生血宝合剂中二苯乙烯苷的含量测定

高艳彬

(陕西省康复医院，陕西 西安 710038)

贫血属祖国医学的“血虚”“血枯”“血证”“虚劳”“虚损”等范畴[1]。生血宝是我国著名中医经验方，临床应用30余年。生血宝合剂由制何首乌、黄芪、女贞子、狗脊、白芍、桑葚、墨旱莲7味药材组方，功能养肝肾、益气血，用于恶性肿瘤放射治疗及化学治疗所致白细胞减少及神疲乏力、腰膝酸软、头晕耳鸣、心悸、气短、失眠、咽干、纳差食少等症。生血宝可促进铁的吸收利用、提高全血铁的含量，适用于治疗缺铁性贫血以及放射治疗、化学治疗所致白细胞减少[2－4]。何首乌为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thumb．的干燥块根[5]，秋、冬二季叶枯萎时采挖，削去两端，洗净，个大的切成块，干燥。制何首乌为何首乌的炮制加工品[6]，性味苦、甘、涩，温，归肝、心、肾经，功能补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨[7]，用于血虚萎黄、眩晕耳鸣、须发早白、腰膝酸软、肢体麻木、崩漏带下、久疟体虚，以及高血脂。本试验中，针对生血宝合剂中君药制何首乌的主要成分二苯乙烯苷(2，3，5，4’－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷)进行含量测定，为制订其相应的质量标准提供实验室依据。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters alliance高效液相色谱仪;紫外检测器。2，3，5，4’－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷(二苯乙烯苷)对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110825－200578);乙腈(色谱纯)，乙醇(分析纯);生血宝合剂(清华德人西安幸福制药有限公司)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Suntek Kromasil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 水(20 ∶80)，流速:1．0 mL/min;检测波长:320 nm;进样量:10 μL。理论板数不低于2 000。

2．2 溶液制备

由于样品为合剂，是由7味药材加水煎煮制成，考虑其制法，故对直接定容和超声提取时间进行了考察，结果表明超声提取时间与直接定容对含量影响不大(见表1)，考虑含量值及试验操作的简便性确定提取方法。精密量取样品2 mL，加稀乙醇定容至50 mL，摇匀，上清液滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取二苯乙烯苷对照品5．46 mg和6．25 mg，分别置100 mL容量瓶中，加稀乙醇使溶解质，定容，作为对照品溶液(质量浓度分别为54．6和62．5 μg/mL)。取阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

表1 样品提取方法考察结果

2．3 方法学考察

专属性试验:取2．2项下3种溶液，依法进样测定。结果阴性对照品溶液色谱中，在与对照品及供试品溶液色谱二苯乙烯苷相同保留时间处无相应色谱峰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液(54．6 μg/mL)1，2，5，10，15，20 μL，按拟订的色谱条件进样测定，以对照品进样量(μg)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=3 702 020．797 8 X －10 403．714 1，R2=0．999 9(n=6)。结果表明，二苯乙烯苷进样量在 0．054 60～1．092 00 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:取对照品溶液和供试品溶液，分别精密吸取10 μL，连续进样6次，按拟订色谱条件进行测定。结果对照品溶液和供试品溶液中二苯乙烯苷色谱峰峰面积的 RSD分别为0．41%和1．06%(n=6)，表明对照品溶液和供试品溶液进样精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为110303)溶液，分别在制备 0，2，4，8，12，24 h 时依法进样测定。结果样品峰面积分别为1 999 463，1 991 690，1 983 917，1 977 021，1 990 763，1 994 202，RSD=0．8%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验:对同一批样品(批号为110303)取样6份，依法制备供试品溶液并进样测定。结果二苯乙烯苷平均含量为1．38 g/L，RSD=0．8%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密量取已知含量的同一批样品(批号为110303)1 mL共6份，分别精密加入质量浓度为0．254 8 g/L的对照品溶液各5 mL，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，并按拟订的色谱条件进样测定含量，计算回收率。结果见表2。

2．4 样品含量测定

取10批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定含量。结果见表3。

3 讨论

取以流动相配制的对照品溶液，以流动相为空白，在200～400 nm波长范围内紫外扫描，结果二苯乙烯苷在318．4 nm波长处有最大吸收，故确定检测波长为320 nm[8]。

表2 二苯乙烯苷加样回收试验结果(n=6)

表3 样品中何首乌苷含量测定结果(n=10)

采用2010年版《中国药典(一部)》中二苯乙烯苷的流动相为乙腈－水(25∶75)[9]进行试验，结果在5 min之内出峰。由于出峰时间过早，故增大流动相的极性、减小乙腈的比例，最终将流动相定为乙腈－水(20∶80)。

生血宝合剂中制何首乌为君药，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨[10]等功效。因此选择何首乌中具有特征性的成分何首乌苷作为检测指标，同时采用具有较高专属性的高效液相色谱法作为检测方法，对该产品的质量控制具有很好现实意义。

采用高效液相色谱法测生血宝合剂中二苯乙烯苷的含量，方法简便、准确、干扰性小、重复性好，回收率也较高，所得结果比较准确，可作为药品标准提高的检测方法。

[1]张登本．中医学基础[M]．北京:中国中医药出版社，2003:48．

[2]高顺国，张俊伟，邱赛红，等．生血宝颗粒对缺铁性贫血大鼠模型铁吸收利用影响的实验研究[J]．上海中医药杂志，2005(8):56－58．

[3]罗 珊，漆兰萍，李若平．生血宝颗粒剂治疗放疗、化疗所致白细胞减少症[J]．湖南中医杂志，1994(8):23－24．

[4]吴青和．中药药理学[M]．北京:高等教育出版社，2007:177．

[5]康廷国．中药鉴定学[M]．第2版．北京:中国中医药出版社，2007:73．

[6]龚千锋．中药炮制学[M]．第2版．北京:中国中医药出版社，2007:275．

[7]高雪敏．中药学[M]．北京:中国中医药出版社，2007:225．

[8]蔡宝昌．中药制剂分析[M]．北京:高等教育出版社，2007:90．

[9]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:164．

[10]孙晋苓，黄晓兰，吴惠勤，等．何首乌中顺式和反式－二苯乙烯苷的HPLC/DAD/MS测定及其光稳定性考察[J]．中国药学杂志，2009，44(7):541－544．