血清HE4在子宫内膜癌中的表达及临床意义

丁金旺，周国明，王克义，叶柳青，周建松，樊 璠，于爱军

(1.杭州市第一人民医院，浙江 杭州310006；2.浙江省肿瘤医院，浙江 杭州310022)

血清HE4在子宫内膜癌中的表达及临床意义

丁金旺1，周国明2，王克义1，叶柳青2，周建松2，樊 璠2，于爱军2

(1.杭州市第一人民医院，浙江 杭州310006；2.浙江省肿瘤医院，浙江 杭州310022)

目的 探讨血清人附睾蛋白4(HE4)在子宫内膜癌患者中的表达情况以及与临床特点和病理学特征的关系。方法 采用ELISA法检测并比较266例子宫内膜癌患者、204例子宫良性疾病患者及100例健康女性血清中HE4的表达差异，分析血清HE4与子宫内膜癌患者年龄、月经状态、病理学类型、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度、国际妇产科联盟(FIGO)分期以及疗效的相关性。结果 研究组266例子宫内膜癌患者血清HE4的表达水平为85.63(60.98～125.78)pmol/L，明显高于正常对照组56.05(50.30～63.50)pmol/L(Z=-8.257，P<0.001)及对照组的59.52(50.11～71.09)pmol/L(Z=-8.865，P<0.001)；而在正常对照组与对照组之间，血清HE4的表达比较差异并无统计学意义(Z=-1.458，P>0.05)。研究组中，血清HE4水平在不同患者年龄、月经状态、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度以及FIGO分期等方面比较，差异均有统计学意义(Z值分别为-3.849、-3.099、-5.279、-7.763、-5.704、-5.855，均P<0.01)；而在肿瘤的组织病理学类型方面比较差异无统计学意义(Z=5.086，P>0.05)。有198例子宫内膜癌患者术前的血清HE4水平为87.24(62.65～129.95)pmol/L，显著高于术后血清HE4水平65.38(51.58～82.01)pmol/L，差异有统计学意义(Z=-7.833，P<0.001)。结论 血清HE4水平在子宫内膜癌患者中高表达，且与年龄、月经状态、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度、FIGO分期及疗效相关，提示血清HE4可以作为子宫内膜癌临床诊断、疗效评价、预后判断及随访监测的分子标记物。

子宫内膜癌；血清；人附睾蛋白4；酶联免疫吸附试验；分子标记物

子宫内膜癌是女性三大生殖器官恶性肿瘤之一，在欧美的发病率占妇科恶性肿瘤的第1位[1]。近年来，国内子宫内膜癌的发病率也明显上升，并呈年轻化趋势，有些地区已超过宫颈癌而跃居女性生殖系统恶性肿瘤首位。早期子宫内膜癌虽然预后较好，但一直缺乏有效的早期筛查及后期监测的肿瘤指标。人附睾蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)是近年发现的一种新型分子标志物，在正常组织及良性病变中不表达或低表达，但在妇科恶性肿瘤(如卵巢癌)中呈明显高表达，目前血清HE4已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准广泛应用于卵巢癌的早期筛查及鉴别诊断[2-4]。近年来的研究发现，子宫内膜癌患者也存在HE4高表达，并且可能与子宫内膜癌的发生、发展存在密切关系[5-10]。本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测并比较266例子宫内膜癌、204例子宫良性疾病患者及100例健康女性血清中HE4的表达水平，并分析HE4与子宫内膜癌临床特点和病理学特征的关系，以进一步探究血清HE4在子宫内膜癌中的临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2011年1月至2013年5月在浙江省肿瘤医院住院并经组织病理证实的266例子宫内膜癌患者为研究组，年龄15～78岁，平均年龄(51.42±8.44)岁，绝经者占53%(141/266)。按照2009年国际妇产科联盟(FIGO)大会临床分期标准将患者分为：Ⅰ期174例，Ⅱ期32例，Ⅲ期42例，复发或转移(Ⅳ期)18例。组织学类型包括：子宫内膜样腺癌190例，子宫内膜样腺癌伴鳞化46例，恶性苗勒混合瘤12例，浆液性腺癌9例，透明细胞癌9例。选择同期子宫良性疾病患者204例作为对照组，年龄22～75岁，平均年龄(49.29±7.29)岁，绝经者占49%(100/204)；其中包括：子宫平滑肌瘤120例，子宫腺肌症54例，子宫内膜息肉17例，子宫内膜不典型增生13例。选取100例健康女性作为正常对照组，年龄22～76岁，平均年龄(49.15±14.35)岁，绝经者占50%(50/100)。所有入选者均己排除子宫之外其他器官肿瘤病史。所有研究内容均获得患者本人或者知情照料者同意。

1.2 方法

1.2.1 血清标本的收集与保存

采集患者首次治疗(手术或化疗)前空腹静脉血4mL于血清分离管内，室温静置1h完全凝固，3 000rpm离心15min后分离血清，置于-70℃超低温冰箱保存备用。

1.2.2 血清人附睾蛋白4的检测试剂与方法

采用ELISA检测血清HE4含量，检测试剂盒由瑞典康乃格诊断公司(Fujirebio Diagnostics，Inc.，Goteborg, Sweden)提供，浓度单位pmo/L。采用美国伯乐公司CODA酶标分析仪比色。本研究采取盲法、复孔检测，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行检测。

