金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠的动态抗氧化作用

田嘉铭 袁 博 朱登祥 王书华 安 芳

(河北北方学院药学系，河北 张家口 075000)

金莲花是毛茛科植物金莲花属金莲花的干燥花及花蕾，有清热解毒，消肿明目功效，临床上主要用于上呼吸道感染、扁桃体炎等。前期研究表明，金莲花中荭草苷和牡荆苷具有对D半乳糖(D-gal)致衰老小鼠体内及体外抗氧化作用，其抗氧化作用与维生素E作用相当〔1～5〕。有关金莲花中荭草苷和牡荆苷体内动态抗氧化作用尚未见报道，本研究拟通过比较荭草苷和牡荆苷对D-gal致衰老小鼠血清抗氧化酶活性动态影响，寻找荭草苷和牡荆苷抗氧化作用的时效关系，为抗衰老药物的研究提供新的动力。

1 材料与方法

1.1药品和试剂 野生金莲花采自河北省张家口沽源，经我院药物研究所鉴定为短瓣金莲花。荭草苷和牡荆苷(自制，经1H- NMR和HPLC鉴定纯度为98.9%)；D-gal，分析纯，上海试一化学试剂有限公司；还原性谷胱甘肽，纯度≥99%，国药集团化学试剂有限公司；生理盐水，石家庄第四制药厂；总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)测定试剂盒，均购买自南京建成生物工程研究所，(批号分别为：20100610、20091210、20090915、20100823、20100920)。

1.2动物 健康的昆明种小鼠390只(雌雄各半)，体重(20±2)g，河北北方学院动物中心提供(许可证号：SCXK京2004-0001)，分笼饲养，室温18℃～25℃。

1.3仪器 U-3900紫外可见分光光度计(日本)；ME235S十万分之一电子天平(日本)；DK-8型电热恒温水槽(上海精密实验设备有限公司)；低温高速离心机(赛多利斯公司)；HQ-60型旋涡混合器 (北方同正生物技术发展公司)。

1.4实验方法

1.4.1造模方法 采用D-gal致亚急性衰老法〔6〕，将D-gal 10 000 mg溶于500 ml生理盐水中，按剂量200 mg·kg-1·d-1(0.01 ml/g)给小鼠腹腔注射，正常组注射等体积生理盐水，造模时间为8 w，每天称重1次，依据末次称重调整给药剂量。

1.4.2模型验证 造模第6周和第8周分别选取正常组和模型组小鼠(备用) 10只，摘眼球取血，分离血清，检测T-AOC、SOD和MDA，以验证小鼠衰老情况。第8周末，模型组小鼠指标与正常组相比具有统计学意义，显示模型复制成功。

1.4.3给药与分组 荭草苷和牡荆苷溶液的配制：N，N-二甲基甲酰胺∶吐温-80∶生理盐水=1∶1∶20。造模成功后，实验分为正常组、模型组、荭草苷和牡荆苷高、中、低各3个剂量组(40、20、10 mg/kg)，各治疗组从第9周开始每日上午分别口服灌胃给药，正常组和模型组给等体积的生理盐水，1次/d。荭草苷和牡荆苷组给药时间设定为2、4、6、8 w，正常组、模型组和维生素E组时间设定为8 w。

1.4.4小鼠血清中SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC的测定 给药2、4、6、8 w后，小鼠断头取血(每个时间点处死相应组)，以4 000 r/min离心10 min，取血清，按试剂盒说明操作，测定SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC的活性。

1.5统计学方法 应用SPSS16.0软件进行t检验。

2 结 果

荭草苷和牡荆苷对D-gal致衰老小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC抗氧化活性动态影响，结果见表1。与正常组相比，模型组中小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC活性明显降低，具有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比，第2、4周，荭草苷和牡荆苷治疗组能够提高小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC的活性，但无显著性差异。第6、8周，荭草苷和牡荆苷治疗组使小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的活性上升明显，且有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。与维生素E(VE)组相比，给药8 w后，荭草苷和牡荆苷中、低剂量组提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的作用较弱，具有显著性差异(P<0.05)，高剂量组与VE组相比无显著性差异。荭草苷和牡荆苷相比，给药2、4 w后，各剂量组在提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX活性上无显著性差异，给药6 w后，荭草苷高、中、低剂量组在提高血清抗氧化酶活性上高于同等剂量的牡荆苷(P<0.05)。给药8 w后，荭草苷中、低剂量组在提高血清抗氧化酶系活性上高于同等剂量牡荆苷(P<0.05)，高剂量组之间无显著性差异(P>0.05)。见表2。

表1 各组小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX水平±s，n=10，U/ml)

表2 不同时点不同荭草苷、牡荆苷剂量组小鼠血清 T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX水平±s，n=10，U/ml)

3 讨 论

4 参考文献

1王书华，杨国栋，饶 娜，等.金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰小鼠体内抗氧化作用的影响〔J〕.中国老年学杂志，2011；31(24)： 4818-20.

2饶 娜，杨国栋，安 芳，等.金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠脂褐素和脑组织形态学的影响〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(3)： 562-4.

3袁丹华，屈海琪，蒋 伟，等.金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠肝、肾、脑组织的抗氧化作用〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(9)： 1875-7.

4杨国栋，饶 娜，田嘉铭，等.金莲花中荭草苷和牡荆苷抗氧作用的研究〔J〕.时珍国医国药， 2011；22(9)： 2172- 3.

5颜 娟，胡海娜，田嘉铭，等.金莲花总黄酮抗氧作用研究〔J〕.时珍国医国药，2011；22(9)：386-7.

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7胡 平，吴耿伟，夏 青，等. SOD模拟及其抗氧化和抗炎症功能的研究进展〔J〕. 化学进展，2009；21(5)：873-9.

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9赵雪莹，闫忠红，李 冀. 二至丸对D-半乳糖致衰老模型大鼠CAT, GSH-PX影响的实验研究〔J〕. 中医药信息，2010；27(2)：34-6.

10邓 洋，许秀举，于海平. 啤酒对大鼠血清的LDH和T-AOC的影响〔J〕. 食品科技，2009；34(5)：120-31.