分化抑制蛋白-1在套细胞淋巴瘤中的表达及预后关系



分化抑制蛋白-1在套细胞淋巴瘤中的表达及预后关系

任明强1，谭天海1，苏俊2，葛金丽3

(1.遵义医学院附属医院 血液科，贵州 遵义563099；2.遵义医学院附属医院 病理科， 贵州 遵义563099；3. 遵义医学院第三附属医院 血液科，贵州 遵义563003)

[摘要]目的 探讨分化抑制蛋白-1(Inhibitor of differentiation-1, Id1)在套细胞淋巴瘤患者中的表达情况及其临床意义。方法 采用SP免疫组化法检测并分析45例套细胞淋巴瘤和20例淋巴结反应性增生淋巴结组织中Id1表达水平，以及Id1的表达与其临床预后指标的关系。结果 Id1在套细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生淋巴结组织中阴性、弱阳性和强阳性的表达率分别是15.56%，31.11%，53.33%和65.00%，25.00%，10.00%(P<0.05)。套细胞淋巴瘤组织中Id1阳性表达与患者LDH、临床分期、结外累及部位和近期疗效有关(P均<0.05)；年龄、性别、WBC计数、PLT计数、HB含量无相关(P均>0.05)。经过Log-rank检验显示，Id1低表达组和Id1高表达组的1年生存率分别是90.48%和79.17%(P>0.05)；3年生存率分别是66.67%和33.33%(P<0.05)；5年生存率分别是47.62%和16.67%(P<0.05)，Kaplan-Meier生存分析显示Id1高表达组3年、5年生存率低于Id1低表达组(P<0.05)。结论 Id1在套细胞淋巴瘤淋巴结中呈高表达，并与部分预后相关指标有关，Id1高表达组表现出低生存率，Id1可能成为套细胞淋巴瘤预后不良的评价指标。

[关键词]套细胞淋巴瘤；淋巴结反应性增生；分化抑制蛋白-1

套细胞淋巴瘤是一种富有侵袭性和预后差的B细胞非霍奇金淋巴瘤，约占非霍奇金淋巴瘤的5%，平均生存率为2～3年[1]。目前绝大部分套细胞淋巴瘤患者治疗效果依旧不理想，然而又缺乏特异相关肯定的预后指标指导治疗。分化抑制蛋白1(Inhibitor of differentiation/DNA binding-1,Id1)作为碱性螺旋-环-螺旋(Helix-Loop-Helix,HLH)蛋白的亚家族成员之一，研究发现Id1高表达和乳腺癌、肺癌等预后相关。然而国内外还缺乏Id1对套细胞淋巴瘤的相关研究。因此，本研究对45例套细胞淋巴瘤和20例淋巴结反应性增生的组织Id1表达情况进行分析，探讨在套细胞淋巴瘤患者中的Id1表达情况及其临床意义。

1材料与方法

1.1组织标本采集选取2004年1月至2012年5月遵义医学院附属医院、遵义医院血液内科及肿瘤科住院患者，套细胞淋巴瘤45例为实验组，其中男性28例，女性17例，年龄范围18～61岁，中位年龄46岁，临床分期根据Ann Arbor-Colswolds分期标准，Ⅰ期、Ⅱ期共16例和Ⅲ期、Ⅳ期共29例，均为淋巴结内原发病变。另取同时期淋巴结反应性增生(RH)的初治患者20例为对照组，男性12例，女性8例，年龄范围25～58岁，中位年龄42岁。诊断标准符合《张之南血液病诊断及疗效标准》(第3版)，所有患者均活检淋巴结组织，并对标本制作石蜡冰冻切片保存。

1.2实验材料与方法将石蜡标本包埋并制作2 μm连续病理切片，按照免疫组织化学染色说明书中的方法进行染色。DAB试剂盒和SP染色试剂盒均从重庆生物制品有限公司购买，兔克隆Id1单克隆抗体购自aviva systems biology 公司(武汉)，由两位病理医生进行双盲阅片，结果取平均值。免疫组化结果判定标准：采用半定量对Id1进行分析，按阳性细胞的染色强度记分等级为0分(阴性)、1分(弱阳性)、2分(中度阳性)和3分(强阳性)；按染色阳性细胞百分比记分等级为0分(<10%细胞阳性)、1分(10%～25%细胞阳性)、2分(26%～50%细胞阳性)、3分(51%～75%细胞阳性)、4分(>75%细胞阳性)；将染色强度和染色百分比相乘得到的分数即为最后染色水平分级：0分定义为阴性，1～6分定义为弱阳性，8～12分定义为强阳性。

1.3分组将45例套细胞淋巴瘤和20例淋巴结反应性增生的患者分为实验组和对照组。将套细胞淋巴瘤Id1表达为阴性和弱阳性的患者划分为Id1低表达组，Id1表达为强阳性的患者划分为Id1高表达组。

