高效液相色谱法测定水中微囊藻毒素

廖　楠

（辽宁省环境监测实验中心辽宁沈阳110161）

高效液相色谱法测定水中微囊藻毒素

廖楠

（辽宁省环境监测实验中心辽宁沈阳110161）

微囊藻毒素本身含有七肽类干毒素成分，促癌作用极为明显，容易为居民用水带来较大威胁。对此问题，较多学者致力于构建相应的检测体系，使水中的微囊藻毒素得以确定，而所选用的检测方法主要以高效液相色谱为主，其可依托于自身重现性、灵活性以及准确性等优势，使微囊藻毒素测定更为精确。本文主要通过一定的试验方式，判断微囊藻毒素测定中高效液相色谱法的有效性。

高效液相色谱法；微囊藻毒素；测定

微囊藻毒素测定中HPLC的应用极为常见，其可直接引入如HPLC-FL、HPLV-UV或HPLC-CL等方式，其中前两种方式在应用中尽管可满足pg级检测限要求，然而整个操作过程中较为复杂，且有较多的杂质干扰，所以不具备较强的实用性。而后者在应用中较为简便易行，但因藻毒素在识别中容易因干扰问题而影响测定准确度。因此，本文在试验过程中对HPLC的应用考虑将这三种方式进行配合应用，可使水中微囊藻毒素得以有效检测。

1　水中微囊藻毒素检测中的HPLC应用试验分析

1.1试剂与仪器的选择与色谱条件设定

试验中在试剂选择方面，主要以MC-YR、MC-RR、MC-LR为标样，且选取相应的双蒸水、甲醇、三氟乙酸等作为试剂。在仪器选用方面，可将Agilent1100型设备引入，并将其他相应的超声波仪器、萃取柱以及可调氮吹仪等仪器引入。另外，试验中所设定的色相分析条件主要为，色谱柱恒温箱、进样量分别设定在25℃与20uL，而甲醇主要以45：55（V/V）为主，且在流动相方面，使水溶液包含0.05%的三氟乙酸。同时，做好紫外检测波长的设定，在此基础上使MC-YR、MC-RR、MC-LR等峰面积能够在谱图中体现出来，最后根据标样峰面积与谱图中显示的峰面积比值，便可判定藻毒素在水样中的浓度[1]。

1.2相关标准液的制备

试验过程中，可选择2.00mL甲醇，使其与0.100mg藻毒素进行相溶，对于该溶液应保证在放置中做好避光冷冻工作，其可作为储备液。因在标准液制备中，完全选用甲醇，将存在测定时间较短问题，容易影响最终结果。所以可考虑，在甲醇水溶液方面控制于55%，这样藻毒素测定中，可使其出峰时间保持适中，且测定结果准确度较高。

1.3实际样品的制备

在样品制备中，主要需考虑到铜绿微囊藻冷冻、藻毒素提取以及样品制备等问题。如在铜绿微囊藻方面，需将其置于一定环境下进行冷冻干燥，确保其在离心后能够使沉淀物形成干藻粉。而在提取藻毒素过程中，需选择10mL蒸馏水，将干藻粉置于其中，此时通过超声波仪器完成清液的提取，并对清液做好存储工作。另外，在制备样品过程中，主要需将制备好的清液进行过滤，在此基础上使10mL甲醇加入滤液中。此时需将萃取柱引入，使水样按照一定的流速从的萃取柱进行流过，以此达到富集浓缩的目标。完成这些操作后，要求对样品利用甲醇水进行净化，直至萃取柱被吹干后，将过滤后的溶液收集于瓶内。最后，对甲醇水溶液进行分析，完成微囊藻毒素浓度判定过程[2]。

2　HPLC测定微囊藻毒素的结果分析

2.1流动相选择与灵敏度判断

通过试验测定分析，在等度洗脱情况下，MC出峰在甲醇体积具有较高的分数时较早，以MC-RR为典型，其受到的干扰较为明显，但在甲醇体积分数减小情况下，出峰时间较晚，尤其MV-LR较为明显。另外，当流动相中甲醇体积分数为其55%情况下，无论MC-YR、MC-RR或MC-LR，在谱图中都保持平滑的谱线，且分离效果较为明显，杂质对测定结果的干扰影响较小。而从灵敏度情况看，根据试验中的色谱分析条件，测定中可发现三种藻毒素都具有较高的分离度，假定以3为信噪比，可测得的绝对量检测限可达到1ng。由此可见，在流动相、灵敏度等方面，HPLC测定方法的应用都可起到明显的效果。

2.2样品处理优化效果分析

试验过程中选取甲醇水溶液进行杂质的清除，能够判定在甲醇水溶液具有较高浓度的情况下，很容易使微囊藻毒素流失，不利于检测结果准确性的提高。所以在试验中考虑所选用的甲醇溶液水控制在10%用量上。另外在洗脱液方面，试验中主要以100%甲醇为主，这样可使浓缩时间得以缩短，杂质干扰问题因此得到解决，同时回收率与准确度等都可得到保障。所以HPLC方法运用下，样品处理优化效果也较为明显。

2.3HPLC方法精密度分析

在微囊藻毒素测定过程中，HPLC方法运用下可对其加标回收率进行判定，可得到MC-YR、MC-RR、MC-LR都超出94.0%的回收率。另外，在样品分析过程中也可发现，HPLC方法测定微囊藻毒素过程中，检测限可维持在0.01ug/L～0.05ug/L。由此得出HPLC在精密度、回收率等方面都较高[3]。

3　结语

微囊藻毒素的测定是保证水质的关键所在。实际测定中高效液相色谱法的应用可取得良好的效果，由文中试验可发现，HPLC方法应用下，流动相、灵敏度、样品处理优化以及精密度等方面都可得以保障，有利于微囊藻毒素的准确测定。

[1]施俭,景澍闽,陆峰,向华.在线固相萃取-二维高效液相-串联质谱法测定水中微囊藻毒素-LR[J].净水技术,2013,03: 52-54+58+66.

[2]林瑶,张琼,李一丹.固相萃取-高效液相色谱法测定水中痕量微囊藻毒素[J].中国卫生检验杂志,2010,09:2174-2175.

[3]冯桂学,刘莉,王明泉,孙韶华,贾瑞宝.在线固相萃取-液相色谱法测定水中3种微囊藻毒素[J].化学分析计量,2014,06:34-36.

辽河流域水环境安全监控与监测体系建设(课题编号：2012ZX07505-003)。