环氧化酶2及癌胚抗原在结肠癌分子病理研究中的作用研究

赵其辉苏 坚罗春艳

（1 湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳 421005；2 南华大学附属第二医院，湖南 衡阳 421001）

环氧化酶2及癌胚抗原在结肠癌分子病理研究中的作用研究

赵其辉1苏 坚2罗春艳1

（1 湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳 421005；2 南华大学附属第二医院，湖南 衡阳 421001）

目的研究环氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）在结肠癌分子病理研究中的作用。方法随机选取2010年5月至2012年7月我院收治的46例结肠癌根治术患者的组织标本作为研究对象，同时收集新鲜结肠癌组织远、近端癌旁1、2、3 cm的肠壁组织以及与肿瘤相距约8 cm正常肠壁组织，采用RT-PCR技术检测环氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）与上述组织之间的表达情况。结果46例患者中肿瘤远、近端3 cm处肠壁病理切缘均呈现阴性；近端癌旁1、2、3 cm肠壁组织以及到距离肿瘤8 cm正常结肠组织之间具有递减趋势；近端、远端3 cm处CEAmRNA与COX-2mREA并没有肿瘤组织表达的明显，差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）；同比正常组织，差异不明显，无统计学意义（P＞0.05）。结论临床可选择COX-2、CEA作为结肠癌分子边缘研究的分子标志物，二者具有一定的研究价值。

环氧化酶2；结肠癌分子；癌胚抗原；病理研究

随着科学技术水平的不断发展，医疗卫生事业也得到了前所未有的跨步。目前，临床方面视为判断恶性肿瘤金标准的是组织病理学，且伴随着分子生物技术的快速发展，绝大多数的医学研究者希望从分子的角度去研究和分析肿瘤契机周围组织的肿瘤浸润情况，以便提高肿瘤疾病的治疗效率[1-2]，但是，截止到目前，针对结肠癌分子边缘的研究没有确切的定论。本文随机选取2010年5月至2012年7月我院收治的46例结肠癌根治术患者的组织标本作为研究对象，现将具体的研究结果作如下汇报。

1 资料与方法

1.1 一般资料：随机选取2010年5月至2012年7月我院收治的46例结肠癌根治术患者的组织标本作为研究对象，所有患者均经手术、病理学检查确诊为结肠癌，且术前均未经过任何其他辅助治疗。其中男性患者30例，女性患者16例，患者年龄30～80岁，平均年龄（29.5±7.5）岁。按照组织病理学划分：其中黏液腺癌5例，低分化腺癌11例，中分化腺癌13例，高分化腺癌17例；按照TNM分期，其中Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期16例，Ⅳ期8例。

1.2 研究方法

1.2.1 制备标本：取新鲜结肠癌手术标本时，沿其肠管纵轴行切开术，采用氯化钠（0.9%）溶液冲洗之后，以适量的力量牵拉肠壁，确保肠管伸展度与体内形成一致的标准；于肿瘤中心组织处取一块，以肿瘤边缘为起始点，分别向肿瘤远端、近端的肠端从肿瘤边缘起，每间隔1 cm即切取宽度约为0.3 cm全层肠壁组织，直至结肠癌肿近端、远端3 cm处，逐一取肿瘤组织、近端1、2、3 cm的组织和近端1、2、3 cm组织标本，距肿瘤8 cm正常肠壁组织也需要选取，共计8处标本。将一部分标本快速放置在冰袋预冷的-80 ℃冷冻管之中保存；另一部分采用甲醛（10%）固定，并送往病理科进行苏木精-伊红染色。

1.2.2 试验方法：按照试剂盒的使用说明书提取组织RNA，进行反转录；采用TapDNA聚合酶说明书行目的基因拓展；反应条件：50 ℃需30 min、90 ℃需10 min；94 ℃需45 s、60 ℃需45 s（CEA需要55 ℃）、72 ℃需1 min，35个循环；延伸72 ℃需10 min。采用琼脂糖凝胶电泳RT-PCR产物，并将凝胶成像分析系统按照密度扫描分析，采用COX-2的扩增产物条带灰度值、特定产物CEA以及看见基因β-actin条带灰度值作为CEAmREA、COX-2 mREA的表达水平。计算方法如下：相对系数（表达强度）与β-actin表达强度的比值。

1.3 统计学分析：试验数据均采用SPSS17.0软件进行统计分析，计量资料应用平均值±标准差（），计量资料比较行t检验，计数资料行χ2检验，若P＜0.05则表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 结肠癌及癌旁组织光镜观察结果：46例患者中肿瘤远、近端3 cm处肠壁病理切缘均呈现阴性；经病理检查，距肿瘤1、2 cm的远端肠壁组织病理阳性率分别是41.3%、15.2%。距肿瘤1、2 cm的近端肠壁组织病理阳性率分别是34.8%、8.7%。

2.2 肿瘤组织与其癌旁组织COX-2、CEA的RT-PCR检测结果：肿瘤组织以及不同距离肿瘤切缘组织CEAmRNA、COX-2mRNA所表达的阳性率会随着逐渐远离肿瘤，使位于各切缘位点两指标表达阳性率降低，见表1。

3 讨 论

自20世纪初，相关学者第一次提出“分子切缘”的概念后，对分子水平进行手术切缘的研究也在不断的发展。就目前而言，国内外对COX-2、CEA和结肠癌分子边缘之间的关系还有待进一步研究[3-4]。

通过研究发现，CEA和COX-2在结肠癌组织中的阳性表达率都超过了80%以上。因此，在临床方面，可以将二者作为分子标志物进行研究，以此作为评价结肠癌边缘安全性的依据[5-6]。

在本次试验中，46例患者中肿瘤远、近端3 cm处肠壁病理切缘均呈现阴性；近端癌旁1、2、3 cm肠壁组织以及到距离肿瘤8 cm正常结肠组织之间具有递减趋势；近端、远端3 cm处CEAmRNA与COX-2 mREA并没有肿瘤组织明显，差异显著；同比正常组织，差异不明显。由此可见，临床可选择COX-2、CEA作为结肠癌分子边缘研究的分子标志物，二者具有一定的研究价值。

表1 分析结肠癌组织和不同距离边缘癌旁组织CEA和COX-2的半定量

[1]钟华,廖爱军,刘迪群,等.环氧化酶-2与大肠癌侵袭及转移的关系[J].临床医学,2012,32(4):4-5.

[2]杨晓东,邢春根,赵志东,等.环氧化酶2和癌胚抗原在结肠癌分子病理研究中的作用[J].中华胃肠外科杂志,2011,14(10):807-809.

[3]陈志康,欧阳植庭.癌胚抗原和环氧化酶2的表达与结直肠癌的关系[J].癌症,2003,22(2):164-167.

[4]王爱娥,董书魁,王清娟,等.癌胚抗原在结直肠癌早期诊断和预后评估中的意义及其最新研究进展[J].中国临床康复,2004,8(32):7265-7267.

[5]陈志康,欧阳植庭.E-钙黏素和环氧化酶-2与结直肠癌的关系[J].实用癌症杂志,2002,17(5):490-492.

[6]李红霞,郭秦乐,周博,等.陕西人群环氧化酶-2(COX-2)启动子区基因多态性及与结直肠癌易感性的关联研究[J].西安交通大学学报(医学版),2014,35(4):522-550.

R735.3+5

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1671-8194（2015）07-0131-02