高效液相色谱法测定去痛片中四种成分的含量

齐学硕

哈药集团三精制药四厂 黑龙江省哈尔滨市 150000

高效液相色谱法测定去痛片中四种成分的含量

齐学硕

哈药集团三精制药四厂 黑龙江省哈尔滨市 150000

目的：使用高效液相色谱测定的方法对去痛片中所含有的非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因四种药物组成成分的含量进行测定。方法：在具体检测过程中利用C8柱来执行，使柱温与室温保持一致，然后使用己烷磺酸钠甲醇溶液-磷酸盐作为实验流动相，将其流速定义为1.3mL/min，另外其检测波长必须为220nm。其中缓冲液的浓度必须为0.005mol/L，溶液中的磷酸二氢钾溶液浓度需为0.05mol/L，其中需呀含有1%浓度的三乙胺，最后使用磷酸对溶液的pH值进行调节，直至其pH值叨叨3.0，具体溶液比例需保持在75:25的状态。结果：去痛片样本中的四种药物成分实现了完全分离，并能够始终保持良好的线性关系，其中非那西丁的加样回收率为99.4%，苯巴比妥的加样回收率为100.1%，氨基比例的加样回收率为99.4%，而咖啡因的比例为99.6%，RSD分别为0.90%、0.83%、0.70%和0.78（n=9）。结论：使用本方法进行测定所取得的结果正确率高，操作方法简单，能够实现对去痛片产品质量进行有效控制的目的。

氨基比林；非那西丁；咖啡因；苯巴比妥；高效液相色谱法

去痛片是一种含有多类药物成分的复方药物制剂，其中主要含有非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因四种成分，该药物通常用于镇痛治疗，具有降温解热的功能，可以对头痛、牙痛、关节痛等疼痛现象进行有效缓解。而其中每种药物成分的含量拥有非常严格的测定标准，这样才能保证该类医药产品的生产之质量，以往人们会使用对其中的各项成分分别进行含量检测的方法，然而这种方法不仅操作过程比较麻烦，且测定过程还会受到一些外界因素影响，测定精确程度无法保证。本文将对使用HPLC方法对去痛片中四种成分含量进行测试的具体方法进行分析。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10AT全自动高效液相色谱仪、岛津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp检测器，SIL-10ADvp自动进样器，岛津CLASS-VP色谱工作站；Agilent 1100全自动高效液相色谱仪，Agilent Instr μment色谱工作站；Sartoriμs BP211D十万分之一天平。

1.2 试药

氨基比林、非那西丁、咖啡因、苯巴比妥对照品均由中国药品生物制品检定所提供。去痛片样品来源于2004年国家重点抽验品种的抽样，共有6个厂家的9批样品，编号A～J。磷酸二氢钾、三乙胺为分析纯，己烷磺酸钠由山东省禹王实业总公司化学试剂厂生产，磷酸为优级纯，甲醇为色谱纯，水为PALL高纯水。

1.3 对照品溶液的配制

取氨基比林对照品75mg、非那西丁对照品75mg和咖啡因对照品25mg，精密称定，置于同一50mL容量瓶中，加甲醇5mL，超声2min，再加25%甲醇适量，超声2min，放冷至室温，用25%甲醇稀释至刻度，摇匀。另取苯巴比妥对照品15mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加甲醇2mL使溶解，再用25%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述2种对照品贮备液各5mL，置50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2 试验方法及结果

2.1 色谱条件

色谱柱采用：（1）Inertsil C8柱（150mm×4.6mm，5μm）；（2）Venμsil XBP-C8柱（150mm×4.6mm，5μm），柱温为室温。流动相为 0.005moI/L己烷磺酸钠甲醇溶液-磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，含1%三乙胺，用磷酸调节pH值至3.0）（25：75），流速为1.3mL/min，检测波长为220nm。

2.2 样品溶液配制

取样品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于氨基比林75mg）置50mL容量瓶中，加甲醇5mL，超声2min，再加25%甲醇适量，超声5min，放冷至室温，用25%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2.3 色谱行为

