水通道蛋白在子宫内膜异位症的作用研究

李莹莹

·临床医学·

水通道蛋白在子宫内膜异位症的作用研究

李莹莹

目的探讨水通道蛋白(AQP)在子宫内膜异位症(EMs)中的作用。方法80例妇科患者作为研究对象,60例为子宫内膜异位症患者中32例取在位内膜作为Eu-Em组,28例取异位内膜作为Ec-Em组,另20例正常子宫内膜妇科取正常子宫内膜作为Co-Em组。测定两组AQP-1与AQP-8的mRNA及蛋白表达情况,并对比分析。结果Ec-Em组mRNA与蛋白表达的△CtAQP-1、△CtAQP-8值为(11.98±2.34)、(0.06±0)、(11.09±0.59)、(0.02±0),与其他两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；Eu-Em组与Co-Em组mRNA与蛋白表达的△CtAQP-1、△CtAQP-8值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论子宫内膜异位症患者有较强的AQP-1表达,异位内膜相比在位内膜与正常内膜有明显变化,可见AQP及其相关蛋白可能与EMs病理发生与发展有关,需加强重视。

子宫内膜异位症；水通道蛋白；血管内膜生长因子；作用

子宫内膜异位症发生属于不断的过程,对于如何预防疾病复发则成为国际性难题,而研究认为从疾病发生初始阻断其种植十分关键［1］。基于此,针对子宫内膜种植期间子宫内膜细胞的迁徙分子机制进行研究,对于防治子宫内膜异位症发生有着重要的意义,而其中以疏水性蛋白质最为重要,介导液体转运及维持机体渗透平衡,甚至还参与并促进细胞的迁徙,以及调节糖原代谢、脂肪代谢等,功能广泛［2］。细胞迁徙属于子宫内膜异位症发生与发展重要环节,揭示EMs病理发生与发展可能和AQP-1等有关。为了进一步探讨AQP-1等与子宫内膜异位症的作用关系,本院实施了相关对照研究,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2014年1月～2015年12月收治的妇科患者80例作为研究对象,60例为子宫内膜异位症患者,其中32例取在位内膜作为Eu-Em组,28例取异位内膜作为Ec-Em组,另20例正常子宫内膜妇科取正常子宫内膜作为Co-Em组。入选患者有完整临床资料,自愿接受本研究,同时排除心肝肾等功能异常、接受过其他激素或抗子宫内膜异位症药物治疗的患者。Eu-Em组年龄21～43岁,平均年龄(30.5±6.6)岁；已婚28例,未婚4例。Ec-Em组年龄20～45岁,平均年龄(30.2±6.9)岁；已婚25例,未婚3例。Co-Em组年龄20～47岁,平均年龄(30.8±6.7)岁；已婚19例,未婚1例。三组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 AQP-1与AQP-8的mRNA测定 采取实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定AQP-1与AQP-8的mRNA表达情况,获取子宫内膜组织标本后液氮速冻,放置在-80℃超低温冰箱中保存,检测时用Trizol提取标本总RNA；对RNA纯度进行检测,确保样本RNA A260/280在1.8～2.0。每个样本分别取总RNA 2.5 μg实施逆转录,取其产物2 μl的cDNA作为模板,采取荧光定量PCR仪实施PCR扩增,并采取熔点曲线进行PCR反应特异性判断,根据△Ct(荧光曲线所得)计算结果,计算方法为△CtAQP-1= CtAQP-1-CtGAPDH,△CtAQP-8=CtAQP-8-CtGAPDH。

1.2.2 AQP-1与AQP-8蛋白表达水平测定 通过蛋白质印迹法(Western blotting)进行测定。将子宫内膜组织剪碎,置入裂解液冰实施快速匀浆,并放置在冰上40 min,以14000 r/min的离心速度在4℃下离线处理,15 min后取上清液；利用BCA法实施蛋白质定量,分装保存；每个样品均取50 μg实施SDSPAGE电泳分离,电压为80 V,时间为1.5 h,电泳之后以硝酸纤维素膜湿转化,电流为175 mA,时间为45 min,之后以牛奶封闭处理1 h,AQP-1与AQP-8一抗均采取鼠单克隆抗体,二抗则为HRP标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白(Ig)G(H+L),之后以化学发光显色试剂盒显影与化学发光成像分析仪成像,最后用Quantity one软件处理［3］。

