血液病患者外周血未染色大细胞与血涂片镜检间关系的探讨

王柏山，孙 宁

(1.辽宁中医药大学附属医院 临床检验中心,辽宁 沈阳110032；2.铁岭县第一医院 检验科,辽宁 铁岭112000)

血细胞分析仪已经广泛应用给检验工作带来了极大的方便。但是，外周血异常血细胞形态对于血液系统疾病诊断的作用仍旧依赖于传统的血涂片镜检[1]。对于已经明确诊断的血液系统疾病，监测疗效和病情判断如果还采用血涂片镜检就会出现检验结果不稳定，检验速度慢等缺陷。所以许多全自动血细胞分析仪均增加相关检测参数用以反映外周血异常细胞情况，未染色大细胞(large unstained cell，LUC)即是Bayer ADVIA2120血细胞分析仪用以提示外周血异常细胞情况的一项参数。然而，LUC检测在临床应用过程中，就单个病例而言常常出现与血涂片镜检阳性细胞的性质或者数量不符的现象，给临床工作带来一定困扰。那么，LUC检测与血涂片镜检的关系就成了临床医生和检验人员共同关心的话题。现对212例各类血液病患者的外周血LUC进行分析，用于评价LUC检测与血涂片镜检的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源

1.1.1 病例组 随机收集2012年1月至2012年10月间的血液科住院患者做血细胞分析的标本，共212例，其中男86例，女126例，年龄最小8岁，最大92岁，平均60岁。均经血常规、外周血涂片、骨髓细胞学等检查符合相对应的血液系统疾病诊断标准，确诊为血液系统疾病，具体疾病分布见表1。患者住院初诊和治疗期间采集骨髓涂片当天，采集患者外周血进行血细胞分析和外周血涂片镜检。

1.1.2 对照组 随机收集2012年1月至2012年10月间的其他科室住院患者做血细胞分析的标本，共190例，其中男71例，女119例，年龄最小5岁，最大89岁，平均58岁。均经临床医师确诊为非血液系统疾病。

表1 血液系统疾病患者病种分布

注：其他疾病包括多发性骨髓瘤、脾功能亢进、巨球蛋白血症、骨髓转移癌。

1.2 仪器与试剂

Bayer AVDIA2120全自动五分类血细胞分析仪(美国)及其配套的试剂、全血质控物以及校准品。瑞氏-姬姆萨染色液(珠海BASO)。OLYMPUS CX40光学显微镜。德国Greiner Bio-One公司生产的含EDTA-K2抗凝剂的一次性真空血管。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 晨起空腹采集患者静脉血2 ml，采用EDTA-K2抗凝，颠倒混匀8次使混合均匀。

1.3.2 未染色大细胞测定 每半年按照标准操作规程使用配套校准品对ADVIA2120血细胞分析仪进行校准并评价仪器的准确度、精密度、线性范围等指标，满足ISO15189对仪器管理的要求后应用其检测临床标本。测定标本前先进行高、中、低值质控物的检测，主要结果均在允许范围后方可测定患者标本。实验过程中，严格按照操作规程。所有标本测试均在采血后1h内完成。未染色大细胞百分比(LUC)的正常参考范围为0%-4.0%，LUC大于4.0%者为阳性，小于4.0%者为阴性。

1.3.3 外周血涂片白细胞分类计数 血常规标本在完成检测后，取抗凝血标本1滴制成血涂片，用瑞氏-姬姆萨染色液按照标准操作规程染色。由两名在形态学检查方面有经验的工作人员(中级或中级以上职称者)进行镜检(双盲法)，各分类计数白细胞100个，记录平均值。将异形淋巴细胞比例大于2%作为其阳性标准[2]，血涂片中出现其他异常细胞(如原始细胞、幼稚细胞、浆细胞等)均直接归为阳性。

1.3.4 骨髓原始细胞计数 患者住院初诊和治疗期间采集骨髓涂片，用瑞氏-姬姆萨染色液按照标准操作规程染色。由两名在形态学检查方面有经验的工作人员(中级或中级以上职称者)进行镜检(双盲法)，分类计数白细胞200个，记录平均值。检验结果超出正常骨髓细胞计数标准[3]为增高，未超出为正常。

1.4 统计学分析

应用SPSS17.0进行u检验、计算Kappa系数及受试者工作特征(ROC)曲线。P<0.05具有统计学意义。用Kappa系数评价LUC与外周血涂片两种检测方法所得结果的一致性程度，Kappa系数≤0.4表示相关性弱；0．41-0.60表示中度相关；0.61-0.80表示高度相关，≥0.81表示相关度极强。

2 结果

2.1 病例组与对照组患者的LUC结果比较

病例组与对照组患者的LUC结果见表2。病例组LUC均值高于对照组患者的LUC结果，经统计学分析差异具有显著性，u=8.06，P<0.05。

表2 病例组与对照组患者的LUC结果比较(%)

注：#与对照组LUC相比较，P<0.05

2.2 不同血液系统疾病患者的LUC结果比较

212例血液系统疾病患者的LUC结果及疾病分布见表3。血液系统疾病患者中LUC阳性率为41.04%。其中髓细胞白血病和骨髓增生异常综合征(MDS)患者的LUC阳性率较高，分别为60.87%和69.64%。相比之下，淋巴细胞白血病、贫血等疾病阳性率较低。