色谱柱（1）上4成分的出峰顺序分别为氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁，各组分峰的分离度均大于 2.2，理论板数均大于4000；色谱柱（2）上4成分的出峰顺序分别为氨基比林、咖啡因、非那西丁和苯巴比妥，各组分峰的分离度均大于 2.5，理论板数均大于5000。

2.4 线性试验与范围

对照品贮备液：取氨基比林、非那西丁各 150mg，咖啡因50mg，苯巴比妥15mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加甲醇10mL，超声2min，再加25%甲醇适量，超声2min，放冷至室温，用25%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取对照品贮备液1、2、3、5、10、15、20mL分别置于100mL容量瓶中，用流动相稀释到刻度，摇匀。精密量取对照品贮备液2mL，3mL分别置25mL容量瓶中，用流动相稀释到刻度，摇匀。分别精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.5 加样回收率试验

（1）精密称取已知含量的样品（D，E，F）各1份，照2.2项下制备成含氨基比林约为1.50mg/mL的溶液，每份样品溶液分别精密量取5mL，分别置100mL容量瓶中，分别精密加入1.3项下的2种对照品贮备液各3mL，用流动相稀释至刻度，摇匀即得；（2）精密称取已知含量的样品（A，B，C）各1份，照2.2项下制备成含氨基比林约为0.15mg/mL的溶液，每份样品溶液分别精取1份，等体积加入1.3项下的对照品溶液；（3）精密称取已知含量的样品（G，H，J）各1份，照2.2项下制备成含氨基比林约为1.50mg/mL的溶液，每份样品溶液分别精密量取3mL，分别置50mL容量瓶中，精密加入1.3项下的2种对照品贮备液各3mL，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。分别精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算，得平均回收率：氨基比林为99.4%，咖啡因为99.6%，非那西丁为99.4%，苯巴比妥为100.1%；RSD分别为0.70%、0.78%、0.90%和0.83%（n=9），结果表明，本法准确度好。

2.6 重复性试验

选择适当容量的样品J，按照2.2项中所叙述的配置方法制备出5份实验样品，使用这5分样品进行实验可以测出四种成分非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因在药物产品中的平均含量分别为96.7%、96.7%、97.3%和104.2%、，RSD分别为0.34%、0.89%、0.36%和1.90%，该结果说明使用此方法进行实验具有良好的重复性。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

在对这四种药物成分的含量进行测定时需要首先对测定溶剂进行选择，由于这四种被测试成分的溶解性不同，在进行测试之前需要先分别向这四种药物成分中添加甲醇，然后结合超声操作将药品成分中的脂溶性物质进行分解；然后再向其中添加适量的浓度为 25%的甲醇再辅以超声操作将成分中的水溶性物质进行分解，从而简化药物样品的制备过程，节约样品制备时间。这种测定方法在使用过程中所需要的溶解量较小，对环境保护工作有十分积极的影响，促进实验流动相与样品进样后实现完美融合。

3.2 辅料的干扰

通过对参与实验的药品样本成分含量进行分析，我们可以得出辅料不具有干扰性，该方法具备极好的专属性，且实验结果的精确度较好。

3.3 方法的耐用性

通过更换液相色谱仪的种类和生产厂家进行反复试验，执行对C8的测定工作，我们可以发现实现都可以得到质量较高的色谱行为，由此说明该试验方法具有非常强的耐用性。

3.4 两种测定方法结果的比较

使用容量法对去痛片中的四种药物含量进行测定所得出的结果从总体上进行对比高于本文中分析的高效液相色谱法，然而对于除咖啡因外的其他是那种成分这两种方法进行含量测定，其结果之间并不存在很大差异，而使用药品样本不同会对测定结果产生较大差异，由此可以得出使用容量法进行成分测定结果会受到一定干扰产生误差，特别是在对咖啡因成分进行测定时。所以使用高效液相色普法对咖啡因成分进行测定可以实现对药品质量进行严格控制的目标。

[1]杨直，侯思恩.HPLC-ELSD法测定去痛片中氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁的含量[J].药物分析杂志.2006（12）

[2]王桂芳，张守尧，贺巍.胶束动电毛细管色谱法分离测定去痛片中的4种组分[J].第一军医大学学报.2000（04）

R927.2

A

1672-5018（2016）11-243-01