试论多色流式细胞术在分析急性白血病患者免疫学表型中的应用价值

吕 浩 黄 宣 张智熊 高红梅

（云南省红河州第一人民医院 云南 红河 661100）

流式细胞术是临床上对AL患者进行免疫分型的重要手段。传统的FSC/SSC 设门法无法准确地分辨出原始细胞与正常的成熟细胞。近年来，临床上通常使用CD45/SSC 设门法对急性白血病患者进行免疫分型。该方法是利用造血细胞CD45的表达量与细胞分化程度之间的关系来分辨原始细胞与正常的成熟细胞。为了提高对AL患者进行免疫分型的准确性，我院将该技术应用在AL患者的免疫分型中，取得了较理想的效果。现报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究的对象是2014年3月～2015年 4月期间笔者在长沙某医院进修时收集的初诊及从外院送检的76例AL患者。在这76例患者中,有男性患者40例，女性患者36例。他们的年龄在4～82岁之间，平均年龄为（53.2±6.7）岁。使用FAB分型标准对这些AL患者进行分型，其中，有19例M0/M1患者，有17例 M2患者，有11例M3患者，有4例 M4患者, 有9例M5患者，有8例M6患者，不明确具体分型的患者有8例。

1.2 试剂与仪器

本次研究使用的抗体为Beckman Coulter公司生产的CD45-PC5、MPO-F ITC/cCD79a-PE/cCD3-ECD、IgG1-FITC/IgG1-PE/CD45-PC5、CD3-FITC/CD19-PE/CD45-PC5三色荧光抗体。本次研究使用的溶血剂和破膜剂均购于CALTAG公司。本次研究使用的检测仪器为Beckman Coulter EPICSXL 型流式细胞仪。

1.3 检测方法

采集这76例患者的血液标本，将其放在EDTA抗凝管中。在100微升的血液样本中加入20微升的单克隆抗体，将其置于室温的环境中孵育，避免阳光对其进行直射，孵育的时间为15分钟。然后，在血液样品中添加溶血剂，对其中的红细胞进行溶解，并将血液样本放到离心机中进行离心处理，去掉血清，加入PBS液，对血液样品进行细胞内细胞因子的染色处理。使用流式细胞仪对这些患者的血液样本进行检测。对检测样本进行光路和流路的校正，将变异系数控制在2%以下。然后，对检验样本进行三色荧光标记同型阴性对照。每个测定管中收集8000个细胞，将细胞分为粒细胞群、单核细胞群、淋巴细胞群、不成熟淋巴细胞群、不成熟髓细胞群、红细胞群及碎片细胞群。使用抗原CD34、CD79a、MPO对这些细胞群进行破膜处理，然后对其进行标记。使用CD45/SSC设门法对这8000个细胞进行免疫分型。在进行免疫分型的过程中，如幼稚细胞群中抗原的表达细胞＞20%，则为阳性[1]。

1.4 统计学方法

我们采用SPSS19.0统计学软件包对本研究中的数据进行分析处理，计量资料用均数（±s）表示，计数资料采用X2检验。P＜0.01，表示两组的差异具有显著性，具有统计学意义。

2 结果

2.1 对本组患者白血病免疫学表型分布情况的分析

在这76例患者中,有21例ALL患者（占27.6%），有55例AML患者（占72.4%）。

2.2 对本组中AML、ALL患者CD抗原表达情况的分析

在本组的55例AML患者中，有28例患者(占50.9%)的免疫学表型为Ly+AML，有22例患者(占40.0%)的免疫学表型为淋系抗原CD7，有3例患者(占5.5%)的免疫学表型为CD8，有1例患者(占1.8%)的免疫学表型为CD19，有1例患者(占1.8%)的免疫学表型为CD10。在本组的21例ALL患者中，有6例患者(占28.6%)的免疫学表型为Ly+AML，有7例患者(占33.3%)的免疫学表型为My+ALL，有6例患者（占28.6%）的免疫学表型为髓系抗原CD13，有1例患者（占4.8%）的免疫学表型为CD33，有1例患者（占4.8%）的免疫学表型为CD14。在本组的55例AML患者中，与其他免疫学表型的患者所占的比例相比，免疫学表型为Ly+AML的患者所占的比例较高，差异显著，具有统计学意义(P＜0.01)。在本组的21例ALL患者中，与其他免疫学表型的患者所占的比例相比，免疫学表型为My+ALL的患者所占的比例较高，差异显著，具有统计学意义 (P＜0.01)。

2.3 对本组中ALL患者B细胞系、T细胞系CD抗原表达情况的分析

在本组的21例ALL患者中，有17例患者（占81.0%）B细胞系CD抗原的表达呈阳性（其中cCD79a的表达最高，其次为CD10、CD20），有4例患者（占19.0%）T细胞系CD抗原的表达呈阳性（均为cCD3、CD7）。

3 讨论

近年来，临床上通常使用流式细胞术对急性白血病患者进行免疫分型，这对确保此病患者的临床诊治及预后具有重要意义[2]。有研究发现，该技术能准确、直观地量化白血病患者细胞表面抗原的表达情况，具有快速、简便、灵敏度高等优点[3]。

总之，用多色流式细胞术对AL患者进行免疫学表型分析的效果显著。此检测方法值得在临床上推广应用。

[1] 沈红强, 汤永民, 杨世隆,等. 多色流式细胞术在 222例儿童急性.白血病免疫分型中的应用[J] . 中华儿科杂志, 2003,41(5) : 334- 337.

[2] 林茂芳, 杨惠英, 少华, 等. 杂合性急性白血病( 附 13例报告 )[J] . 实用肿瘤杂志, 1995, 10(3) : 148.

[3] 刘艳荣, 付家瑜, 常艳, 等. C D 117在白血病免疫分型中的意义[J] . 中华检验医学杂志, 2000, 23(4) : 211-213.