原发性肝癌彩色多普勒超声血流分级与微血管生成的关系

贾丛丛 周玮 何国浓

[摘要] 目的 探讨原发性肝癌彩色多普勒超声血流分级与肝癌组织血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、微血管密度（MVD）表达的关系。 方法 选择2012年1月～2015年8月在我院行手术治疗的原发性肝癌患者80例，彩色多普勒超声检查采用美国GE v730型超声诊断仪，采用免疫组化SP法染色，操作按试剂盒操作说明进行，分别进行VEGF、MMP-9、CD31染色，CD31反映MVD。 结果 80例患者，0级12例，Ⅰ级26例，Ⅱ级23例，Ⅲ级19例；Spearman等级相关分析，超声血流分级与临床分期呈正相关（r=0.489，P<0.05）。随着超声血流分级增加，VEGF、MMP-9、MVD表达呈升高趋势，各血流分级VEGF、MMP-9、MVD表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），Spearman等级相关分析VEGF、MMP-9、MVD表达与超声血流分级均呈正相关性（r=0.521、0.589、0.715，P<0.05）。 结论 超声血流分级对肝癌病理特征有一定的判断价值，血流分级与肝癌组织微血管生成密切相关，是一种安全性高的无创辅助检查方式。

[关键词] 原发性肝癌；血流分级；微血管生成；微血管密度

[中图分类号] R445.1；R735.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2016）09-0103-03

[Abstract] Objective To explore the relationship between color Doppler ultrasound blood flow liver cancer and liver cancer tissue grading of vascular endothelial growth factor（VEGF）， matrix metalloproteinase-9（MMP-9）， microvessel density（MVD） expression. Methods From January 2012 to August 2015 selected primary liver cancer patients in our hospital surgical treatment of 80 cases， color Doppler ultrasound examination was used by the US GE v730 diagnostic ultrasound， immunohistochemical staining SP was performed， operation press kit operating instructions， respectively VEGF， MMP-9， CD31 stained， CD31 reflected MVD. Results 80 patients， 0 grade 12 cases， Ⅰ grade 26 cases， Ⅱ grade 23 cases， Ⅲ grade 19 cases， Spearman rank correlation analysis， ultrasonic flow grade were positively correlated with the clinical stage（r=0.489， P<0.05）. With the increase of ultrasonic flow grade， VEGF， MMP-9， MVD expression increased， and each flow grade VEGF， MMP-9， MVD expression， the differences were statistically significant（P<0.05）， Spearman rank correlation analysis of VEGF， MMP-9， MVD expression and ultrasonic flow grade were positively correlated（r=0.521， 0.589， 0.715， P<0.05）. Conclusion Ultrasound flow grade pathological features of liver cancer have a certain value judgments， flow grade and tumor tissue angiogenesis is closely related， is a safe， noninvasive examinations way.

[Key words] Hepatocellular carcinoma； Flow grade； Angiogenesis； Microvessel density

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤，由于肝癌早期症状无特异性，诊断就诊时往往已是晚期，患者预后差。恶性肿瘤对血供有明显依赖并促进微血管生成，丰富的血供使癌细胞获得快速生长、转移的条件，加快病变进展[1]。影像学检查是发现和诊断肝癌的重要手段，彩色多普勒超声是一种简便、快捷、无创、安全的检查方式，可发现肝脏占位病变，并通过对肝脏占位病灶内血流信号参数的观察可以了解肿块血供[2，3]。血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）参与组织中新生血管形成，VEGF、MMP-9高表达与癌细胞生长和转移密切相关[4-6]。本研究对原发性肝癌患者彩色多普勒超声血流分级与肝癌组织VEGF、MMP-9、MVD表达的关系进行分析，探讨彩色多普勒超声在肝癌早期筛查中的作用。现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2012年1月～2015年8月在我院行手术治疗的原发性肝癌患者80例，均经CT、MRI等影像学检查、病理活检或术后病理检查证实为原发性肝癌，术前均行腹部彩色多普勒超声检查，排除弥漫性肝癌及其他恶性肿瘤。男57例，女23例，年龄41～73岁，平均（51.23±8.34）岁；结节型73例，巨块型7例；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期40例，Ⅲ期19例，Ⅳ期6例。

1.2 方法

彩色多普勒超声检查采用美国GE v730型超声诊断仪进行，采用腹部探头，探头频率为5.0 MHz。检查前患者至少空腹8 h，检查时取仰卧位，由专业超声科医师行腹部超声检查，观察肝脏大小、形态、回声，并仔细观察肿块位置、大小、形态、边界、病灶内部回声和血运情况、病灶周围回声等。肝脏病理样本组织经石蜡包埋，修复后采用免疫组化SP法染色，操作按试剂盒操作说明进行，分别进行血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、CD31染色，CD31反映微血管密度（MVD）[7，8]。

