菝葜体外抗非小细胞肺癌细胞活性物质研究△

邱千，戴琪，陈树和，干国平，刘焱文，卿国良

(1.华中科技大学 同济医学院 基础医学院 药理学系，湖北 武汉 430030；2.湖北中医药大学 中药资源与中药化学省级重点实验室，湖北 武汉 430061)

菝葜体外抗非小细胞肺癌细胞活性物质研究△

邱千1，2，戴琪2，陈树和2，干国平2，刘焱文2，卿国良1*

(1.华中科技大学 同济医学院 基础医学院 药理学系，湖北 武汉 430030；2.湖北中医药大学 中药资源与中药化学省级重点实验室，湖北 武汉 430061)

目的：筛选菝葜抗非小细胞肺癌细胞活性物质。方法：采用溶剂法、明胶沉淀法和大孔吸附树脂纯化技术，将菝葜提取分离为乙醇粗提物、总鞣质、总黄酮3个物质部位，利用细胞计数仪测定3种物质部位抗A549、NCI-H522、NCI-H23细胞存活率。结果：从菝葜提取分离的3种物质部位均有不同程度抗非小细胞肺癌细胞活性，其中鞣质部位致非小细胞肺癌细胞存活率最低，并在浓度范围内呈现出良好的计量依耐性。结论：鞣质为菝葜主要抗非小细胞肺癌细胞活性物质。

菝葜；非小细胞肺癌细胞；鞣质；乙醇提取物；总黄酮

菝葜SmilaxchinaL.是百合科菝葜属植物，其药用部位为根茎，收载于《中国药典》2010版一部，具有利湿去浊，祛风除痹，解毒散瘀的功能[1]。菝葜是中医临床治疗肿瘤疾患的常用配伍组方药味，如以菝葜为君药的复方菝葜颗粒，对治疗肺癌有一定疗效[2]。前人报道了菝葜的黄酮类成分具有体外抗肺癌作用[3-4]，其鞣质类成分抗肺癌生物活性尚未见文献报道。笔者采用溶剂法、明胶沉淀法和大孔树脂纯化技术，将菝葜提取分离为乙醇粗提物、总鞣质部位和总黄酮部位，对上述3种提取分离物质的抗肺癌活性进行了比较研究。研究结果表明，菝葜鞣质类成分为其主要抗肺癌活性物质。

1 材料

1.1 药材与试剂

菝葜药材于2012年8月购自湖北福人药业有限公司，经湖北中医药大学药学院张秀桥教授鉴定为菝葜SmilaxchinaL.的干燥根茎。

D101大孔树脂(上海劲凯树脂有限公司)，明胶(天津市博迪化工有限公司)，RPMI-1640培养基(美国Gibco公司)，0.25%胰蛋白酶(美国Gibco公司)，DMSO( 美国Sigma-Aldrich公司)，台盼蓝(美国Sigma-Aldrich公司)，胎牛血清(美国Hyclone公司)，丙酮(天津市天力化学试剂有限公司)。

1.2 细胞株

非小细胞肺癌细胞A549、NCI-H522、NCI-H23(美国ATCC)。

1.3 仪器

二氧化碳培养箱(三洋电机株式会社)，超净工作台(苏州净化设备有限公司)，电热高压蒸气灭菌锅(上海三申医疗器械有限公司)，倒置显微镜(安徽中科中佳科学仪器有限公司)，24孔细胞培养板(美国Costar公司)，细胞计数仪(上海睿珏生物有限公司)，电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

2 方法

2.1 供试药物的制备

乙醇粗提物：称取菝葜饮片1 kg，依次加入8倍量、6倍量60%乙醇回流提取2次，依次为2 h,1 h,合并提取液，回收乙醇，干燥。

总鞣质部位：将上述回收乙醇后的提取液加入一定量4%明胶溶液，搅拌，静置，过滤得到沉淀部分，加入适量丙酮，搅拌，静置，滤除沉淀，滤液回收溶剂，干燥。

总黄酮部位：将上述明胶沉淀法所得滤液过D101大孔树脂，依次用水、50%乙醇溶液洗脱，收集50%乙醇洗脱液，干燥得黄酮部位[5]。

将乙醇粗提物、总黄酮部位、总鞣质部位溶解于DMSO后用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基稀释成相应浓度，备用。