1.3 统计学方法

应用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。因研究数据均呈偏态分布，故采用中位数及四分位数描述，组间两两比较进行Wilcoxon秩和检验，3组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验，相关性分析采用Spearman检验，手术前后血清HE4的变化采用配对样本的Wilcoxon检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清人附睾蛋白4在各组人群中的表达差异

经Wilcoxon秩和检验，研究组266例子宫内膜癌患者血清HE4的表达水平明显高于正常对照组(Z=-8.257，P<0.001)及对照组(Z=-8.865，P<0.001)；而在正常对照组与对照组之间血清HE4的表达差异并无统计学意义(Z=-1.458，P=0.145>0.05)，见表1。

表1 子宫良、恶性疾病患者及健康女性血清HE4表达水平的比较

Table 1 Comparison of serum HE4 levels among different groups

组别例数(n)HE4(pmol/L)中位数(范围)研究组26685.63(60.98～125.78)对照组20459.52(50.11～71.09)正常对照组10056.05(50.30～63.50)

2.2 血清人附睾蛋白4表达水平与子宫内膜癌临床病理特征的相关性

血清HE4水平在年龄≤60岁者与>60岁者、绝经前与绝经后的子宫内膜癌患者中差异均有统计学意义(Z值分别为-3.849、-3.099，均P<0.01)；但子宫内膜癌患者血清HE4表达水平在各种病理学类型之间差异未见统计学意义(Z=5.086，P>0.05)。与组织学G1～G2级患者相比，组织学G3级的子宫内膜癌患者血清HE4含量显著增高，差异有统计学意义(Z=-5.279，P<0.01)。伴有淋巴结转移及深肌层浸润(>1/2肌层)者血清HE4水平显著高于无淋巴结转移及不伴有深肌层浸润(≤1/2肌层)者，差异均有统计学意义(Z值分别为-5.704、-7.763，均P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ期患者血清HE4表达水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异也有统计学意义(Z=-5.855，P<0.01)。Spearman相关分析显示，血清HE4表达水平与FIGO分期显著相关(r=0.498，P=0.000)。以上结果表明，子宫内膜癌患者血清HE4水平与年龄、月经、组织学分级、淋巴结转移、肌层侵润深度及FIGO分期密切相关，但与病理类型无关，见表2。

表2 血清HE4的表达水平与子宫内膜癌临床特点和病理学特征的关系

Table 2 Correlation between serum HE4 level and clinicopathological characteristics in endometrial carcinoma

注：(1)Wilcoxon秩和检验；(2)Kruskal-Wallis秩和检验。

2.3 血清人附睾蛋白4表达水平在子宫内膜癌手术前后的变化情况

本组研究266例子宫内膜癌患者中有198例同时检测了手术前、后血清HE4的表达水平，经配对样本的Wilcoxon非参数检验发现，子宫内膜癌患者术后血清HE4水平[65.38(51.58～82.01)pmol/L]显著低于术前水平[87.24(62.65～129.95)pmol/L]，差异有统计学意义(Z=-5.846，P=0.000)，见表3。

表3 198例子宫内膜癌患者手术前后血清HE4表达水平变化

Table 3 Pre- and post-operative serum expression levels of HE4 in 198 endometrial cancer patients

注：(1)Wilcoxon秩和检验。

3 讨论

3.1 人附睾蛋白4在子宫内膜癌中的表达分析

HE4属于抑蛋白酶基因家族，定位于染色体20q12-13.1，编码一种与精子成熟相关的小分子分泌蛋白[4]。HE4 cDNA最早是由Kirchhoff等于1991年从人的附睾上皮细胞中发现的，进一步的研究发现其主要分布于包括附睾在内的生殖系统上皮，如输精管上皮、输卵管上皮和子宫内膜等组织[5]。研究显示，HE4在多种恶性肿瘤，如浆液性卵巢癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌等组织中高表达。大量研究表明，HE4在识别卵巢癌的早期阶段具有很高的灵敏度和特异度，因此国外许多国家已将HE4作为卵巢癌早期筛查的最佳指标[2-4]。Bignotti等[5]研究结果证实，子宫内膜癌组织中同样也存在HE4基因扩增和蛋白高表达，随后的研究还显示子宫内膜癌患者血清HE4水平明显升高，并且发现在相同的特异度下，血清HE4较CA125具有更高的敏感性。本研究采用ELISA法检测266例子宫内膜癌患者、204例子宫良性疾病患者及100例健康女性血清中的HE4水平，结果表明子宫内膜癌患者血清HE4含量显著高于对照组和正常对照组(均P=0.000)，与国外研究类似[4，6]。因此推测HE4与子宫内膜癌的发病相关，这也提示HE4有望成为子宫内膜癌的血清标志物。