1.3 观察指标 观察记录三组患者内膜中AQP-1与AQP-8的mRNA水平与蛋白表达水平,并对比分析。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

Ec-Em组mRNA与蛋白表达的△CtAQP-1、△CtAQP-8值为 (11.98±2.34)、(0.06±0)、(11.09±0.59)、(0.02±0), 与其他两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；Eu-Em组与Co-Em组mRNA与蛋白表达的△CtAQP-1、△CtAQP-8值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 三组AQP-1、AQP-8的mRNA与蛋白表达水平比较(±s)

表1 三组AQP-1、AQP-8的mRNA与蛋白表达水平比较(±s)

注：与其余两组比较,aP<0.05

组别 例数 △Ct AQP-1 △CtAQP-8 mRNA 蛋白表达 mRNA 蛋白表达Co-Em组 20 15.67±0.94 0.13±0.04 8.79±0.52 0.12±0.04 Ec-Em组 28 11.98±2.34a 0.06±0a 11.09±0.59a 0.02±0aEu-Em组 32 14.56±1.76 0.09±0.02 8.67±0.97 0.68±0.04

3 讨论

子宫内膜异位症属于常见妇科疾病,尽管其发病病因与机制目前无确切统一定论,但普遍认为与水通道蛋白家族(AQPs)有关［4］。AQPs可介导液体转运,维持机体的渗透平衡,同时还能参与细胞的迁徙以及调节脂肪与糖代谢等,有着十分广泛的功能。近几年,一些研究显示AQPS在女性生殖系统疾病发生及发展中均发挥了重要的作用,而细胞迁徙是子宫内膜异位症主要环节,可见子宫内膜异位症发生与发展和AQPs密切相关［5］。此外,血管内皮生长因子是血管形成的主要因子,而且在肿瘤血管生成中有着重要作用［6］。基于此,作者参阅相关文献及结合自身经验,认为AQPS及其mRNA等对于子宫内膜异位症发病机制有着重要的作用,需加强研究与探讨。

本次研究主要针对AQPS成员之一AQP-1的mRNA及其蛋白质表达在子宫内膜异位症患者中的表达进行了研究,结果显示异位症患者异位内膜AQP-1的mRNA及其蛋白质表达水平要显著高于正常子宫内膜及在位内膜(P<0.05)。从研究结果中可以看出,AQP-1的mRNA及其蛋白质表达在子宫内膜异位症患者中的表达呈现一定的正相关,这结果在一定程度上为“在位内膜决定论”提供了新的依据,同时证实异位内膜组织中前述二者的表达有一定相关性,显示二者在子宫内膜异位症中可能有协同关系,共同促进其发生与发展,同时本研究显示异位内膜中AQP-8的mRNA及其蛋白质表达低于在位内膜及正常内膜,与相关文献结果类似［7］。

综上所述,子宫内膜异位症患者有较强的AQP-1表达,相比在位内膜与正常内膜妇女有明显变化,可见AQP及其相关蛋白可能与EMs病理发生与发展有关,需加强重视。

［1］韦成厚,牛刚,沈宏伟,等.子宫内膜异位症异位和在位内膜中水通道蛋白1的表达及意义.中国计划生育学杂志,2012,20(3):156-159.

［2］廖百花,张秋实,赵爱萍,等.水通道蛋白1与子宫内膜异位症新生血管形成的关系.广东医学,2013,34(16):2450-2453.

［3］宋誌,庞淑洁.水通道蛋白1在子宫内膜异位症癌变中的表达及意义.中国现代医学杂志,2011,21(7):811-813,817.

［4］韦成厚,牛刚,沈宏伟,等.水通道蛋白1在子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中的表达及意义.实用妇产科杂志,2012,28(4):310-312.

［5］韦成厚,周蓓,牛刚,等.水通道蛋白1在子宫内膜异位症发病机制中的作用.广东医学,2011,32(10):1350-1352.

［6］郭晓燕,吴瑞瑾,林俊,等.子宫内膜异位症在位和异位内膜水通道蛋白的表达.吉林大学学报(医学版),2011,37(6):1015-1018.

［7］郭晓燕.水通道蛋白在子宫内膜异位症患者在异位内膜组织的表达.浙江大学,2011.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.24.007

2016-11-10］

广东省佛山市卫生局科研项目(项目编号：2014189)

528100 佛山市三水区人民医院妇科