孕烷X受体应答元件萤光素酶报告基因的构建及活性检测

冯 帆，张 帆，司 文,3，高旭东，王春平，杨予涛，杨俊兰，杨永平，史国兵

1沈阳军区总医院 药剂科，辽宁沈阳 110016；2解放军总医院 肿瘤内科，北京 100853；3南开大学医学院，天津 300192；4解放军第302医院 肝脏肿瘤诊疗与研究中心，北京 100039；5首都医科大学神经科学研究所，北京 100071

孕烷X受体应答元件萤光素酶报告基因的构建及活性检测

冯 帆1，张 帆2，司 文2,3，高旭东4，王春平4，杨予涛5，杨俊兰2，杨永平4，史国兵1

1沈阳军区总医院 药剂科，辽宁沈阳 110016；2解放军总医院 肿瘤内科，北京 100853；3南开大学医学院，天津 300192；4解放军第302医院 肝脏肿瘤诊疗与研究中心，北京 100039；5首都医科大学神经科学研究所，北京 100071

目的建立孕烷X受体(pregnane X receptor，PXR)应答元件萤光素酶报告基因，并检测其活性。方法利用化学合成方法得到五聚体PXR应答元件(everted repeat elelment-6，ER-6元件)5和(direct repeat element-3，DR-3)5序列；将五聚体PXR应答元件序列(ER6或DR3)克隆至pGL3-Promoter载体上；利用萤光素酶报告基因系统检测PXR应答元件报告基因的活性。结果PXR应答元件萤光素酶报告基因具有明确的活性。PXR激动剂茴香霉素能够剂量依赖地诱导ER6-Luc (R2=0.95；P=0.002 2)和DR3-Luc (R2=0.96；P=0.000 91)报告基因的活性，其EC50值分别为(0.11±0.04)μmol/L和(0.13±0.06) μmol/L；PXR拮抗剂酮康唑能够剂量依赖地降低茴香霉素诱导的ER6-Luc (R2=0.97；P=0.000 85)和DR3-Luc (R2=0.98；P=0.000 11)的活性，IC50值分别为(0.71±0.11)μmol/L和(1.73±0.15)μmol/L。结论成功构建了PXR应答元件报告基因，建立了PXR转录活性的检测方法。

孕烷X受体；孕烷X受体应答元件；萤光素酶报告基因；转录活性；

孕烷X受体(pregnane X receptor，PXR)是一种重要的核受体，最初仅被确定为类固醇激素受体[1-6]。PXR在消化系统肿瘤中分布广泛，其结构由N-末端结构域(N-terminal domain，N-TD)、保守的DNA结合区(DNA-binding domain，DBD)、C-末端的配体结合区(ligand binding domain，LBD)组成。PXR的LBD结构高度可变，这保证了其广谱的配体结合/应答范围[6]。……