1.3 观察指标

观察患者肝脏肿瘤超声征象及内部血运分级，血运分级[9]：0级为肿瘤内无明显血流信号；Ⅰ级为肿瘤内有少量血流信号，信号呈点状；Ⅱ级为肿瘤内有较丰富血流信号，信号呈条状；Ⅲ级为肿瘤内血流丰富，存在多条粗大血管。VEGF、MMP-9组织染色结果判定：细胞内有棕黄色颗粒为阳性，在高倍显微镜下观察5个视野，每个视野下计数200个细胞中阳性细胞数量，取平均数，计算平均阳性率[10]。MVD计数，细胞内呈棕黄色为阳性，肝细胞间染色细胞团、血管状或管腔状计为1个血管，低倍镜下选择染色丰富区域，高倍镜下进行计数，多个高倍镜视野计数取平均数[11]。

1.4 统计学处理

数据采用SPSS22.0统计学软件进行处理，计数资料采用%表示，计量资料采用均数±标准差表示，采用方差分析，相关性采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 超声血流分级与临床分期关系

80例患者中，0级12例，Ⅰ级26例，Ⅱ级23例，Ⅲ级19例，见封三图5、6。Spearman等级相关分析，超声血流分级与临床分期呈正相关（r=0.489，P<0.05），见表1。

2.2超声血流分级与VEGF、MMP-9、MVD表达的关系

随着超声血流分级增加，VEGF、MMP-9、MVD表达呈升高趋势，各血流分级VEGF、MMP-9、MVD表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05），Spearman等级相关分析VEGF、MMP-9、MVD表达与超声血流分级均呈正相关（P<0.05），超声血流分级越高肝癌组织微血管生成越多，见表2。

3讨论

新生血管是恶性肿瘤侵袭期重要的表现，恶性肿瘤通过释放大量促血管生成相关因子，诱导肿瘤内及周围形成大量微血管，从而为其快速生长侵袭提供丰富营养，而癌细胞可通过血液循环进行转移播散，可见早期发现肿瘤组织中新生血管及其分布有利于判断病变性质及进展程度，积极采取治疗措施[12]。肝癌属高血管实性肿瘤，对血供需求高，因此，肝癌组织内微血管密度可以反映肝癌组织侵袭性[13]。新生血管的形成需要血管内皮细胞增殖、迁移、管腔形成及外基质重塑，在此过程中VEGF促进血管内皮细胞增殖、迁移，增加血管通透性，促进新生血管形成；MMP-9促进细胞外基质重塑，并释放VEGF，促进新生血管形成及癌细胞转移[14，15]。

MVD是组织中微血管形成情况最准确的指标，通过对组织中微血管密度的观察，了解血管分化程度是高血管实性肿瘤预后的重要指标，然而MVD需要进行有创操作，在恶性肿瘤早期检查中应用受到一定限制[16，17]。病灶内的大量新生血管使其内部充满丰富血流，彩色多普勒超声可通过无创、安全的方式观察血流速度、流量、方向等血流信号，从而较为直观地观察到肝癌组织中的血运，有助于判断病变进展程度[18]。通过对血流进行分级可对病灶内血流进行半定量分析。血运分级：0级为肿瘤内无明显血流信号；Ⅰ级为肿瘤内有少量血流信号，信号呈点状；Ⅱ级为肿瘤内有较丰富血流信号，信号呈条状；Ⅲ级为肿瘤内血流丰富，存在多条粗大血管，逐步提高的分级反映病灶内血运丰富程度的提高，超声检查有很好的重复性。

本研究对80例不同临床分期的肝癌患者彩色多普勒超声检查血流分级与肝癌临床分期进行分析，结果显示，早期肝癌血流分级明显较低，说明肿瘤仍处于侵袭前期，但已有部分Ⅱ期肿瘤出现了丰富的血流信号，分级在Ⅱ、Ⅲ级已有可探测的新生血管形成，进入侵袭活跃阶段，提示肿瘤处于较为旺盛的生长、侵袭过程，病情进展迅速；晚期肝癌普遍存在丰富血供，恶性程度及转移风险高，符合肝癌生长、侵袭、转移的病理过程[19]。统计学分析显示，超声血流分级与肝癌临床分期呈正相关，说明通过彩色多普勒超声检查血流分级可以反映肝癌病理特征及进展程度。通过超声血流分级与VEGF、MMP-9、MVD表达分析，结果显示，血流分级越高，VEGF、MMP-9、MVD表达越高，均呈正相关性，反映肝癌组织通过促进VEGF、MMP-9高表达，实现新生血管生成，增加微血管密度和通透性，获取更多的营养物质达到快速生长、侵袭，癌细胞更容易游离进入血液循环而转移，也与肝癌临床分期特征相符[20-22]。高密度微血管形成密集血管网络，彩色多普勒超声获取更多、更强血流信号。

综上所述，彩色多普勒超声血流分级可对肝癌血供丰富程度进行半定量判断，反映肝癌组织侵袭性及病变进展程度，具有无创、安全、高效、可重复检查、操作简便、费用低等优势，在肝癌早期筛查及诊断、治疗中有较高的应用价值。

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（收稿日期：2015-12-25）