1.4研究内容分析套细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生患者中Id1表达情况，分析套细胞淋巴瘤患者年龄、性别、WBC、PLT、HB、LDH、临床分期、结外累及部位和近期疗效与Id1表达强度的关系，并对套细胞淋巴瘤患者进行3～5年随访，分析Id1表达强度和远期预后的关系。套细胞淋巴瘤患者在经标准CHOP治疗4～6疗程后判断疗效，第1年每3月进行一次随访，第2年以后每6个月进行一次随访，以1、3 、5 年的总生存率为远期预后评价指标，并绘制两组患者的生存曲线，比较两组患者的远期预后疗效。

1.5统计学分析本临床研究的所有数据采用SPSS16.0软件进行统计学分析，对计数资料采用2检验，两组生存资料采取Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，采用Log-rank检验分析组间差异。当P<0.05时，认为差异性具有统计学意义。

2结果

2.1Id1在套细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生患者中的表达45例套细胞淋巴瘤患者中Id1表达强度为阴性、弱阳性和强阳性的比例分别是15.56%、28.89%和51.11%；20例淋巴结反应性增生患者中Id1表达强度为阴性、弱阳性和强阳性的比例分别是65.0%、25.0%和10.0%；两组间差异具有统计学意义(P<0.05，见表1、图1)。阳性表达定位于细胞膜、细胞浆。表1Id1在套细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生患者中的表达

组织标本例数Id1表达强度阴性弱阳性强阳性套细胞淋巴瘤457(15.56%)14(31.11%)24(53.33%)淋巴结反应性增生2013(65.00%)5(25.00%)2(10.00%)

与淋巴结反应性增生患者比较，P<0.001。

A:Id1蛋白在套细胞淋巴瘤中的表达,强阳性；B：Id1蛋白在淋巴结反应性增生中的表达,弱阳性。　　图1　Id1在套细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生患者中的表达( ×400)

2.2Id表达与临床特征的关系Idl表达水平与

套细胞淋巴瘤患者年龄、性别、WBC、PLT、HB无相关(P均>0.05)，与患者LDH、临床分期、结外累及部位和近期疗效有关(P均<0.05，见表2)。

2.3套细胞淋巴瘤患者Idl表达与生存预后的关系经过Log-rank检验显示，套细胞淋巴瘤淋巴结患者Id1低表达组和高表达组1年生存率分别是90.48%和79.17%，差异无统计学意义(P=0.267)；3年生存率分别是66.67%和33.33%(P=0.026)，5年生存率分别是47.62%和16.67%(P=0.027)，两组3年、5年生存率差异具有统计学意义(见表3)，同时绘制两组Kaplan-Meier图(见图2)，两组生存率有统计学差异(P=0.013)。

表2套细胞淋巴瘤患者中Id1表达与临床特征的关系

病理指标例数Id1表达强度阴性弱阳性强阳性P年龄(岁)714240.273≥6021579<60242715性别0.444男2831015女17449WBC0.717≥10×109/L192611<10×109/L265813PLT0.892≥100×109/L244812<100×109/L213612HB0.935≥120g/L18369<120g/L274815LDH0.002正常17674升高281720临床分期0.038I-II16565III-IV292819淋巴结外累及器官0.006无14563有312821疗效0.006≤PR151113>PR3061311

PR：部分缓解。

表3两组不同Idl表达套细胞淋巴瘤患者总生存率(%)

组别例数总生存率1年2年3年Id1低表达组2119(90.48%)14(66.67%)10(47.62%)Id1高表达组2419(79.17%)8(33.33%)4(16.67%)P0.2670.0260.027

图2　两组Idl不同表达套细胞淋巴瘤患者总生存曲线

3讨论

套细胞淋巴瘤(MCL)是一种起源于淋巴结滤泡区的小B细胞淋巴瘤，以t(11;14)(q13;q32)易位和CD5、cyclinD1和SOX11阳性为特征[2]。MCL具有化疗敏感性低、生存期短、易复发等特点，比其他形态类似的淋巴瘤预后差。MCL多数患者诊断时已为Ⅲ或Ⅳ期，常伴有骨髓及结外器官的浸润。MCL在淋巴瘤治疗领域中依旧是一个难题，标准R-CHOP方案化疗疗效不令人满意，存在无法治愈，容易复发，长期生存率低等问题。故探索与MCL疾病进展、预后疗效等密切相关的新分子标志十分必要。

