光果翠雀止血作用机制研究及安全性评价＊

费改顺，贾正平，盛 杰

(中国人民解放军兰州军区兰州总医院，甘肃 兰州 730050)

光果翠雀 Delphinium grandiflorum L．var．leiocarpum W．T．Wang 为毛茛科翠雀属植物，分布于山西(灵石)、宁夏、甘肃东部(泾川、正宁)、陕西(中部以北)等地，生长于海拔680～1 800 m的山坡、草地、固定沙丘等背阴处[1]。该植物在民间用于治疗风热牙痛、疥癣、头虱及跌打损伤、止血止痛，具有独特作用。光果翠雀根于农历6月初采集后，除去地上部分和须根，洗净泥土，晒干，粉碎后于密闭容器保存备用。前期研究表明[2－3]，光果翠雀含有多种生物碱，主要有二萜生物碱类化合物如牛扁碱(lyconctonine)、甲基牛扁碱(methyllycoctonine)、德尔色明甲(delsemine A)、德拉瓦印(delavaine)，黄酮类化合物如槲皮素(quercitin)、山柰酚(kaempferol)、异鼠李素(isorhamnetin)，甾体类化合物如β－谷甾醇、胡萝卜苷、脂肪酸类化合物等;光果翠雀根的原粉及其水提物、醇提物具有良好的止血镇痛作用。光果翠雀尽管作为草药在民间应用，但关于其止血作用的机理及安全性目前却未见任何文献报道。本研究中采用小鼠断尾法考察光果翠雀对出凝血时间的影响，探究其止血作用的机制，并通过毒性研究为其安全使用使用提供一定的参考。

1 材料与方法

1．1 材料

Wistar大鼠，雄性，体重180～200 g，由甘肃肿瘤研究所提供;新西兰大白兔，体重(2．5±0．2)kg，由兰州生物制品研究所提供，本院动物实验科适应性饲养5 d;BalB/C小鼠，体重(20±2)g，由兰州军区总医院动物实验科提供。光果翠雀于2006年6月采自陕西靖边县，经兰州大学赵汝能教授鉴定为毛茛科翠雀属植物光果翠雀 Delphinium grandiflorum L．var．leiocarpum W．T．Wang。其根晒干后粉碎过100目筛，为白色粉性粉末，味苦、气微，具有较强的吸湿性，故密闭保存。云南白药(批号为20030803);创愈散粉(批号为20031102);凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、部分凝血活酶活性时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒由美国 Istrumentation Laboratory生产，实验仪器为美国 Beckman Coulter产ACL9000型全自动凝血/纤溶分析仪。

1．2 方法

口服给药对大鼠凝血功能指标的影响:取Wistar大鼠，随机分成5组，即空白对照组(A组)、云南白药组(B组，0．9 g/kg)、创愈散高剂量组(C1组，0．9 g/kg)、创愈散中剂量组(C2组，0．45 g/kg)、创愈散低剂量组(C3组，0．23 g/kg)，每组10只，连续灌胃给药7 d，A组给予同样体积的生理盐水。末次给药后1 h，3%戊巴比妥0．5 mL腹腔注射麻醉，颈总动脉取血1．7 mL，加于含枸橼酸钠抗凝剂0．3 mL的采血管中。摇匀，3 000 r/min，离心3 min，取血清 400 μL，测定 PT，APTT，TT 及 FIB 含量。

外用于破损皮肤对大白兔各系统的影响:取新西兰大白兔6 只，体重(2．6 ±0．2)kg，背部两侧去毛，面积约 150 cm2。随机分为两组，参照2009年中华人民共和国卫生部药政管理局《中药新药研究指南(药学药理学、毒理学)》低剂量组给药1．5 g，高剂量组给药4．5 g。用砂纸打磨至渗血，造成皮肤破损，将翠雀根粉以适量蒸馏水调成糊状，涂于破损皮肤表面，纱布覆盖包扎，24 h后洗净药物，观察去除受试药物后1，24，48，72 h时至9 d的体重，以及中枢和运动神经系统、植物神经系统、呼吸系统、心血管系统、胃肠系统、泌尿生殖系统和皮肤、皮毛眼等各系统或部位的中毒表现。

外用皮肤刺激性试验:参照文献[4]，采用半封闭斑贴法。取新西兰大白兔4只，体重(2．6±2)kg，先剪去背毛，再用适量8%Na2S脱毛。将翠雀根粉0．5 g调成糊状，覆盖约直径1 cm的皮肤，以纱布作为斑贴覆盖物，胶布固定，4 h后去掉斑贴，清洗皮肤，观察 0．5，1，24，48，72 h 的皮肤反应(红斑及水肿)。

小鼠口服毒性试验:试验药光果翠雀根粉，按用量称取，用蒸馏水配制，小鼠灌胃给药给药，每10 g体重给药0．1 mL，以不等质量浓度等容量给药。

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 口服给药对大鼠凝血功能指标的影响

结果见表1。可见，光果翠雀能明显缩短PT和APTT，而对TT和FIB无明显影响，高剂量光果翠雀缩短PT及APTT的作用更显著。

表1 光果翠雀口服对大鼠凝血功能指标的影响()

