不同产地何首乌药材的质量分析

李帅锋郑传柱张 丽兰才武贺定翔丁安伟

（1.南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心，江苏南京210023；2.贵州昌昊中药发展有限公司，贵州凯里556000）

不同产地何首乌药材的质量分析

李帅锋1郑传柱1张 丽1兰才武2贺定翔2丁安伟1

（1.南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心，江苏南京210023；2.贵州昌昊中药发展有限公司，贵州凯里556000）

目的：研究不同产地何首乌药材质量，为何首乌药材适宜产地的确立提供科学依据。方法：以何首乌主要含有的二苯乙烯苷和蒽醌类成分为指标，通过HCLP法进行含量测定并对测定结果运用matlab进行相关性及聚类分析，研究产地差异对何首乌药材质量的影响。结果：不同产地对何首乌各有效成分的含量影响较大，相关性分析表明不同产地何首乌药材中二苯乙烯苷与结合蒽醌类成分呈显著正相关性。聚类分析表明云南、贵州产何首乌质量较优。结论：不同产地何首乌有效成分的含量差异较大，故有必要建立不同地域药材质量标准，以确保何首乌临床合理、安全的用药。

何首乌 产地 高效液相色谱 二苯乙烯 蒽醌

何首乌（Polygoni Multiflori Radix，PMR）始载于《开宝本草》，为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根[1]，何首乌分布范围较广，主产于黄河以南、长江南北，如贵州、云南、广东、四川、湖南、河南等省[2]，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便之功效，用于疮痈、瘰疠、风疹瘙痒、久疟体虚、肠燥便秘等症[3]。研究表明，何首乌中二苯乙烯苷具有保护神经、改善记忆、保肝、抗氧化等作用[4-6]。何首乌中蒽醌类成分（主要包括大黄素、大黄素甲醚等）多具有抗菌、消炎、泻下、抗氧化等生物活性[7-8]，目前认为此两者是何首乌解毒、消痈、润肠通便的主要物质基础，且结合蒽醌泻下作用强于游离蒽醌[9]。作为目前何首乌质量控制的主要成分，2010年版《中国药典》中对上述两类成分均有含量测定要求。虽然有文献研究不同产地何首乌药材质量的差异，但是存在样品来源少，指标性成分少等问题[10-11]。因此，本研究在广泛收集样品的基础上，对18批不同产地何首乌进行质量评价，并运用matlab对测定结果进行相关性、聚类分析，以期为何首乌产地的优选提供依据。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪 （配 Waters 2998检测器，Empower色谱工作站）；FA1104N电子天平 （上海精密科学仪器有限公司）；分析天平（SARTORIUS AG；BP211D；d=0.01mg）；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；乙腈（色谱纯，购自德国 Merck公司）；其他试剂均为分析纯 （国药集团化学试剂有限公司）。

二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚对照品购自成都瑞芬思生物科技有限公司（批号:F-022-130512、D-029-130401、D-004-130315，纯度均大于98%）。何首乌样品由贵州昌昊中药发展有限公司提供，产地见表1，经南京中医药大学段金廒教授鉴定为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥块根。润湿切厚片，置于恒温干燥箱中50℃，16h烘干，粉碎，过四号筛，备用。

表1 何首乌样品来源

2 方法与结果

2.1 二苯乙烯苷含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含0.186mg的溶液，即得。

2.1.2 样品测定 取不同产地的何首乌样品粉末，按《中国药典》2010年版一部何首乌含量测定二苯乙烯苷项下的方法制备供试品溶液[3]，每个样品平行2份，并按《中国药典》2010年版一部何首乌含量测定二苯乙烯苷项下的色谱条件进行测定，每份平行测定2次，计算各样品中二苯乙烯苷的含量[3]，色谱图见图1，结果见表2。

2.2 结合蒽醌含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 取大黄素、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含54.2μg、18.8μg的溶液，即得。

2.2.2 样品测定 取不同产地的何首乌样品粉末，按《中国药典》2010年版一部何首乌含量测定结合蒽醌项下的方法制备供试品溶液，每个样品平行2份，并按《中国药典》2010年版一部何首乌含量测定方法结合蒽醌项下的色谱条件进行测定，每份平行测定2次，计算各样品中结合蒽醌的含量（结合蒽醌含量=总蒽醌-游离蒽醌）[3]，色谱图见图2，结果见表2。