表3 不同血液系统疾病患者的LUC结果比较

2.3 髓细胞白血病和MDS患者与骨髓涂片原始细胞检查结果比较

46例髓细胞白血病和56例MDS患者外周血LUC与骨髓涂片检查原始细胞结果见表4，以骨髓涂片检查原始细胞正常与否为金标准，评价LUC对于两类血液系统疾病的病情进展和疗效的监测价值，其敏感性为78.9%，特异性为84.4%，受试者工作特征(ROC)曲线计算曲线下面积为0.833。

表4 46例髓细胞白血病和56例MDS患者外周血LUC与骨髓涂片检查原始细胞结果比较

2.4 血液病患者的LUC与外周血涂片检查结果的比较

212例血液系统疾病患者的LUC与外周血涂片检查结果见表5。以外周血涂片检查为标准，评价LUC对外周血幼稚细胞的诊断价值，其敏感度为76.54%，特异度为80.92%。统计显示，LUC与外周血涂片检查在对外周血异常细胞的诊断上一致性结果为Kappa=0.567，u=8.28，P<0.05,即可认为两种方法具有一致性，且其一致性强度为中等。

表5 LUC检测与血涂片镜检检查结果的比较

3 讨论

目前，多数医院应用的全自动血细胞分析仪有着较好的筛选能力，能满足临床对血细胞分析需求[4]。但是全自动血细胞分析仪对血细胞的识别能力有限，尤其是血液病患者的外周血中，常常出现原始幼稚细胞、异型淋巴细胞、中毒颗粒等血细胞形态异常。所以，对于仪器有报警提示或计数异常超出一定范围时需要血液涂片复检[5，6]。Bayer ADVIA2120血细胞分析仪的过氧化物酶通道是根据不同细胞的过氧化物酶活性不同的原理，将血细胞进行过氧化物酶染色，使各细胞胞浆内呈现出不同的酶化学反应。在过氧化物酶通道中并未被染色的细胞称为未染色大细胞，其体积大于正常淋巴细胞+2SD，包括各种原始和幼稚细胞、异形淋巴细胞、浆细胞等。具有重复性好，操作简便快速等优势。

通过对病例组和对照组LUC值的比较，我们发现血液病患者的LUC值明显高于后者，LUC检测提示血液系统疾病的诊断。在LUC阳性的非血液病患者中，仅有1例患者的外周血涂片查到幼稚细胞，其他患者外周血涂片查到的是异常淋巴细胞。在对212例血液系统疾病患者外周血的LUC研究中，我们发现LUC阳性率在髓细胞白血病和MDS患者中较高，分别为60.87%和69.64%。提示LUC对髓细胞白血病和MDS的诊断有着较高的提示意义，可作为这两种疾病诊断的筛选指标，与张璞等[7]报道一致。血液病病情的监测主要依靠骨髓涂片检测原始细胞，通过对上述两种血液病共102例患者的LUC和骨髓涂片比较分析，LUC的其敏感性为78.9%，特异性为84.4%，受试者工作特征(ROC)曲线计算曲线下面积为0.833，说明LUC可以用来反映患者骨髓原始细胞的变化，可以用来监测病情的变化。外周血涂片检查是以往我们实际检验过程中常用来反映患者骨髓原始细胞变化的手段，通过计算Kappa系数，我们也发现LUC与外周血涂片检查在对外周血异常细胞的诊断上具有中等一致性(Kappa=0.567，P<0.05)。而212例患者中有81例患者的外周血涂片所查到的异常细胞，且均为幼稚细胞。提示LUC可在一定程度上反映外周血中的幼稚细胞的情况。可认为LUC对血液科患者病情进展及治疗效果具有积极的提示意义。通过统计我们还发现，在部分LUC升高患者的外周血涂片中并未查到异常细胞，这可能与部分单核细胞过氧化物酶呈阳性有关，还可能与血涂片检查的细胞数量有限相关。

尽管LUC对外周血异常细胞检测与骨髓涂片检测原始细胞有着较好的一致性，并具有操作简单，人为因素影响小等优势，但其不能做到“眼见为实”。因此，LUC检测不能完全替代外周血涂片，实际工作中我们应该结合LUC与外周血涂片检查。对于已经明确诊断的血液系统疾病，特别是髓细胞白血病和MDS，可应用LUC检测监测病情发展，如果怀疑病情变化再涂片镜检确认，这样既能提高检测速度又能保证检测质量。

作者简介：王柏山，男，39岁，硕士研究生，检验中心副主任，副主任技师，主要从事临床检验诊断学(血液、肿瘤细胞)。

参考文献：

[1]李 霞，曾文洁，郭建华.血液分析仪联合血细胞形态观察在临床诊断中的应用[J].国际检验医学杂志，2012，7(33):876.

[2]赵 冬，都丽丽.ADVIA2120血细胞分析仪中大体积未染色细胞(LUC)与血涂片之间的关系[J].延安大学学报，2011，3(9)：30.

[3]许文荣，王建中.临床血液学检验[M].5版.北京：人民卫生出版社，2013:55-59.

[4]吴新忠，庞 鑫，罗东福,等.Bayer ADVIA2120全自动血细胞分析仪的性能评价[J].现代医学仪器与应用，2007，19(6):62.

[5]Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et al.The international consensus group for hematology review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis[J].Lab Hematol,2005,11:83.

[6]中华检验医学杂志编辑委员会.全国血液学复检专家小组工作会议纪要暨血细胞自动计数复检标准释义[J].中华检验医学杂志，2007，30：380.

[7]张 璞，孙海英，鹿群先,等.外周血为染色大细胞在骨髓增生异常综合征早期诊断中的价值[J].中国实用医药，2011，11(6)：3.