaOH的无菌圆形滤纸，放于角膜中央1 min，快速用生理盐水充分冲洗结膜囊及眼表2 min，建立角膜碱烧伤模型。……