3.2 血清人附睾蛋白4与子宫内膜癌临床病理特征的关系

本研究中发现，血清HE4水平在年龄>60岁及绝经后的子宫内膜癌患者中显著高于年龄≤60岁及未绝经者(P<0.01)，并且在不同子宫内膜癌患者组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度以及FIGO分期等方面比较，血清HE4差异也均有统计学意义(均P<0.01)，与Antonsen等[7]及Bignotti等[5]研究结论一致。经Spearman相关分析显示，血清HE4表达水平与FIGO分期显著相关(r=0.498，P=0.000)，这提示血清HE4表达水平能预测子宫内膜癌患者的分期状况。另外，本研究显示子宫内膜癌患者血清HE4表达水平在各种病理学类型之间差异并无统计学意义(P>0.05)，这表明子宫内膜癌患者高水平HE4与患者高龄、绝经、分化程度低、淋巴结转移、深肌层浸润以及FIGO分期晚等临床病理特征密切相关，而与组织病理无关。最新的两项研究通过多因素分析发现，高水平的血清HE4是子宫内膜癌患者较低的总生存、无瘤生存以及肿瘤无进展生存等不良预后的独立因素[8-9]。Li等[10]最近利用转染及克隆技术已经在子宫内膜癌细胞系及移植瘤小鼠模型中证实了高水平表达的HE4不仅介导子宫内膜癌的形成，而且直接促进肿瘤生长、基质(肌层)浸润及疾病进展。在复发转移监测方面，有研究也表明，在复发转移的卵巢癌患者中血清HE4比CA125提前5～8个月出现异常表达，HE4可作为很好地预测卵巢癌复发的指标[11]。Saarelainen等[12]研究发现，联合检测血清HE4和CA125对转移性子宫内膜癌诊断的敏感性、特异性分别达71.4%和89.5%。因此推断，血清HE4表达水平不仅可以反映疾病的进展情况，还可以作为子宫内膜癌预后判断及随访监测的重要指标之一。

3.3 血清人附睾蛋白4对子宫内膜癌手术疗效评估的价值

有研究证实，HE4水平在子宫内膜癌治疗后可明显降低[13]。本研究结果提示，198例子宫内膜癌患者术后血清HE4水平为65.38(51.58～82.01)pmol/L，显著低于术前水平的87.24(62.65～129.95)pmol/L，差异有统计学意义(P=0.000)，支持以往研究的结论，提示血清HE4水平亦有助于判断手术效果及检测病情是否进展。

总之，通过本次研究认为，血清HE4的检测对子宫内膜癌的早期诊断、疗效评估、预后判断以及随访监测方面具有一定的价值，血清HE4可作为子宫内膜癌的肿瘤标志物。

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[专业责任编辑：张欣文]

Expression of serum HE4 in endometrial carcinoma and its clinic significance

DING Jin-wang1, ZHOU Guo-ming2, WANG Ke-yi1, YE Liu-qing2, ZHOU Jian-song2, FAN Fan2, YU Ai-jun2

(1.HangzhouFirstPeople’sHospital,ZhejiangHangzhou310006,China; 2.ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China)

Objective To investigate the expression of serum human epididymis protein 4 (HE4) in endometrial cancer patients and its relationship with clinical and pathological characteristics. Methods The serum HE4 levels were detected by Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and compared among 100 healthy women, 204 patients with benign uterus diseases of uterus and 266 patients with histologically confirmed endometrial carcinoma. The correlation between expression of serum HE4 and clinicpathological characteristics (age, menstruation status, histopathology, tumor grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion, FIGO stage) and therapeutic effect was also evaluated. Results The concentration of serum HE4 was 85.63 (60.98-125.78)pmol/L in patients with endometrial cancer, which was significantly higher than that in healthy women[56.05 (50.30-63.50)pmol/L,Z=-8.257,P<0.001] and benign lesion group[59.52 (50.11-71.09)pmol/L,Z=-8.865,P<0.001], but the difference was not significant between healthy group and benign lesion group (Z=-1.458,P>0.05). In endometrial cancer group, the expression of serum HE4 was not associated with the type of histopathology (Z=5.086,P>0.05), but it was positively correlated with age, menstruation status, tumor grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion and FIGO stage (Zvalue was -3.849, -3.099, -5.279, -7.763, -5.704 and -5.855, respectively, allP<0.01). Furthermore, the postoperative level of serum HE4 [65.38 (51.58-82.01)] in 198 cases of endometrial cancer was significantly lower than preoperative level [87.24 (62.65-129.95)] (Z=-7.833,P<0.001). Conclusion The serum HE4 is over-expressed in endometrial carcinoma, and its concentration significantly correlates with age, menstruation status, histological grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion, FIGO stage and treatment effect, which indicates that serum HE4 may serve as a biomarker for endometrial carcinoma and has significant application in diagnosis, therapeutic evaluation, prognostic prediction and postoperative surveillance.

endometrial carcinoma；serum；human epididymis protein 4 (HE4)；enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)；biomarker

2014-09-30

丁金旺(1983-)，男，主治医师，肿瘤学硕士，主要从事常见肿瘤的早期诊断与治疗工作。

于爱军，主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.03.024

R711

A

1673-5293(2015)03-0471-03