2.2 供试品对体外培养肿瘤细胞生长的影响

A549、NCI-H522、NCI-H23细胞均为贴壁细胞，将复苏好的细胞置于含10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1链霉素的RPMI-1640培养基中，在37 ℃、5%CO2、相对湿度95%培养箱中培养，每日观察细胞生长情况。A549细胞2～3 d传代1次，NCI-H23和NCI-H522细胞3～4 d传代1次。

将处于对数生长期的A549、NCI-H522、NCI-H23细胞，以每孔500 μL(分别约2.5×104个、4.5×104个、4.5×104个)接种于24 孔培养板中，培养24 h，待细胞贴壁后，吸弃上清液，于上述24孔板中加入不同浓度的待测样品液500 μL，每个浓度平行2孔。以0.1%DMSO作空白于37 ℃、5%CO2培养箱中培养24 h后，转移孔中细胞于EP管中，吹打混匀。吸取20 μL，加入等量0.4%台盼蓝，吹打混匀，用细胞计数仪测细胞存活率。实验重复两次，取平均值。

3 结果

菝葜提取物对A549、NCI-H522、NCI-H23 3种细胞生长的影响与对照组比较，菝葜鞣质部位组致肺癌细胞的存活率最低，菝葜总鞣质抗肺癌细胞活性优于其乙醇粗提物和总黄酮，并具计量效应关系，见图1。

A.A549 B.NCI-H522 C.NCI-H23图1 菝葜不同物质部位对3种肺癌细胞存活率的影响

4 讨论

菝葜是中药复方临床用于治疗肿瘤疾患常用的配伍药味。迄今文献报道了菝葜黄酮类成分为其主要抗肿瘤活性物质，并从中分离和筛选出多种抗肿瘤活性化合物[2-3]。笔者选取3种具有代表性的非小细胞肺癌细胞A549、NCI-H23及NCI-H522为实验用细胞株，对菝葜乙醇粗提物、总鞣质部位和总黄酮部位进行了抗肺癌细胞活性筛选。研究结果表明菝葜总鞣质部位致3种肺癌细胞死亡率最高，且在浓度范围内呈现良好的计量依耐性，说明菝葜鞣质部位具有良好的体外抗非小细胞肺癌活性，从而为进一步诠释菝葜治疗肺癌的物质基础提供实验依据，具有重要意义。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：290.

[2] 李广诚，董克礼，朱宏.复方菝葜颗粒治疗中晚期非小细胞肺癌的临床研究[J].中国医学工程，2007，15(3)：269-270.

[3] Wu Lisheng，Wang Xiaojing，JIA Aiqun.Cytotoxic polyphenols against breast tumor cell inSmilaxchinaL.[J].J Ethnopharmacol，2010，130：460-464.

[4] Li Yuanlii，Gan Guoping，Liu Yanwen，et al.A flavonoid glycoside isolated fromSmilaxchinaL.rhizome in vitro anticancer effects on human cancer cell lines[J].J Ethnopharmacol，2007，113：115-124.

[5] 于伟.菝葜抗炎有效部位及其软胶囊制剂药学研究[D].武汉：湖北中医药大学，2008.

Screening of anti-NSCLCC Components from Rhizomes of Smilax china L. in vitro

QIU Qian1，2，DAI Qi2，CHEN Shuhe2，GAN Guopin2，QING Guoliang1*，LIU Yanwen2*

(1DepartmentofPharmacology，SchoolofBasicMedicalSciences，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China2.ProvincialKeyLaboratoryofResourceandChemistryofChineseMedicine，HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Wuhan430061，China)

Objective：To Screen anti-NSCLCC active components from the rhizomes ofSmilaxchinaL.Methods：Ethanol crude extracts，tannins and flavonoids were extracted and separated fromSmilaxchinaL.by using solvent method，gelatin precipitation and macroporous adsorption resin purification technology.The survival rates of A549、NCI-H522、NCI-H23 were measured by cell counting instrument.Results：All the extracts had different anti-NSCLCC activities，tannins showed the best activity against A549、NCI-H522、NCI-H23 cells and presented good dose-effect relationship.Conclusion：Tannins are the main anti-NSCLCC ingredients of the rhizomes ofSmilaxchinaL.

SmilaxchinaL.；NSCLCC；Tannins；Ethanol crude extracts；Flavonoids

国家自然科学基金项目(31270393)

*[通信作者] 卿国良，教授，博士生导师，肿瘤药理学术带头人；E-mail：qingguoliang@mail.hust.edu.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.01.004

2013-08-09)