实时荧光定量PCR技术在年龄相关性白内障患者GSTM1、GSTT1基因拷贝数变异检测中的应用△

周婧 管怀进

年龄相关性白内障(age-related cataract，ARC)是最常见的致盲性眼病[1-2]，其病因和发病机制迄今仍不清楚。公认的危险因素除了紫外线照射等外源性因素外，衰老、心血管疾病等内源性代谢产生的自由基和活性氧也会引起氧化损伤，致使晶状体的DNA、脂质和蛋白质产生过氧化作用，最终导致晶状体混浊。而谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S transferase，GST)被认为是保护晶状体免受氧化损伤的重要酶。GST主要通过催化还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)与毒性化合物结合而清除自由基，抑制晶状体发生氧化损伤从而抑制白内障。然而，不同个体的清除能力存在明显差异，造成这种差异的遗传物质基础很大程度上来源于基因多态性。本研究利用实时荧光定量PCR技术检测ARC患者GSTM1、GSTT1基因拷贝数多态性，以探讨GSTM1、GSTT1基因拷贝数变异是否与ARC有关。

1 资料与方法

1.1研究对象2008年6月至8月间，从“江苏眼病研究”南通流行病学调查基地[3]收集ARC组患者279例(558眼)，年龄(69.0±8.4)岁；对照组145例(290眼)，年龄(64.5±4.2)岁；男175例，女249例，均为汉族人(所有人四代内均为中国汉族人)。ARC组包括131例皮质性白内障、70例核性白内障、78例后囊下性白内障患者。本研究遵循赫尔辛基宣言，获得南通大学附属医院伦理委员会批准(批号为2010-05)，检查前所有研究对象均签署知情同意书。

1.1.1ARC组纳入与排除标准晶状体混浊标准参照文献[4]，包括空泡、水裂、板层分离、轮幅状混浊、楔形混浊、核混浊及后囊膜下混浊等，不包括少数对视力无影响的点状混浊；最佳矫正视力<0.7；年龄≥60岁。排除糖尿病、外伤、近视、青光眼、视网膜脱离及其他原因引起的并发性白内障，排除双眼中任一眼为人工晶状体眼或无晶状体眼，排除明显全身性疾病，排除自由基相关疾病如糖尿病、心血管疾病、肾脏病和癌症等。

1.1.2对照组纳入与排除标准晶状体透明，双眼最佳矫正视力>0.8，年龄≥60岁，与ARC组无亲属关系，均无ARC家族史，与ARC组年龄、性别相匹配。排……