2.3 相关性及主要成分分析 采用Matlab R2014a对18批不同产地何首乌样品中二苯乙烯苷，结合蒽醌、游离蒽醌进行两两相关性分析。结果见表3，提示何首乌中二苯乙烯苷和结合蒽醌呈显著正相关。

为了比较不同产地何首乌之间的差异，以何首乌中二苯乙烯苷和结合蒽醌类成分含量为指标，采用Matlab R2014a欧式距离对18份样品进行聚类分析。结果见图3。

图1 二苯乙烯苷对照品（A）和何首乌样品（B）HPLC图

图2 对照品（A）和何首乌样品（B）HPLC图（1-大黄素，2-大黄素甲醚）

表2 不同产地何首乌样品测定结果

表3 何首乌中主要化学成分相关性分析

图3 不同产地何首乌二苯乙烯苷结合蒽醌类聚类分析图

3 讨论

本实验表明，不同产地的何首乌样品中二苯乙烯苷的含量差异较大，但均达到药典要求，其中贵州、云南永胜县样品中含量较高；不同产地何首乌样品中结合蒽醌含量同样差异较大，其中湖南、广西、湖北三地样品含量低于药典要求。

由表2可以看出，样品3、4、5、6、8、9、10、15即贵州余庆、从江、榕江、都匀市和湖南省通道县、湖南省江华县、广西壮族自治区河池市、四川省阿坝州生产的何首乌中游离蒽醌含量大于结合蒽醌含量；同时由相关性分析可以得出不同产地的样品中结合蒽醌类成分与二苯乙烯苷含量具有显著正相关性，由于游离蒽醌具有抗菌、消炎、抗氧化等生物活性[7-8]，故仅仅选取二苯乙烯苷和结合蒽醌呈显著正相关的一类成分不足以来评价何首乌质量，可考虑把何首乌药材中游离蒽醌含量作为评价何首乌质量的一个标准。

由图3不同产地何首乌中二苯乙烯苷蒽醌类聚类分析结果可以看出，何首乌可以分为三类:云南省永胜县、贵州省瓮安县、贵州省普安县出产的为一类；贵州省凯里市、贵州省威宁县、贵州省余庆县、四川省北川县、四川省阿坝州出产者为第二类；其余产地出产者为第三类。

综上，产地对何首乌药材的质量影响较大，不同产地的何首乌有效成分含量存在较大差异，综合其中两类成分的含量以及聚类分析结果可以看出云南、贵州两地的何首乌质量较优，符合何首乌野生资源的道地区域分布[12]。由于产地对何首乌药材的质量影响较大，故有必要建立不同地域的何首乌的质量标准，以确保合理、安全用药。

[1] 岳清萍.何首乌与白首乌的鉴别.江苏中医药，2004，25（6）：51

[2] 陈亚，江滨，曾元儿，等.基于地理信息系统的何首乌地理分布及分布区的生境特征研究.中国药房，2011，22（39）：3726

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[4] 郑丽君，周芝文，杨杰.二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠TrkA及Bcl-2表达的影响.国际神经病学神经外科学杂志，2013，40（5-6）：412

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[6] 龙石银，张彩平，乔新惠，等.二苯乙烯苷对氧化诱导内皮细胞凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响.生物化学与生物物理进展，2011，38（11）：1052

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[11] 侯明月，李玮，王建科，等.不同产地加工方法对何首乌中二苯乙烯苷含量的影响.山地农业生物学报，2014，33（6）：90

[12] 陈亚.何首乌质量评价及产地适宜区划研究.广州：广州中医药大学，2013

R282.71

A

1672-397X（2015）08-0069-03

李帅锋（1988—），男，硕士研究生，研究方向：中药炮制与质量控制。

丁安伟，硕士，教授，博士研究生导师。awding105@163.com

2015-04-07

编辑：吴 宁

国家“十二五”科技支撑计划项目（2011BAI13B04）；贵州省中药现代化专项（黔科合中药字[2013]5059号）；江苏省中药资源产业化过程协同创新中心重点项目（ZDXM-1-3）