表1 光果翠雀口服对大鼠凝血功能指标的影响()

注:与 A 组比较，Dunnett t检验，＊P ＜0．05。

组别A组B组C1组C2组C3组给药及剂量生理盐水云南白药0．9 g/kg光果翠雀0．9 g/kg光果翠雀0．45 g/kg光果翠雀0．23 g/kg n 9 1 0 10 10 9 PT(s)20．11 ± 4．15 17．87±1．27＊18．00±1．99＊18．34 ± 0．95 17．46 ± 1．15＊APTT(s)26．64 ± 5．84 23．63 ±4．25＊21．97 ±4．65＊24．04 ± 1．24 22．22 ± 2．19 TT(s)21．73 ± 2．9 20．88 ±2．98 20．43 ±3．24 20．17 ± 1．78 20．97 ± 4．70 FIB(μg/mL)1．81 ± 0．21 2．29 ±0．34 2．24 ±0．34 2．17 ± 0．82 2．00 ± 0．64

2．2 外用于破损皮肤对大白兔各系统的影响

破损皮肤外用光果翠雀后，大白兔行为正常，无躁动不安或静伏少动现象，无抽搐、震颤、麻醉、局部肌肉抽动、烦燥易怒、冷漠、感觉过敏现象。结果表明，破损皮肤外用光果翠雀对大白兔中枢和运动系统、神经系统、植物神经系统、呼吸系统、心血管系统、胃肠系统、泌尿生殖系统和皮肤、皮毛等均无明显毒性作用。

2．3 外用皮肤刺激性试验

经过72 h的试验，大白兔斑贴处皮肤未见任何红斑和水肿。结果表明，光果翠雀外用无明显皮肤刺激作用。

2．4 口服急性毒性试验

预试验结果表明，小鼠口服每kg体重25，20，10 g药物时，动物100%死亡;而口服每kg体重8，5，2，1 g药物时动物死亡率分别为 70%，60%，0，0。

根据预试验结果，在10 g/kg和5 g/kg之间以0．7为组间距，设 10．0，7．0，4．9，3．4，2．4 g/kg，5 个剂量组，每组 10 只动物，雌雄各半，进行急性毒性试验。观察到，动物死亡时间一般在10 min以内，死亡前先出现眼球突出，继而步态不稳，口唇、四肢青紫、发绀，死亡后不易僵尸;解剖发现肺轻度充血，其他脏器未明显异常。用Bliss法[5]计算，光果翠雀根粉小鼠灌胃的半数致死量(LD50)为 4．3 g/kg。

为进一步研究毒性成分的部位，对其水溶性部分、脂溶性部分、醇溶性部分及生物碱部分的毒性也进行了研究。结果表明，其主要毒性部分是生物碱，小鼠灌胃给药的 LD50为0．045 g/kg;水溶性部分的毒性较小，给药量达5 g/kg时无动物死亡;脂溶性部分、醇溶性部分的毒性介于前两者之间。

3 讨论

长期以来，光果翠雀在民间作为跌打损伤、止血镇痛草药应用，但对其作用机制尚未见研究报道。本研究中阐明了光果翠雀止血的药理学基础是通过缩短PT和APTT来实现的。化学成分研究发现[2]，光果翠雀含淀粉量比较高，密度小，创伤外用易于铺展在出血伤口表面，止血作用良好，优于云南白药。破损皮肤刺激试验和毒性试验结果表明，光果翠雀外用安全，无皮肤刺激作用和明显的毒性反应。

小鼠灌胃的急性毒性作用研究显示，光果翠雀中毒潜伏期小于10 min，小鼠灌胃 LD50小于5 g/kg，中毒症状十分严重，重要脏器(肺)有损害，属于中药中有大毒者[5]。因此，民间口服应用时必须严格掌握剂量，否则容易引起中毒。另外还观察到，光果翠雀口服毒性大，而皮损皮肤为何未见明显毒性反应，可能是本研究中动物皮肤破损程度小，药物外用剂量小，故通过皮肤吸收的量不足以引起严重的毒性反应。如何使其毒性降低，而保留其良好的止血镇痛等药理作用，以及外用时为何毒性小等问题，值得进一步研究。8994670(电子信箱)gaishunfei@sina．com．cn。

[1]中国科学院植物研究所，中国医学科学院药物研究所．中国植物志(第 27卷)[M]．北京:科学出版社，1979:446 －447．

[2]杨雪华．光果翠雀的化学成分研究[D]．兰州:兰州大学，2008．

[3]费改顺，贾正平，乔树洲，等．光果翠雀的止血镇痛作用[J]．中国医院药学杂志，2010，30(11):898－900．

[4]王治乔，袁伯俊．新药临床前安全性评价与实践[M]．北京:军事医学科学出版社，1997:24，153－154．

[5]李仪奎．中药药理实验方法学[M]．上海:上海科技出版社，1996:1 003－1 004．