分化抑制蛋白简称Id类蛋白，属于HLH反式作用因子家族，Id抑制HLH与DNA及其他组织特异性HLH转录因子结合，对HLH转录因子活性起负调节作用，从而抑制细胞分化。Id1蛋白是一种与致癌性及细胞恶性生长相关的蛋白，有类原癌基因的功能，可以刺激DNA合成，促进细胞由G 期向S期转化[3]，在正常组织低表达或不表达，在多种肿瘤(乳腺癌、神经胶质瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌、肝癌、急性髓系白血病等)中存在高表达，并且是不良预后指标[4-7]。

目前暂缺乏套细胞淋巴瘤(MCL)中Id1表达研究的报道，MCL预后与治疗反应受多种因素影响，Hoster等根据患者白细胞计数、体能状态评分(ECOG)、LDH水平及年龄4个危险因素进行评估评价MCL预后情况[8]。在本研究中，采用免疫组化法对45例MCL和20淋巴结反应性增生的患者Id1表达情况进行检测，发现在MCL中Id1呈显著高表达，弱阳性率和强阳性率分别是31.11%和53.33%，在淋巴结反应性增生中弱阳性率和强阳性率分别只有25.00%和10.00%，结果显示Id1在MCL中的表达显著高于淋巴结反应性增生(P<0.05)。在国内研究发现Id1在肝癌、甲状腺乳头状癌中阳性表达率也显著增高[9-10]，进一步分析ID1表达与临床预后、疗效等因素间关系，表明MCL患者Idl表达与WBC、年龄、性别、PLT、HB无相关(P均>0.05)，与患者LDH、临床分期、结外累及部位和近期疗效有关(P均<0.05)，表明高表达ID1的MCL侵袭性强、危险度高、病情易进展、近期治疗反应差。分析ID1作用机制与以下有关[11- 12]：①Id1通过影响细胞周期、激活MAPK信号途径、下调p16INK4a和增加pRB磷酸化阻断pRB/ p16INK4a途径，使Id1诱导癌细胞增殖；②ID1基因在肿瘤细胞内的持续表达明显抑制了细胞的分化，促进了肿瘤细胞的增殖；③ID1蛋白是抑癌蛋白，通过结合E2A蛋白而抑制cadherin的表达，使细胞失去上皮表型，从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。

此外，随访3、5年显示MCL患者Id1高表达组生存率明显低于MCL患者Id1低表达组。这说明Idl表达水平和套细胞淋巴瘤患者远期预后也密切相关。由此可以推断Id1在套细胞淋巴瘤中与临床预后密切相关，并可能成为套细胞淋巴瘤预后不良、判断疗效的评价指标。未来将扩大病例数，进一步研究ID1在MCL分子作用机制。

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[收稿2015-04-03;修回2015-05-10]

(编辑：王福军)

·读者·作者·编者·

The expression of inhibitor of differentiation-1 (Id1) in mantle cell lymphoma and its relationship with prognosis

RenMingqiang1，TanTianhai1，SuJun2，GeJingli3

(1.Department of Hematology,The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China;2.Department of Pathology，The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China; 3.Department of Hematology,The Third Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563003,China)

[Abstract]Objective To investigate the expression level and its clinical significance of inhibitor of differentiation-1 (Id1) in mantle cell lymphoma. Methods The immunohistochemical staining was used to detect and analyze the expression of Id1 in 45 mantle cell lymphoma patients and 20 reactive hyperplasia lymphoid patients. The relationship between the expression of Id1 and clinic indicators of prognosis was anlyzed. Results The negative, weakly positive and strong positive expression rate of Id1 in mantle cell lymphoma tissues were 15.56%，31.11% and 53.33%, and unreactive hyperplasia lymphoid tissues were 65.00, 25.00% and 10.00% (P<0.05). The expression of Id1 was significantly correlated with LDH, clinical stage, extranodal infiltration and short-term effects (P<0.05), but was not correlated with age, gender, WBC, PLT and HB counts (all P>0.05). It was revealed by log-rank test that the one-year survival rate in mantle cell lymphoma patients with low and high expression of Id1 were 90.48% and 79.17% (P>0.05), three-year survival rate were 66.67% and 33.33% (P<0.05), five-year survival rate were 47.62% and 16.67% (P<0.05). It was showed by Kaplan-Meier’s survival analysis that the five-year survival in high expression of Id1 group was lower than the low expression group (P<0.05).Conclusion Id1 had high expression in mantle cell lymphoma tissues and was correlated with some indicators of prognosis. Mantle cell lymphoma patients with high expression of Id1 had lower survival rate, indicating that Id1 might be a bad prognostic indicator in mantle cell lymphoma .

[Key words]mantle cell lymphoma;reactive hyperplasia lymphoid; Id1

[文献标志码][中图法分类号] R733.4 A

[文章编号]1000-2715(2015)03-0266-05

[基金项目]遵义医学院附属医院硕士启动基金资助项目(NO：院字[2008]09)。